小花鬼针草药材毛细管电泳指纹图谱的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种小花鬼针草药材毛细管电泳指纹图谱的构建方法及其应用。该构建方法包括供试品溶液的制备，对照品溶液的制备以及毛细管电泳分析。对照品为水杨酸、芦丁和金丝桃苷中的一种或几种。本发明专利技术确立了小花鬼针草药材指纹图谱的构建方法，通过该方法可获得小花鬼针草的标准指纹图谱，完善了小花鬼针草药材的质量评价体系，克服了ＨＰＬＣ指纹图谱中损害色谱柱，有毒有机溶剂消耗量大，分析成本高且污染环境的缺点，为小花鬼针草药材及其饮片质量的全面有效控制提供了理论和实践基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药材的指纹图谱
，尤其涉及小花鬼针草药材指纹图谱的构 建方法及其应用。
技术介绍
在中药现代化的研究进程中，如何有效地评价中药材质量的好坏一直是中药研究 与应用的重点与难点问题。随着科技的发展，指纹图谱质控技术在中药材及其提取物制剂 质量控制中得到广泛应用。中药的色谱指纹图谱质量控制技术是对中药进行整体、宏观分 析的有效手段，其中应用最多的是HPLC指纹图谱，但中药提取物常损害色谱柱，消耗大量 的有毒有机溶剂，导致HPLC指纹图谱法分析成本高且污染环境。毛细管电泳法因其低消 耗、无污染、柱效高、样品处理简单而日益受到重视。小花鬼针草(Bidens parviflora ffilld.)为菊科鬼针草属植物，药用部位为干燥 全草，具有清热解毒、散瘀消肿的功效，主治咽喉肿痛、泄泻、痢疾，近年来有临床研究表明 鬼针草合剂治疗前列腺增生有明显的效果，用鬼针草液还可以治疗慢性前列腺炎。文献报 道小花鬼针草60%乙醇水溶液提取物具有较强的抑制前列腺癌细胞(LnCap细胞)分泌前 列腺特异性抗原(PSA)活性(100 μ g · mL—1，抑制率IR = 0. 54)。此外，从小花鬼针草中已 分离得到黄酮类、酚类、脂溶性、挥发性类等化合物，其中以黄酮类化合物最常见。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种小花鬼针草药材毛细管电泳指纹图谱的构建方法及其 应用，以此达到完善其质量评价体系，有效控制小花鬼针草药材质量的目的。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下小花鬼针草药材毛细管电泳指纹图谱的构建方法，包括下述主要步骤(1)供试品溶液的制备取小花鬼针草药材粉末4. 5 5. 5g，加入60% 80%乙 醇水溶液IOOmL,加热回流提取1 3次，提取液合并，过滤，滤液减压浓缩，可反复多次直至 滤液浓缩至干，残渣用甲醇溶解，并转移至容量瓶，用甲醇定容至刻度，然后用微孔滤膜过 滤，续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备称取对照品粉末，置于容量瓶中，分别加水溶解并定量稀 释成每ImL约含95 105 μ g的溶液，制成对照品溶液；(3)毛细管电泳分析分别吸取所述对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效毛 细管电泳仪中进行毛细管电泳分析，记录毛细管电泳图谱，电泳条件为石英毛细管，运行 电压为10 24kV，紫外检测波长254nm，流体力学进样10s，压力为5X103Pa。其中，对照品可以是水杨酸、芦丁和金丝桃苷中的一种或几种，优选芦丁。背景电 解质溶液是磷酸盐、硼酸、硼砂以及硼砂-硼酸混合液中的一种或几种，优选50mmol化―1硼 砂溶液与IOOmmol .Γ1硼酸溶液的混合液，硼砂溶液与硼酸溶液的体积比为2 1。运行 电压优选20kV。3基于上述小花鬼针草药材毛细管电泳指纹图谱的构建方法，专利技术人采集了 28批 不同产地的小花鬼针草药材样品，通过大批量实验研究，收集大批量仪器分析数据，并对大 批量仪器分析数据进行处理，从中提取特征信息，进而加以识别、计算，不仅进一步确立、验 证了该专属性强，并且稳定有效的小花鬼针草药材指纹图谱构建方法，并且得到了可有效 用于小花鬼针草药材质量评价的标准毛细管电泳指纹图谱。通过分析比较，确定了小花鬼针草药材的标准指纹图谱具有如下特征峰，以芦丁、 水杨酸、金丝桃苷为对照，计算得小花鬼针草药材标准指纹图谱中各特征峰的迁移时间及 理论塔板数分别如下9. 46min的峰为芦丁，10. 35min的峰为水杨酸，11. 22min的峰为金丝 桃苷，三个峰的理论塔板数分别为207283,22672，105835。标准指纹图谱中确定的上述共有特征峰具有广泛的代表性，在专利技术人购得的大量 小花鬼针草药材样品检测结果中均得到了证实，因此，该毛细管电泳指纹图谱的构建方法 及得到的指纹图谱可用于正品小花鬼针草药材或饮片质量的评价和控制。本专利技术分别考察了磷酸盐、硼酸、硼砂、硼砂_硼酸混合溶液构成的背景电解质溶 液，电泳色谱图显示采用硼砂-硼酸混合溶液为背景电解质溶液时的电泳峰分离较好；考 察不同配比的硼砂-硼酸混合溶液为背景电解质溶液时的电泳色谱峰，发现以50mmol ·厂1 硼砂溶液和IOOmmol化4硼酸溶液按2 1比例的混合液为背景电解质溶液时的电泳峰最 多，分离度较好，因此优选其为背景电解质溶液；考察PH变化对电泳色谱图的影响，发现pH 变化对电泳色谱峰没有明显改变；考察了运行时电压分别为10、15、18、20和24kV时电泳峰 的分离情况，结果以20kV时分离效果最佳。本专利技术另一方面提供了一种检测小花鬼针草药材质量的方法，是以毛细管电泳图 中的芦丁、水杨酸、金丝桃苷的迁移时间为对照，计算小花鬼针草药材毛细管电泳图谱中各 特征峰的迁移时间及理论塔板数。本专利技术还提供了小花鬼针草药材毛细管电泳指纹图谱的构建方法在检测小花鬼 针草药材及饮品质量方面的应用。与现有技术相比，本专利技术确立了小花鬼针草药材指纹图谱的构建方法，通过该方 法可获得小花鬼针草的标准指纹图谱，完善了小花鬼针草药材的质量评价体系，克服了 HPLC指纹图谱中损害色谱柱，有毒有机溶剂消耗量大，分析成本高且污染环境的缺点，为小 花鬼针草药材及其饮片质量的全面有效控制提供了理论和实践基础。附图说明图1所示是本专利技术实施例的供试品溶液和对照品溶液的毛细管电泳图。 具体实施例方式以下所述是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员 来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为 本专利技术的保护范围。1、仪器与试药HP3DCE高效毛细管电泳仪(美国安捷伦科技有限公司)，G1600-60210石英毛细 管(美国安捷伦科技有限公司)，PTS-1002超声仪(深圳博达超声设备有限公司)。硼酸(分析纯，广东汕头市西陇化工厂)，硼砂(分析纯，广东汕头市西陇化工 厂)，氢氧化钠(分析纯，广州化工分厂)，磷酸二氢钠(分析纯，广州化工分厂)，磷酸氢二 钠(分析纯，广州化工分厂)，甲醇(色谱纯，天津四友公司)，乙腈(色谱纯，Merck公司)， 水(Millipore-Q自制超纯水)，芦丁、水杨酸、金丝桃苷对照品(均购自中国药品生物制品 检验所，批号分别为 100080-200306，100106-200303，111521-200303)。小花鬼针草药材分别采自辽宁、黑龙江、吉林、山东、山西、甘肃、陕西、河南、四川、 重庆、广西、广东等28个产地，经沈阳药科大学生药教研室鉴定为小花鬼针草药材。2、溶液的制备(1)供试品溶液的制备将28批不同产地的小花鬼针草药材于60°C下干燥 30min,剪碎，分别精密称取5. Og,加60%乙醇水溶液IOOmL加热回流提取2次，提取液合 并，滤纸过滤，滤液减压浓缩至80mL，静置24h，滤纸过滤，滤液再减压浓缩至干，残渣用甲 醇20mL溶解，并转移至25mL容量瓶，用甲醇定容至刻度，然后用0. 45 μ m微孔滤膜过滤，取 续滤液备用。(2)对照品溶液的制备另取水杨酸对照品、芦丁对照品和金丝桃苷对照品适量， 精密称定，分别加水溶解并定量稀释成每ImL约含100 μ g的溶液，作为对照品溶液。3、电泳条件G1600-60210石英毛细管(64. 5cmX50 μ m，有本文档来自技高网...

【技术保护点】
小花鬼针草药材毛细管电泳指纹图谱的构建方法，包括下述主要步骤：（１）供试品溶液的制备：取小花鬼针草药材粉末４．５～５．５ｇ，加入６０％～８０％乙醇水溶液１００ｍＬ，加热回流提取１～３次，提取液合并，过滤，滤液减压浓缩，可反复多次直至滤液浓缩至干，残渣用甲醇溶解并转移至容量瓶，用甲醇定容至刻度，然后用微孔滤膜过滤，续滤液作为供试品溶液；（２）对照品溶液的制备：称取对照品粉末，置于容量瓶中，分别加水溶解并定量稀释成每１ｍＬ约含９５～１０５μｇ的溶液，制成对照品溶液；（３）毛细管电泳分析：分别吸取所述对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效毛细管电泳仪中进行毛细管电泳分析，记录毛细管电泳图谱；所述毛细管电泳条件为：石英毛细管，运行电压为１０～２４ｋＶ，紫外检测波长２５４ｎｍ，流体力学进样１０ｓ，压力为５×１０↑［３］Ｐａ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉兰，刘敏，庞发根，王珏，王军德，
申请(专利权)人：深圳市药品检验所，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]