【技术实现步骤摘要】
【】本专利技术属于生物检测，涉及一种靶向溶酶体ph荧光探针及其制备方法和应用。
技术介绍
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技术介绍
1、生命体系是一个环境复杂的系统，在这个系统中ph会影响细胞活动的许多方面，如细胞生长、细胞自噬、内吞作用、耐药性、细胞耦合、离子转运等。细胞内ph在不同细胞器中分布不同，如溶酶体在正常的情况下呈现酸性，其ph值范围在4.5-5.5之间，而溶酶体作为真核细胞中一种重要的细胞器，其含有多种水解酶，这些酶在酸性的条件下活性最佳，可降解蛋白质、多糖、核酸等生物大分子。除水解酶对细胞内物质的降解外，细胞溶质酸化也会造成细胞的死亡。酸性ph是溶酶体的重要生物标记，ph微小的异常都可能会引起生理及病理的损伤，从而引起一些相关的疾病。有研究表明，溶酶体ph的异常变化会引发神经功能障碍、阿尔兹海默症、癌症、溶酶体贮积症等。因此，监测溶酶体ph值的变化对进一步研究溶酶体的生理和细胞代谢、病理过程至关重要。
2、在众多ph检测方法中，荧光分子探针结合激光共聚焦技术，具有操作简单、灵敏度高、选择性好及时成像并具有较高的时空分辨率。目前已有相关的研究，例如中国专利申请号201910687350.2公开了一种检测溶酶体ph的荧光探针及其制备方法和应用，提供了一种检测溶酶体ph的荧光探针，由于该探针高分子链上具有弱碱性的二甲氨基，其在溶酶体的酸性环境中很容易发生聚集，因此探针具有溶酶体靶向性，并且灵敏度高、特异性高、抗干扰性强、较好的水溶性等特点，具有良好的荧光发射光谱特性(380-550nm)，能实现对溶酶体中ph变化的快速
3、虽然目前已有多种ph荧光探针被开发出来，然而对于具有靶向性溶酶体ph的荧光探针大多存在严重的缺陷，这类探针合成工艺复杂，发光不稳定、具有小的斯托克斯位移，发射波长短，不利于生物成像等。因此，开发新的具有高选择性、高发光效率、合成简单、光稳定性及生物相容性好，且能够靶向溶酶体的ph探针具有重要意义。
技术实现思路
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技术实现思路
1、针对现有技术中对于具有靶向性溶酶体ph的荧光探针大多存在探针合成工艺复杂，发光不稳定、具有小的斯托克斯位移，发射波长短，不利于生物成像等问题，本专利技术提供了一种靶向溶酶体ph荧光探针及其制备方法和应用，是一种基于质子化过程的检测溶酶体ph的荧光探针及其制备方法和应用，该靶向溶酶体ph荧光探针是一种新型靶向溶酶体的ph荧光探针，该探针利用溶酶体靶向基团吗啉环定位于溶酶体中，用于细胞内溶酶体的ph成像，探针具有合成简单、高灵敏度、高量子产率、稳定性好等优点。
2、本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：
3、一种靶向溶酶体ph荧光探针，简称dmss-am，其化学结构式如式(1)所示：
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5、上述一种靶向溶酶体ph荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
6、1)按照以下比例，将2g(0.00876mol)1,4-环己二酮-2,5-二甲酸二甲酯(dmss)，2.3g(0.01767mol)n-(2-氨基乙基)吗啉(am)与35ml甲醇(ar分析纯)加入到两口烧瓶中，滴加2-3滴乙酸，连接冷凝回流管，抽真空充入氮气保护，在78℃下搅拌反应24小时；
7、2)待上步骤得到的物料冷却至室温后，用氨水调节ph至中性，抽滤保留固体，用乙酸乙酯萃取混合溶液，再用超纯水和饱和食盐水洗涤有机层，然后用无水硫酸镁干燥，过滤，将溶液旋蒸以后，得到的固体用硅胶柱层析纯化，淋洗液的配比为石油醚:乙酸乙酯＝7:1，v:v,得到230mg(0.466mmol，21％)的dmss-am橙色固体。
8、本专利技术的机理如下：
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10、本专利技术所述的荧光探针由于具有较强的碱性吗啉基团，可在酸性溶酶体环境内发生聚集，因此探针可定位于溶酶体中。在酸性条件下，吗啉的氮氧杂环上氮原子发生质子化，从吗啉到1,4-环己二酮-2,5-二甲酸二甲酯荧光团的pet作用被抑制，荧光强度增加，在碱性条件下，pet过程发生，荧光团受到抑制，荧光强度降低。
11、本专利技术还涉及上述一种靶向溶酶体ph荧光探针在检测水溶液、生物细胞体、活体动物内溶酶体ph的应用。
12、进一步的，所述的活体动物内溶酶体ph，是指生物活体斑马鱼内溶酶体ph。
13、本专利技术与现有技术相比，具有以下有益效果：
14、1、本专利技术所述的一种靶向溶酶体ph荧光探针，该荧光探针在溶酶体环境范围内荧光强度呈现出较好的线性，对ph具有较高的选择性，抗干扰能力强并具有令人满意的可逆性。
15、2、本专利技术所述的一种靶向溶酶体ph荧光探针的制备方法，该荧光探针的合成工艺简单，原料廉价易得、制备成本低，易于推广。
16、3、本专利技术所述的一种靶向溶酶体ph荧光探针的应用，该荧光探针具有优异的溶酶体靶向能力，光稳定性好、对细胞毒性较低、生物相容性好、对生物样品的光损伤低，可实时监测细胞及斑马鱼内溶酶体的ph异常变化，获得更加精确及稳定的光学信号和成像效果。
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1.一种靶向溶酶体pH荧光探针，其特征在于：简称DMSS-AM，其化学结构式如式(1)所示：
2.权利要求1所述的一种靶向溶酶体pH荧光探针的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
3.权利要求1所述的一种靶向溶酶体pH荧光探针的应用，其特征在于：所述的一种靶向溶酶体pH荧光探针在检测水溶液、生物细胞体、活体动物内溶酶体pH的应用。
4.根据权利要求3所述的一种靶向溶酶体pH荧光探针的应用，其特征在于：所述的活体动物内溶酶体pH，是指生物活体斑马鱼内溶酶体pH。
【技术特征摘要】
1.一种靶向溶酶体ph荧光探针，其特征在于：简称dmss-am，其化学结构式如式(1)所示：
2.权利要求1所述的一种靶向溶酶体ph荧光探针的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
3.权利要求1所述的一种靶向溶酶体ph荧光探针...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋炳丽，金裕欣，宋华健，蒋淑敏，刘文宣，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：
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