【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因治疗药物领域，特别是涉及一种基因编辑组合物及其用途。
技术介绍
1、心血管疾病是全球第一杀手和主要疾病负担，包括高胆固醇血症、冠心病、高血压、心肌梗死和中风等。长期以来，研究人员一直在寻找心血管疾病的危险因素，并努力找到降低患者风险的方法。在这方面，脂蛋白(a) [lp(a)]引起了广泛的关注。长期以来，研究已明确高水平的lp(a)是心血管疾病的遗传和独立危险因子。孟德尔随机化研究一致证明，血浆浓度 lp(a)与心肌梗死、卒中、外周动脉疾病和心血管死亡风险之间存在因果关系。lp(a)包含的3 种组分，即的低密度脂蛋白（ldl）样颗粒、载脂蛋白[apo(a)]、氧化磷脂（oxpl），都是lp(a)致病过程中不可或缺的因素，主要通过促动脉粥样硬化、促血栓形成、促炎导致局部的病理改变，继而引起疾病的发生（kronenberg, f. (2016). cardiovasc.drugs ther., 30(1):87-100）。
2、从安全性考虑，人群中低lp(a)的个体不会出现明显的健康损害，所以lp(a)是一个很好心血管干预靶点。不同于 ldl-c，目前尚无获批的降低lp(a)的药物。传统的他汀类降脂药物，不会造成有lp(a)水平的显著变化，甚至一些研究表明他汀类药物可导致lp(a)升高。目前发现对降低 lp(a)有效的药物包括：烟酸、pcsk9 抑制剂、雌激素、米泊美生、洛美他派，但考虑到降低lp(a)的效果、经济、临床不良事件、临床可操作性及可推广性、以及心血管受益情况这些方法都不是最佳选择（漆晨璐等
3、基因编辑技术具有精确和永久修改人类患者中致病基因的潜力，一次基因编辑治疗可以在长期内产生效果，减少了患者的治疗负担。针对肝脏lp(a)的基因编辑方法，如使用crispr-cas9核酸酶系统对apo(a)进行靶向敲除，已在动物模型中成功降低了lp(a)水平。尽管这些研究证明了基因编辑在调控apo(a)和lp(a) 水平方面的潜力，但研究也发现存在严重脱靶编辑（doerfler am. et. al, mol ther methods clin dev., 2022 oct 13:27:337-351.）。相较crispr-cas9核酸酶系统，碱基编辑器拥有更高的精确性和安全性。利用碱基编辑器，通过靶向破坏蛋白质编码基因的起始密码子位点或剪接位点、或引入提前终止密码子的方式，可以实现基因敲除。本专利技术旨在提供一种创新的方法和组合物，利用碱基编辑技术来高效安全的敲除apo(a)，以降低血浆中lp(a)的水平，从而预防或治疗心血管疾病。
技术实现思路
1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种基因编辑组合物及其用途，用于解决现有技术中的问题。
2、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种基因编辑组合物，所述基因编辑组合物包含：
3、1）碱基编辑器融合蛋白，或编码所述碱基编辑器融合蛋白的核酸；
4、2）向导rna，或编码所述向导rna的核酸，其中向导rna包含间隔序列片段和scaffold序列片段，编码所述间隔序列片段包含核苷酸序列如seq id no.1-71任一项或多项所示的核酸分子。
5、优选地，所述碱基编辑器融合蛋白包含氨基酸序列如seq id no.74-76任一所示的多肽。
6、本专利技术还提供一种碱基编辑器融合蛋白，所述碱基编辑器融合蛋白包含氨基酸序列如seq id no.74所示的多肽。
7、本专利技术还提供一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码前述向导rna、前述碱基编辑器融合蛋白或同时编码如前述向导rna和前述碱基编辑器融合蛋白。
8、本专利技术还提供一种表达载体，所述表达载体包含前述核酸分子和质粒骨架。
9、本专利技术还提供一种药物组合物，所述药物组合物包含递送载体和前述基因编辑组合物、前述核酸分子或前述表达载体。
10、本专利技术还提供前述基因编辑组合物、前述核酸分子、前述表达载体或前述药物组合物在制备以下任一产品中的用途：
11、1）体外编辑lpa基因的产品；
12、2）降低载脂蛋白(a)和脂蛋白(a)的产品；
13、3）心血管疾病治疗药物。
14、本专利技术还提供一种体外编辑lpa基因的方法所述方法为：将前述基因编辑组合物、前述核酸分子或前述表达载体导入分离的细胞，使所述细胞的lpa基因发生碱基突变。
15、如上所述，本专利技术的一种基因编辑组合物及其用途，具有以下有益效果：
16、本专利技术的基因编辑组合物可以在体内和体外高效编辑lpa基因，并可以在体内外实现apo(a)蛋白的部分或完全敲除。此外，本专利技术的基因编辑组合物可以在体内高效编辑lpa基因的同时，没有发现脱靶效应，具备基因治疗的安全性。
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1.一种基因编辑组合物，其特征在于，所述基因编辑组合物包含：
2.根据权利要求1所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述碱基编辑器融合蛋白包含可编程DNA结合结构域片段和脱氨酶结构域片段。
3.根据权利要求2所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述可编程DNA结合结构域片段选自CRISPR/Cas系统的Cas蛋白的结构域片段。
4.根据权利要求3所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述可编程DNA结合结构域片段为Cas9蛋白及其变体的结构域片段。
5.根据权利要求2所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述脱氨酶结构域片段选自胞嘧啶脱氨酶片段或腺嘌呤脱氨酶片段。
6.根据权利要求5所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述胞嘧啶脱氨酶选自APOBEC1、APOBEC3A、APOBEC3B、APOBEC3C、APOBEC3E、APOBEC3F、APOBEC3G、APOBEC3H、AID或pmCDA1中的一种或多种；或，所述腺嘌呤脱氨酶选自ecTadA或其变体。
7.根据权利要求1所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述碱基编辑
8.根据权利要求1所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述scaffold序列片段包含核苷酸序列如SEQ ID No.72-73任一所示的核酸分子。
9.根据权利要求1所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述基因编辑组合物能破坏LPA基因起始密码子，或诱导LPA基因产生提前终止密码子，或破坏LPA基因可变剪切位点。
10.一种碱基编辑器融合蛋白，其特征在于，所述碱基编辑器融合蛋白包含氨基酸序列如SEQ ID No.74所示的多肽。
11.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1-9任一所述基因编辑组合物中的向导RNA、碱基编辑器融合蛋白或同时编码如权利要求1-9任一所述基因编辑组合物中的向导RNA和碱基编辑器融合蛋白。
12.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包含如权利要求11所述的核酸分子和质粒骨架。
13.一种细胞，其特征在于，所述细胞含有如权利要求11所述的核酸分子或如权利要求12所述的表达载体。
14.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含递送载体和如权利要求1-9任一所述的基因编辑组合物、如权利要求11所述的核酸分子或如权利要求12所述的表达载体。
15.根据权利要求14所述的药物组合物，其特征在于，所述递送载体选自聚合物纳米颗粒、脂质体、脂质纳米颗粒、病毒载体或细胞外囊泡中的一种或多种。
16.如权利要求1-9任一所述的基因编辑组合物、如权利要求11所述的核酸分子、如权利要求12所述的表达载体或如权利要求14-15任一所述的药物组合物在制备以下任一产品中的用途：
17.根据权利要求16所述的用途，其特征在于，所述心血管疾病选自高胆固醇血症、冠心病、高血压、心肌梗死、中风、周围血管疾病或主动脉粥硬化中的一种或多种。
18.一种体外编辑LPA基因的方法，其特征在于，所述方法为：将如权利要求1-9任一所述的基因编辑组合物、如权利要求11所述的核酸分子或如权利要求12所述的表达载体导入分离的细胞，使所述细胞的LPA基因发生碱基突变。
19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述导入的方法选自脂质体转染、电穿孔法、病毒转导、显微注射法、粒子轰击法或基因枪转化法中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种基因编辑组合物，其特征在于，所述基因编辑组合物包含：
2.根据权利要求1所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述碱基编辑器融合蛋白包含可编程dna结合结构域片段和脱氨酶结构域片段。
3.根据权利要求2所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述可编程dna结合结构域片段选自crispr/cas系统的cas蛋白的结构域片段。
4.根据权利要求3所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述可编程dna结合结构域片段为cas9蛋白及其变体的结构域片段。
5.根据权利要求2所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述脱氨酶结构域片段选自胞嘧啶脱氨酶片段或腺嘌呤脱氨酶片段。
6.根据权利要求5所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述胞嘧啶脱氨酶选自apobec1、apobec3a、apobec3b、apobec3c、apobec3e、apobec3f、apobec3g、apobec3h、aid或pmcda1中的一种或多种；或，所述腺嘌呤脱氨酶选自ectada或其变体。
7.根据权利要求1所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述碱基编辑器融合蛋白选自ce-a3a1048-1063、ce-saabe8e-744或氨基酸序列如seq id no.74所示的碱基编辑器融合蛋白中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述scaffold序列片段包含核苷酸序列如seq id no.72-73任一所示的核酸分子。
9.根据权利要求1所述的基因编辑组合物，其特征在于，所述基因编辑组合物能破坏lpa基因起始密码子，或诱导lpa基因产生提前终止密码子，或破坏lpa基因可变剪切位点。
10.一种碱基编辑器融合蛋白，其特征在于，所述碱基编辑器融合蛋白包含氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆春菊，吕锋华，徐天宏，赖祺，李珏琬，
申请(专利权)人：上海贝斯昂科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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