【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体地，本专利技术涉及nkp80抗体及其应用。更具体地，本专利技术涉及能够特异性识别nkp80的抗体或其抗原结合片段、双特异性结合分子、核酸分子、表达载体、重组细胞、组合物、药物以及检测nkp80的试剂盒。
技术介绍
1、t细胞和自然杀伤细胞(natural killer cells，nk细胞)作为抗肿瘤免疫应答中非常重要的两类免疫细胞，在对肿瘤的直接杀伤方面起着重要作用。nk细胞是组成固有免疫系统的重要成员，与t细胞不同的是，nk细胞并不表达抗原特异性受体。nk细胞本身具有广谱的肿瘤杀伤能力，在增强抗体和t细胞应答中也起到了重要作用。目前，基于nk细胞的肿瘤免疫治疗形式多样，采用的手段也不尽相同。
2、nkp80蛋白是c型凝集素样受体，它通常表达在外周血nk细胞表面和nkt细胞表面，被作为活化性nk细胞的表面标志。nkp80通常以二聚体形式表达在细胞表面，它跨膜区缺少电荷氨基酸，同时胞内也没有常规的itam活化基序(alessandro moretta et al,2001)。有研究发现nkp80也表达在一小群cd8 t细胞表面，这群细胞具有效应记忆表型，它们可以促进t细胞响应从而更好地发挥免疫应答(sabrina kuttruff et al,2009)。aicl蛋白是nkp80的配体，它通常表达在髓系细胞表面，在toll样受体的刺激下髓系细胞会上调表达aicl。因此，在nk细胞与单核细胞互作时，nkp80会刺激髓系细胞释放促炎性细胞因子，这对于在炎症的起始和维持都发挥着重要作用(stefan
3、双特异性抗体是可同时特异性结合两个抗原位点的抗体。用于肿瘤治疗的双特异性抗体按照其作用机制可以分为三类：再导向效应细胞；免疫调节；靶向肿瘤细胞受体双重结合。其中，用于再导向功能的抗体在其中占据大多数，目前已经上市的两个用于肿瘤治疗的抗体也是基于t细胞再导向。根据双特异性抗体的特性，它也可以很好的运用于其他治疗体系中，例如双重免疫调节或者靶向同一细胞膜的两个分子。
4、目前公开的nkp80单克隆抗体和双克隆抗体种类较少，种类有待进一步丰富，特异性有待改善。
技术实现思路
1、本申请是基于专利技术人对以下事实和问题的发现和认识作出的：
2、nkp80在外周血nk细胞表面和nkt细胞表面，被作为活化性nk细胞的表面标志。在nk细胞与单核细胞互作时，nkp80会刺激髓系细胞释放促炎性细胞因子，这对于在炎症的起始和维持都发挥着重要作用，nkp80分子可以作为一个很好的潜在治疗肿瘤的靶点。
3、本申请的专利技术人成功地筛选到一种鼠源抗nkp80单克隆抗体，该单克隆抗体与人或食蟹猴nkp80蛋白胞外段具有较高的结合活性，能够靶向结合高表达nkp80的细胞，也能够结合人原代t细胞和nk细胞(细胞表面表达nkp80蛋白)。
4、另外，利用所述抗nkp80抗体制备的双特异性结合分子同样能够特异性的靶向结合人nkp80蛋白和食蟹猴nkp80蛋白，且所述双特异性结合分子能够靶向结合高表达nkp80和b7h6的细胞，从而治疗或者预防疾病，如肿瘤(例如结直肠癌等)。例如，含有nkp80 scfv的靶向b7h6的双特异性抗体能够促进pbmc特异性地杀伤b7h6+的肿瘤细胞。
5、在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种抗体或抗原结合片段。根据本专利技术的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包括：
6、分别如seq id no:1、2和3或者与seq id no:1、2和3具有至少80％同一性的氨基酸序列所示的重链可变区cdr1、cdr2、cdr3序列；和/或
7、分别如seq id no:4、5和6或者与4、5和6具有至少80％同一性的氨基酸序列所示的轻链可变区cdr1、cdr2、cdr3序列。根据本专利技术实施方案的抗体或抗原结合片段能够与人或食蟹猴nkp80蛋白进行特异性结合，且具有较高的亲和力，同时利用该抗体或抗原结合片段也为基于nkp80的再导向型多特异性抗体开发提供基础。
8、根据本专利技术的实施方案，所述抗体或抗原结合片段还可以进一步包括下列附加技术特征中的至少之一：
9、根据本专利技术的实施方案，所述抗体或抗原结合片段为鼠源抗体或抗原结合片段。
10、根据本专利技术的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包括：
11、seq id no:1所示的重链可变区cdr1序列，seq id no:2所示的重链可变区cdr2，seq id no:3所示的重链可变区cdr3，seq id no:4所示的轻链可变区cdr1，seq id no:5所示的轻链可变区cdr2，seq id no:6所示的轻链可变区cdr3。
12、hcdr1氨基酸序列：dyymn seq id no:1
13、hcdr2氨基酸序列：dihpnnggtsynqkfkg seq id no:2
14、hcdr3氨基酸序列：dyggtytnwaqnyfdy seq id no:3
15、lcdr1氨基酸序列：rasqsvstpsysymh seq id no:4
16、lcdr2氨基酸序列：yasnles seq id no:5
17、lcdr3氨基酸序列：qhsweipwt seq id no:6
18、根据本专利技术的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包括重链fr区和轻链fr区中的至少之一。
19、根据本专利技术的实施方案，所述重链fr区和轻链fr区的至少之一的至少一部分来自于灵长目源抗体和鼠源抗体或其突变体中的至少之一。
20、根据本专利技术的实施方案，所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区进一步包含鼠源κ链或鼠源κ链变体的轻链fr区、或者鼠源λ链或鼠源λ链变体的轻链fr区；其中，抗体重链可变区进一步包含鼠源igg1或其变体的重链fr区、或igg2或其变体的重链fr区、或igg3或其变体的重链fr区。
21、根据本专利技术的实施方案，所述抗体或抗原结合片段包括如seq id no:7所示的重链可变区；和/或
22、如seq id no:8所示的轻链可变区。
23、seq id no:7：
24、evqlqqsgpelvnpgasvkiscktsgytftdyymnwvkqshgkslewigdihpnnggtsynqkfkgkatltvdkssstaymelrsltsedsavyycardyggtytnwaqnyfdywgqgttltvss
25、seq id no:8
26、divqtqspaslavslgqratiscrasqsvstpsysymhwyqqkpgqppkllikyasnlesgvparfsgsgsgtdftlnihpveeedtatyycqhsweipwtfgggtklei本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括：
3.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括：重链FR区和轻链FR区中的至少之一；
4.根据权利要求3所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括：
5.根据权利要求1～4任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段含有重链恒定区和轻链恒定区的至少之一，所述重链恒定区和轻链恒定区的至少之一的至少一部分来自于灵长目源抗体和鼠源抗体或其突变体中的至少之一；
6.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段具有SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的重链和SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的轻链。
7.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段包括单抗或多抗；
8.一种多特异性结合分子，其特征在于，至少包括：
9.根据权利要求8所述的多特异性结合分子，其特征在于，所述多特异性结合分子
10.根据权利要求9所述的多特异性结合分子，其特征在于，所述第一结合区包含肽链1和肽链2，其中，所述肽链1包括分别如SEQ ID NO:1、2和3的氨基酸序列所示的重链可变区CDR1、CDR2、CDR3序列，
11.根据权利要求8～10中任一项所述的多特异性结合分子，其特征在于，所述第一结合区进一步包括第一重链恒定区，所述第一重链恒定区的至少一部分来自于人源抗体、灵长目源抗体和鼠源抗体或其突变体中的至少之一；
12.根据权利要求11所述的多特异性结合分子，其特征在于，所述第二结合区具有B7H6结合活性；
13.根据权利要求12所述的多特异性结合分子，其特征在于，所述第二结合区进一步包括第二重链恒定区，所述第二重链恒定区的至少一部分来自于灵长目源抗体和鼠源抗体或其突变体中的至少之一；
14.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1～7任一项所述的抗体或抗原结合片段或权利要求8～13任一项所述的多特异性结合分子。
15.一种表达载体，其特征在于，携带权利要求14所述的核酸分子。
16.一种重组细胞，其特征在于，携带权利要求14所述的核酸分子、权利要求15所述的表达载体；或
17.根据权利要求16所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是通过将权利要求15所述的表达载体导入至宿主细胞中而获得的；
18.一种组合物，其特征在于，包括权利要求1～7任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求8～13任一项所述的多特异性结合分子、权利要求14所述的核酸分子、权利要求15所述的表达载体或权利要求16或17所述的重组细胞中的至少之一。
19.一种药物，其特征在于，包括权利要求1～7任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求8～13任一项所述的多特异性结合分子、权利要求14所述的核酸分子、权利要求15所述的表达载体、权利要求16或17所述的重组细胞或权利要求18所述的组合物中的至少之一。
20.权利要求1～7任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求8～13任一项所述的多特异性结合分子、权利要求14所述的核酸分子、权利要求15所述的表达载体、权利要求16或17所述的重组细胞、权利要求18所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗癌症，
21.一种检测NKp80的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1～7任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求8～13任一项所述的多特异性结合分子、权利要求14所述的核酸分子、权利要求15所述的表达载体、权利要求16或17所述的重组细胞中的至少之一。
22.权利要求1～7任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求8～13任一项所述的多特异性结合分子、权利要求14所述的核酸分子、权利要求15所述的表达载体、权利要求16或17所述的重组细胞在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测NKp80。
...【技术特征摘要】
1.一种抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括：
3.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括：重链fr区和轻链fr区中的至少之一；
4.根据权利要求3所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括：
5.根据权利要求1～4任一项所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段含有重链恒定区和轻链恒定区的至少之一，所述重链恒定区和轻链恒定区的至少之一的至少一部分来自于灵长目源抗体和鼠源抗体或其突变体中的至少之一；
6.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段具有seq id no:9所示氨基酸序列的重链和seq id no:10所示氨基酸序列的轻链。
7.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段包括单抗或多抗；
8.一种多特异性结合分子，其特征在于，至少包括：
9.根据权利要求8所述的多特异性结合分子，其特征在于，所述多特异性结合分子为双特异性结合分子；
10.根据权利要求9所述的多特异性结合分子，其特征在于，所述第一结合区包含肽链1和肽链2，其中，所述肽链1包括分别如seq id no:1、2和3的氨基酸序列所示的重链可变区cdr1、cdr2、cdr3序列，
11.根据权利要求8～10中任一项所述的多特异性结合分子，其特征在于，所述第一结合区进一步包括第一重链恒定区，所述第一重链恒定区的至少一部分来自于人源抗体、灵长目源抗体和鼠源抗体或其突变体中的至少之一；
12.根据权利要求11所述的多特异性结合分子，其特征在于，所述第二结合区具有b7h6结合活性；
13.根据权利要求12所述的多特异性结合分子，其特征在于，所述第二结合区进一步包括第二重链恒定区，所述第二重链恒定区的至少一部分来自于灵长目源抗体和鼠源抗体或其突变体中的至少之一；
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【专利技术属性】
技术研发人员：成赢，曹国帅，李洋洋，武玉伟，
申请(专利权)人：合肥天港免疫药物有限公司，
类型：发明
国别省市：
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