【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子育种，涉及用于检测雪茄烟叶片长度的kasp分子标记引物及其应用。
技术介绍
1、近年来全世界雪茄烟产业呈现出蓬勃发展的趋势，中国雪茄市场更是迎来爆发式增长，国产手卷雪茄的销量在2021年突破了2000万支，成为烟草行业新的经济增长点，国内工业企业对优质雪茄烟叶的需求也越来越大。雪茄是由全烟叶卷制而成，按照用途可以将卷制雪茄的原材料由内而外的分为茄芯、茄套和茄衣。从外观上看，消费者唯一能看到的就是包裹在外边的茄衣材料，茄衣的质量也影响着整支雪茄的档次。因为茄衣的用途的独特性，其对雪茄烟叶的叶面性状有着极高的要求：叶长叶宽适宜且比例好，完美包裹整支雪茄且外形美观。
2、受制于历史和经济因素的制约，我国雪茄烟资源利用和开发起步晚，国内优质的雪茄烟种质资源相对匮乏，与国外雪茄原料相比，国内原料质量整体较差，尤其是优质茄衣烟叶几乎不存在，国产茄衣烟叶长叶宽整体比例不能满足高档雪茄的卷制需求，严重限制了国产雪茄行业的发展。从根本上解决国产茄衣原料供应问题，就要培育我国自主的雪茄烟品种。因此，对雪茄烟叶片长度进行遗传改良成为雪茄烟育种的迫切任务之一。
3、利用分子标记进行品种优良基因型的筛选在作物育种中被广泛利用。由于测序成本的制约，先前的雪茄烟品种培育常用的分子标记有srap、aflp等，这类分子标记密度低且实验操作复杂，难以应用于大规模的品种选育。随着高通量测序的发展和成本的下降，snp标记开始应用于雪茄烟育种中，基于测序技术的snp标记高密度、遗传稳定、易于检测，被用来筛选优良基因型的雪茄烟品种
4、目前我国烟草基因组重大专项不断推进，雪茄烟育种利用高通量测序技术结合表型数据定位到影响雪茄烟叶片长度的关键位点，在定位到的关键位点附近展开kasp分子标记的开发，用于雪茄烟优良品种的选育。如果能提供一个与雪茄烟叶片长度高度关联的kasp分子标记，利用于雪茄烟优良基因型检测，将加快培育我国自主的优质雪茄烟品种，推动雪茄行业的高质量、可持续发展。
技术实现思路
1、本专利技术针对上述技术问题，提供一种用于检测雪茄烟叶片长度的kasp分子标记引物及应用。
2、本专利技术采用的技术方案为：
3、检测kasp标记的物质在雪茄烟叶片长度品种选育中的应用，所述kasp标记位于hic_asm_11号染色体上seq id no.1所示的基因片段的第101bp，该位点的碱基为c或t；该位点的两种纯合基因型cc和tt品种在叶片长度的表型上出现显著差异，cc基因型品种表型表现为叶长较短，而tt基因型品种表型表现为叶片较长；叶长较短表现为叶长小于57cm，叶片较长表现为叶长大于等于57cm。
4、所述位点上下100bp序列为：ccaggtcgagtccctgaggtacaccggcaacgtctaaaaa tattactgggtacaacatgaggccaaatgactaaccacgtgacacccatacatattcaat[c/t]gacc tttaaagtcagcctttgattacttaatggatgattatatgcagtttagcaatgatagtttgaaagtctgatttaaatagctaacagtagacaactt(seq id no.1)。
5、作为本专利技术的一种优选，所述的检测kasp标记的物质为kasp分子标记引物：
6、正向引物yc07-primer-x1：5’-gtctgtctacaacaacaactaccga-3’(seq id no.2)
7、正向引物yc07-primer-y1：5’-ctgtctacaacaacaactaccgg-3’(seq id no.3)
8、反向通用引物yc07-primer-c：5’-taaagcctcataaggagccatctgg-3’(seq idno.4)
9、作为本专利技术的一种优选，所述的检测kasp标记的物质为在所述的kasp分子标记引物的两条正向引物5’端分别结合不同的探针，每个探针上分别结合不同的荧光基团所得到的分子标记引物。
10、yc07-primer-x1和yc07-primer-y1的5’端分别结合不同的探针，每个探针上分别结合不同的荧光基团。所述引物yc07-primer-x1的5’段结合第一荧光探针序列gaaggtgaccaagttcatgct，加上荧光探针序列得到正向引物yc07-primer-x2：gaaggtgaccaagttcatgct gtctgtctacaacaacaactaccga(seq id no.5)。在所述引物yc07-primer-y1的5’段结合第二荧光探针序列gaaggtcggagtcaacggatt，加上荧光探针序列得到正向引物yc07-primer-y2：gaaggtcggagtcaacggatt ctgtctacaacaacaactaccgg(seq idno.6)。
11、其中，所述yc07-primer-x1和yc07-primer-x2为叶长较长型(叶长大于57cm)品种的特异性引物，yc07-primer-y1和yc07-primer-y2为叶长较短型(叶长小于57cm)品种的特异性引物，yc07-primer-c为共同的反向引物。
12、作为本专利技术的进一步优选，所述的荧光基团选自fam或hex。
13、一种kasp分子标记引物组合物，选自以下任意一组：
14、(1)由seq id no.2、seq id no.3以及seq id no.4组成；
15、(2)由seq id no.5、seq id no.6以及seq id no.4组成；且seq id no.5、seq idno.6结合不同的荧光基团；优选seq id no.5结合fam，seq id no.6结合hex。
16、所述的引物组合物在雪茄烟品种叶片长度性状鉴别、筛选、选育中的应用；所述的叶片长度性状分为叶长较短或叶片较长，叶长较短表现为叶长小于57cm，叶片较长表现为叶长大于等于57cm。
17、所述的引物组合物在制备雪茄烟品种叶片长度性状鉴别、筛选、选育试剂盒中的应用；所述的叶片长度性状分为叶长较短或叶片较长，叶长较短表现为叶长小于57cm，叶片较长表现为叶长大于等于57cm。
18、一种鉴别或选育叶片长度性状的雪茄烟品种的试剂盒，含有本专利技术所述的引物组合物；所述的叶片长度性状分为叶长较短或叶片较长，叶长较短表现为叶长小于57cm，叶片较长表现为叶长大于等于57cm。本专利技术还提供了一种雪茄烟叶片长度性状的鉴别方法，包括以下步骤：
19、(1)提取待测雪茄烟的dna，稀释到适宜浓度。
20、(2)以yc07-primer-x2、yc07-primer-y本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测KASP标记的物质在雪茄烟叶片长度品种选育中的应用，其特征在于，所述KASP标记位于Hic_asm_11号染色体上SEQ ID NO.1所示的基因片段的第101bp，该位点的碱基为C或T；该位点的两种纯合基因型CC和TT品种在叶片长度的表型上出现显著差异，CC基因型品种表型表现为叶长较短，而TT基因型品种表型表现为叶片较长；叶长较短表现为叶长小于57cm，叶片较长表现为叶长大于等于57cm。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的检测KASP标记的物质为KASP分子标记引物，正向引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，反向通用引物序列如SEQ IDNO.4所示。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的检测KASP标记的物质为在权利要求3中所述的KASP分子标记引物的两条正向引物5’端分别结合不同的探针，每个探针上分别结合不同的荧光基团所得到的分子标记引物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的分子标记引物正向引物序列如SEQID NO.5和SEQ ID NO.6所示，每条正向引物连接不同的
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述的荧光基团选自FAM或HEX。
6.一种KASP分子标记引物组合物，其特征在于选自以下任意一组：
7.权利要求6所述的引物组合物在雪茄烟品种叶片长度性状鉴别、筛选、选育中的应用；所述的叶片长度性状分为叶长较短或叶片较长，叶长较短表现为叶长小于57cm，叶片较长表现为叶长大于等于57cm。
8.权利要求6所述的引物组合物在制备雪茄烟品种叶片长度性状鉴别、筛选、选育试剂盒中的应用；所述的叶片长度性状分为叶长较短或叶片较长，叶长较短表现为叶长小于57cm，叶片较长表现为叶长大于等于57cm。
9.一种鉴别或选育叶片长度性状的雪茄烟品种的试剂盒，其特征在于含有权利要求6所述的引物组合物；所述的叶片长度性状分为叶长较短或叶片较长，叶长较短表现为叶长小于57cm，叶片较长表现为叶长大于等于57cm。
10.一种雪茄烟叶片长度性状的鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.检测kasp标记的物质在雪茄烟叶片长度品种选育中的应用，其特征在于，所述kasp标记位于hic_asm_11号染色体上seq id no.1所示的基因片段的第101bp，该位点的碱基为c或t；该位点的两种纯合基因型cc和tt品种在叶片长度的表型上出现显著差异，cc基因型品种表型表现为叶长较短，而tt基因型品种表型表现为叶片较长；叶长较短表现为叶长小于57cm，叶片较长表现为叶长大于等于57cm。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的检测kasp标记的物质为kasp分子标记引物，正向引物序列如seq id no.2和seq id no.3所示，反向通用引物序列如seq idno.4所示。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的检测kasp标记的物质为在权利要求3中所述的kasp分子标记引物的两条正向引物5’端分别结合不同的探针，每个探针上分别结合不同的荧光基团所得到的分子标记引物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的分子标记引物正向引物序列如seqid no.5和seq id no....
【专利技术属性】
技术研发人员：刘国祥，张兴伟，王俊，向欢，燕思凡，雷云康，蒋勋，李媛，籍燕，钟秋，陈勇，杨爱国，刘旦，戴培刚，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所中国烟草总公司青州烟草研究所，
类型：发明
国别省市：
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