【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及环磷腺苷制备，具体为一种中间体环磷腺苷的生物制备方法。
技术介绍
1、环磷腺苷为抗心绞痛药，临床上主要用于心绞痛、急性心肌梗死的辅助治疗，但其作用持续时间较短。
2、现有的制备方法存在的缺陷是：
3、1、专利文件cn115960151a公开了一种二丁酰环磷腺苷钙及其制备方法，其公开了“该二丁酰环磷腺苷钙的制备方法包括如下步骤：
4、(1)环磷腺苷和缚酸剂进行反应，得到环磷腺苷三乙胺盐；(2)步骤(1)得到的环磷腺苷三乙胺盐、催化剂和正丁酸酐进行酰化反应，得到二丁酰环磷腺苷三乙胺盐；(3)步骤(2)得到的二丁酰环磷腺苷三乙胺盐和钙盐进行成盐反应；成盐反应后，直接析晶，得到二丁酰环磷腺苷钙粗品；(4)对步骤(3)得到的二丁酰环磷腺苷钙粗品进行精制，得到二丁酰环磷腺苷钙。本专利技术中二丁酰环磷腺苷钙的制备方法生产周期短，有利于工业化生产，具有较大的应用价值；且制得的二丁酰环磷腺苷钙收率和纯度均较高”；
5、2、专利文件cn116003481a公开了一种二丁酰环磷腺苷钙的连续制备方法，其公开了“其包括如下步骤：将环磷腺苷三乙胺盐等原料混合，得到的进料液a输送进微反应器中，进行连续酰化反应，得到反应液b；将反应液b和水输送进第一微混合芯片进行第一次连续萃取，两相分层后将有机相与水输送进第二微混合芯片进行第二次连续萃取，两相分层后合并水相，得到水溶液c；将所述水溶液c与酸混合，并将酸化后的水溶液c与有机溶剂输送进第三微混合芯片进行连续洗涤，两相分层后，收集水相，得到水溶液d；将所
6、3、专利文件cn116063364a公开了一种药用级二丁酰环磷腺苷钠的制备方法，其公开了“包括成盐、酰化、精制、干燥等步骤。酰化过程中采用梯度程序升温的方法，精准控制反应的进程，反应转化率高，副反应少，成品杂质含量极低，获得高纯二丁酰环磷腺苷钠产品。精制步骤采用不同溶剂多次搅洗，并通过离心，有效去除二丁酰环磷腺苷钠纯化合成过程中残留的有机溶剂及杂质，提高了产品纯度，本专利技术所制备的二丁酰环磷腺苷钠产品纯度能达到99.5％以上。本专利技术所述制备方法工艺简单，反应条件温和，易于操作，工艺稳定、重现性好，总收率高，更适宜于工业化生产”；
7、4、专利文件cn114617848a公开了一种注射用环磷腺苷冻干制剂及其制备方法，其公开了“公开了一种注射用环磷腺苷冻干制剂及其制备方法，冻干制剂由环磷腺苷包合物溶液冻干后制得，以重量份计，所述环磷腺苷包合物溶液的组分包括：环磷腺苷20～40份；包合剂30～60份；水1000～2000份。制备方法为：配液：将包合剂溶于96～98℃的水中，搅拌均匀后加入环磷腺苷，保温搅拌至澄清后得到环磷腺苷包合物溶液；除热源：向环磷腺苷包合物溶液中加入活性炭，搅拌10～20min后静置30～40min；粗滤去除活性炭；除菌过滤；灌装；冷冻干燥。本专利技术用包合剂对环磷腺苷进行包合，可有效提高制成的环磷腺苷冻干制剂的溶解性及稳定性，保证了药品的疗效及用药安全性”；
8、综上所述，环磷腺苷在制备过程中，发酵所需的节杆菌需要不断的提添加，但是节杆菌的生长环境会存在细微的变化，需要根据实际情况进行调整，保证发酵的最高效率。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，包括设计反应环境(1)、添加微量元素(2)、观测检验(3)、收集储存(4)、提纯(5)、检测储存(6)，所述首先培养节杆菌，蔗糖3～7g/l，牛肉膏25～40g/l，酵母膏2～3g/l，(nh4)2hpo48～12g/l，kh2po40.5～1g/l，mgso4·7h2o 0.1～0.5g/l，余为水，节杆菌培养完成，设计反映环境(1)准备反映器皿，反应器皿规格为直径10-30cm的圆形器皿，器皿的温度为25-30℃，在器皿中放入节杆菌，器皿每天保持2-4小时的光照。
3、优选的，所述添加微量元素(2)在fe2+，mn2+，co2+，cu2+，zn2+，mo6+，b3+，f-，k+中的任意一种或几种的组合，溶剂为水，单一溶液浓度为0.03g/l-0.05g/l，混合溶液浓度为0.01g/l-0.025g/l，每次添加10-60ml。
4、优选的，所述添加微量元素时，在器皿中随机选取6-10个位置，采用滴加的方式，在每个位置滴加1-4滴溶液，通过次黄嘌呤溶液和氢氧化钾溶液调节器皿中的酸碱度，使得酸碱度为4-6之间。
5、优选的，每隔3-5天取出器皿内的部分溶液观察节杆菌的状态，使用显微镜观察节杆菌的数量、密度及其存活状态，根据存活状态将不同器皿中的节杆菌分别标记为s1、s2、s3和s4四个等级。
6、优选的，所述对s1、s2、s3和s4四个等级的器皿添加发酵液，添加完成后将器皿中的节杆菌加入到发酵罐中，环磷腺苷开始增长，等待环磷腺苷增长稳定后，取出部分发酵液，随后将微量元素再次添加到发酵罐中，重复10-30次。
7、优选的，所述发酵罐中的温度为35-65℃，发酵时间为50-100小时。
8、优选的，所述提纯(5)将发酵罐中的环磷腺苷取出，使用过滤器即将其中的杂质过滤，使用孔径为20nm-80nm的滤网进行多次过滤，对过滤后的溶液进行含量检测，环磷腺苷的浓度在85-95之间，低于上述浓度时，将溶液放入到蒸发器中，对其进行加热蒸发，将溶液中的多余的水分蒸发，使得环磷腺苷的浓度升高，达到标准。
9、优选的，所述检测储存(6)，对蒸发后的溶液再次进行浓度检测，检测合格后将入到储罐中进行储存密封。
10、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
11、本专利技术通过对节杆菌进行分别培养，且添加多种离子，使得节杆菌在发酵时能够最大效率的进行发酵，增加环磷腺苷的产量，另外通过控制酸碱度可以使得环磷腺苷稳定增长，增加产量。
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1.一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，包括设计反应环境(1)、添加微量元素(2)、观测检验(3)、收集储存(4)、提纯(5)、检测储存(6)，其特征在于：所述首先培养节杆菌，蔗糖3～7g/L，牛肉膏25～40g/L，酵母膏2～3g/L，(NH4)2HPO48～12g/L，KH2PO40.5～1g/L，MgSO4·7H2O0.1～0.5g/L，余为水，节杆菌培养完成，设计反映环境(1)准备反映器皿，反应器皿规格为直径10-30cm的圆形器皿，器皿的温度为25-30℃，在器皿中放入节杆菌，器皿每天保持2-4小时的光照。
2.根据权利要求1所述的一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，其特征在于：所述添加微量元素(2)在Fe2+，Mn2+，Co2+，Cu2+，Zn2+，Mo6+，B3+，F-，K+中的任意一种或几种的组合，溶剂为水，单一溶液浓度为0.03g/L-0.05g/L，混合溶液浓度为0.01g/L-0.025g/L，每次添加10-60ml。
3.根据权利要求2所述的一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，其特征在于：所述添加微量元素时，在器皿中随机选取6-10个位置
4.根据权利要求1所述的一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，其特征在于：每隔3-5天取出器皿内的部分溶液观察节杆菌的状态，使用显微镜观察节杆菌的数量、密度及其存活状态，根据存活状态将不同器皿中的节杆菌分别标记为S1、S2、S3和S4四个等级。
5.根据权利要求4所述的一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，其特征在于：所述对S1、S2、S3和S4四个等级的器皿添加发酵液，添加完成后将器皿中的节杆菌加入到发酵罐中，环磷腺苷开始增长，等待环磷腺苷增长稳定后，取出部分发酵液，随后将微量元素再次添加到发酵罐中，重复10-30次。
6.根据权利要求5所述的一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，其特征在于：所述发酵罐中的温度为35-65℃，发酵时间为50-100小时。
7.根据权利要求1所述的一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，其特征在于：所述提纯(5)将发酵罐中的环磷腺苷取出，使用过滤器即将其中的杂质过滤，使用孔径为20nm-80nm的滤网进行多次过滤，对过滤后的溶液进行含量检测，环磷腺苷的浓度在85-95之间，低于上述浓度时，将溶液放入到蒸发器中，对其进行加热蒸发，将溶液中的多余的水分蒸发，使得环磷腺苷的浓度升高，达到标准。
8.根据权利要求1所述的一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，其特征在于：所述检测储存(6)，对蒸发后的溶液再次进行浓度检测，检测合格后将入到储罐中进行储存密封。
...【技术特征摘要】
1.一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，包括设计反应环境(1)、添加微量元素(2)、观测检验(3)、收集储存(4)、提纯(5)、检测储存(6)，其特征在于：所述首先培养节杆菌，蔗糖3～7g/l，牛肉膏25～40g/l，酵母膏2～3g/l，(nh4)2hpo48～12g/l，kh2po40.5～1g/l，mgso4·7h2o0.1～0.5g/l，余为水，节杆菌培养完成，设计反映环境(1)准备反映器皿，反应器皿规格为直径10-30cm的圆形器皿，器皿的温度为25-30℃，在器皿中放入节杆菌，器皿每天保持2-4小时的光照。
2.根据权利要求1所述的一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，其特征在于：所述添加微量元素(2)在fe2+，mn2+，co2+，cu2+，zn2+，mo6+，b3+，f-，k+中的任意一种或几种的组合，溶剂为水，单一溶液浓度为0.03g/l-0.05g/l，混合溶液浓度为0.01g/l-0.025g/l，每次添加10-60ml。
3.根据权利要求2所述的一种中间体环磷腺苷的生物制备方法，其特征在于：所述添加微量元素时，在器皿中随机选取6-10个位置，采用滴加的方式，在每个位置滴加1-4滴溶液，通过次黄嘌呤溶液和氢氧化钾溶液调节器皿中的酸碱度，使得酸碱度为4-6之间。
4.根据权利要求1所述的一种中间体环磷腺苷的生物制...
【专利技术属性】
技术研发人员：张燕，张泽林，
申请(专利权)人：美亚药业海安有限公司，
类型：发明
国别省市：
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