【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食用菌育种领域，具体涉及一种鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法及其使用的分子标记。
技术介绍
1、金针菇(flammulina filiformis)又名冬菇、毛柄金钱菌，属于真菌界担子菌门蘑菇纲蘑菇目泡头菌科冬菇属。金针菇因其含有较高的人体必需氨基酸被称为“增智菇”，是广为人知的药食用菌。金针菇不仅在餐桌上惹人喜爱，还有抗菌、抗氧化、抗癌、保肝护肝的功效和增强小鼠记忆的功能。
2、金针菇是双因子控制的四极性异宗结合的食用菌，有性世代产生担孢子，每个担孢子产生4个担孢子，交配型可以分为4种。金针菇单个担孢子发育而来的同核体菌丝为单核，无锁状联合，单核菌丝也可以形成子实体，但与双核相比子实体小且发育不良。具有可亲和交配型的单孢菌丝经过质配形成异核双核体菌株，具有锁状联合，双核菌丝经过发育后扭结形成原基，进而发育形成异核子实体。
3、金针菇育种方法包括杂交育种和优良菌株选择育种。杂交育种中，性亲和的同核体杂交形成可育的异核体，因此选择同核体并识别其交配型非常关键。金针菇在传统育种工作中，单核菌丝体不容易区分。依据菌丝生长速率和性亲和配对实验来区分同核体和异核体，相较于分子标记可靠性较低并且耗时较长。金针菇基因组存在不同程度的杂合度，这给基因组组装带来一定挑战。单核化作为简化复杂基因组的一种重要策略，也是有效开展异核体金针菇全基因组测序分析的重要环节。
4、选择能准确反映交配型基因型的分子标记对有效区分同核体和异核体、鉴定同核体交配型至关重要。
技术实现
1、本专利技术的目的为鉴定待测金针菇为同核体还是异核体。
2、本专利技术首先保护鉴定待测金针菇交配型的方法。
3、本专利技术所保护的鉴定待测金针菇交配型的方法，具体可为方法一，可包括如下步骤：
4、(a1)检测待测金针菇基于分子标记1的基因型和基于分子标记2的基因型；分子标记1为金针菇基因组中seq id no:1自5’末端起第126位核苷酸；分子标记2为金针菇基因组中seq id no:1自5’末端起第147位的核苷酸；
5、(a2)完成步骤(a1)后，进行如下判断：
6、如果待测金针菇基因组中基于分子标记1的基因型为tt纯合型且基于分子标记2的基因型为aa纯合型，则待测金针菇的交配型为a1型同核体；
7、如果待测金针菇基因组中基于分子标记1的基因型为cc纯合型且基于分子标记2的基因型为gg纯合型时，则待测金针菇的交配型为a2型同核体；
8、如果待测金针菇基因组中基于分子标记1的基因型为tc杂合型且基于分子标记2的基因型为ag杂合型时，则待测金针菇的交配型为a1a2型异核体。
9、本专利技术所保护的鉴定待测金针菇交配型的方法，具体可为方法二，可包括如下步骤：
10、(b1)以待测金针菇的基因组dna为模板，采用引物1和引物2组成的引物对进行pcr扩增，得到pcr扩增产物；
11、所述引物1为seq id no:3所示的单链dna分子；
12、所述引物2为seq id no:4所示的单链dna分子；
13、(b2)将步骤(b1)得到的pcr扩增产物进行测序，然后进行如下评判：如果pcr扩增产物的核苷酸序列如seq id no:5所示，则待测金针菇的交配型为a1型同核体；如果pcr扩增产物的核苷酸序列如seq id no:6所示，则待测金针菇的交配型为a2型同核体；如果pcr扩增产物的核苷酸序列如seq id no:5和seq id no:6所示，则待测金针菇的交配型为a1a2型异核体。
14、本专利技术所保护的鉴定待测金针菇交配型的方法，具体可为方法三，可包括如下步骤：检测待测金针菇的基因组中是否含有seq id no:1所示的dna片段1和/或seq id no:2所示的dna片段2，然后进行如下评判：
15、如果待测金针菇的基因组中含有所述dna片段1且不含有所述dna片段2，则待测金针菇的交配型为a1型同核体；如果待测金针菇的基因组中含有所述dna片段2且不含有所述dna片段1，则待测金针菇的交配型为a2型同核体；如果待测金针菇的基因组中含有所述dna片段1且含有所述dna片段2，则待测金针菇的交配型为a1a2型异核体。
16、上述任一所述的方法中，a1型同核体和a2型同核体均为同核体(即单核金针菇)。
17、上述任一所述的方法中，a1a2型异核体即为异核体(即异核金针菇)。
18、本专利技术还保护鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法。
19、本专利技术所保护的鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法，具体可为方法甲，可包括如下步骤：
20、(a1)检测待测金针菇基于分子标记1的基因型和基于分子标记2的基因型；分子标记1为金针菇基因组中seq id no:1自5’末端起第126位核苷酸；分子标记2为金针菇基因组中seq id no:1自5’末端起第147位的核苷酸；
21、(a2)完成步骤(a1)后，进行如下判断：
22、如果待测金针菇基因组中基于分子标记1的基因型为tt纯合型且基于分子标记2的基因型为aa纯合型，则待测金针菇为同核体；
23、如果待测金针菇基因组中基于分子标记1的基因型为cc纯合型且基于分子标记2的基因型为gg纯合型时，则待测金针菇为同核体；
24、如果待测金针菇基因组中基于分子标记1的基因型为tc杂合型且基于分子标记2的基因型为ag杂合型时，则待测金针菇为异核体。
25、本专利技术所保护的鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法，具体可为方法乙，可包括如下步骤：
26、(b1)以待测金针菇的基因组dna为模板，采用引物1和引物2组成的引物对进行pcr扩增，得到pcr扩增产物；
27、所述引物1为seq id no:3所示的单链dna分子；
28、所述引物2为seq id no:4所示的单链dna分子；
29、(b2)将步骤(b1)得到的pcr扩增产物进行测序，然后进行如下评判：如果pcr扩增产物的核苷酸序列如seq id no:5或seq id no:6所示，则待测金针菇为同核体；如果pcr扩增产物的核苷酸序列如seq id no:5和seq id no:6所示，则待测金针菇为异核体。
30、本专利技术所保护的鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法，具体可为方法丙，可包括如下步骤：
31、检测待测金针菇的基因组中是否含有seq id no:1所示的dna片段1和/或seq idno:2所示的dna片段2，然后进行如下评判：
32、如果待测金针菇的基因组中含有所述dna片段1或所述dna片段2，则待测金针菇为同核体；如果待测金针菇的基因组中含有所述dna片段1且含有所述dna片段2，则待测金针菇为异核体。
33、本专利技术还保护一种试剂盒，可包括检测待本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鉴定待测金针菇交配型的方法，包括如下步骤：
2.一种鉴定待测金针菇交配型的方法，包括如下步骤：
3.一种鉴定待测金针菇交配型的方法，包括如下步骤：检测待测金针菇的基因组中是否含有SEQ ID NO:1所示的DNA片段1和/或SEQ ID NO:2所示的DNA片段2，然后进行如下评判：
4.一种鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法，包括如下步骤：
5.一种鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法，包括如下步骤：
6.一种鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法，包括如下步骤：检测待测金针菇的基因组中是否含有SEQ ID NO:1所示的DNA片段1和/或SEQ ID NO:2所示的DNA片段2，然后进行如下评判：
7.一种试剂盒，包括检测待测金针菇基于分子标记1的基因型和基于分子标记2的基因型的物质；
8.如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的分子标记。
9.权利要求7或8所述的试剂盒或权利要求9所述分子标记的应用，为c1)-c4)中的至少一种：
10.根
...【技术特征摘要】
1.一种鉴定待测金针菇交配型的方法，包括如下步骤：
2.一种鉴定待测金针菇交配型的方法，包括如下步骤：
3.一种鉴定待测金针菇交配型的方法，包括如下步骤：检测待测金针菇的基因组中是否含有seq id no:1所示的dna片段1和/或seq id no:2所示的dna片段2，然后进行如下评判：
4.一种鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法，包括如下步骤：
5.一种鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法，包括如下步骤：
6.一种鉴定待测金针菇为同核体还是异核体的方法，包括如下步骤：...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵瑞琳，刘飞，凌志琳，曹槟，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。