一种用HPLC仪检测地沟油的方法技术

本发明专利技术涉及地沟油检测技术领域，特别是涉及一种用HPLC仪检测地沟油的方法；包括乙酸铵溶液配置、DBS标准储备溶液的配置、DBS标准系列溶液的配置、样品处理、HPLC仪色谱条件的构建、样品测定和结果判断等步骤，本发明专利技术以DBS为鉴别地沟油的特异性指标，利用高效液相色谱仪为主要检测工具，通过反复试验构建出完整的检测条件，本发明专利技术能快速、精确地检测鉴别出样品是否是地沟油，检出限为20μg/ml，弥补了现行国家标准缺陷。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及地沟油检测
，特别是涉及一种用HPLC仪检测地沟油的方法。
技术介绍
地沟油，是不法分子将下水道中的油腻漂浮物或者将宾馆、酒楼的剩饭、剩菜(通称泔水)回收，经过过滤、加热、沉淀、分离、脱色、洗油等工序加工、提炼出的油，其主要成分仍然是甘油三酯，这种被称作地沟油的三无产品，不仅质量极差、极不卫生，而且也比真正的食用油多了许多致病、致癌的毒性物质。一旦食用地沟油，它会破坏人们的白血球和消化道黏膜，引起食物中毒，甚至致癌的严重后果。所以地沟油是严禁用于食用油领域的。但是，也确有一些不法商贩受利益驱动而不顾人民群众生命安全私自生产加工地沟油并作为食用油低价销售给一些小餐馆，给人们的身心都带来极大伤害。购买普通食用油时，一般的消费者会被建议要学会感官鉴别。根据经验，食用植物油一般通过看、闻、尝、听、问五个方面来进行鉴别。但是对于对于掺杂有有害物质的劣质地沟油，仅仅靠人为的看、闻、尝、听的感官来进行鉴别是十分困难的。目前，国内尚未制定地沟油鉴别检测的国家标准方法，虽然国内外研究人员进行了一些探索，鉴别油脂优劣的常规指标一般是水分、含量、比重、折光率、皂化值、酸价、氧化值、过氧化值、羰基值、碘值、挥发性组分、动物油脂、醛和酮类化合物(合格食用油所不含的)、电导率等指标。但是对地沟油检测的研究报道并不多见，其主要原因是高酸值的地沟油成分比较复杂，其检测的特异性理化指标还处于实验研讨阶段，要准确定性定量目前仍比较困难。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的目的之一在于提供了一种用HPLC仪检测地沟油的方法；为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下一种用HPLC仪检测地沟油的方法，包括如下步骤步骤A、标准溶液的配置(1)、乙酸铵溶液称取乙酸铵加水溶解，摇勻配制成质量浓度为0. 6 0. 8mg/ml 的乙酸铵溶液；(2) ,DBS (十二烷基苯磺酸钠的简称，以下同)标准储备溶液取DBS加乙醇稀释， 摇勻配制成质量浓度为0. 5 2mg/ml的DBS标准储备溶液；(3) ,DBS标准系列溶液分别取DBS标准储备液加乙醇稀释，制得质量浓度分别为 4 μ g/ml UO μ g/ml, 20 μ g/ml, 50 μ g/ml UOO μ g/ml, 500 μ g/ml 的 DBS 标准系列溶液；在所构建的色谱条件下，分别精密量取 ο μ 1注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以DBS浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；步骤B、样品处理先取样品10.01111，加入乙醇10 201111，80 1001水浴加热5 101^11，涡旋混合 3 5min，5000 10000r/min离心5 lOmin，弃去油层，旋转蒸发至干；再加甲醇-2%乙酸的水溶液3 5ml复溶，5000 10000r/min离心5 lOmin，取上清液加入到已活化的固相萃取柱，接着用正己烷3 5ml淋洗，弃去淋洗液，最后用体积比为98 2的甲醇-乙酸铵溶液3 5ml洗脱，洗脱液用0. 45 μ m滤膜滤过，收集滤液，得到待测样品；步骤C、HPLC仪色谱条件的构建色谱柱(18柱O50mmX4.6mmX5ym)，流动相甲醇-乙酸铵混合溶液，所述甲醇和乙酸铵的体积比为75 85 15 25，流速1.Oml/min，检测波长244nm，柱温30 40°C;步骤D、样品测定和结果判断在构建的色谱条件下，精密量取待测样品10 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积，用所述DBS标准系列溶液所得标准曲线计算待测溶液中十二烷基苯磺酸钠含量；如待测样品色谱图中能检出与DBS标准物质色谱图中任一主峰保留时间一致的色谱峰，则表明待测样品中存在十二烷基苯磺酸钠，判断待测样品为地沟油(因为DBS实际上是一种由十、十一、十二和十三烷基苯磺酸钠组成的混合物，所以只要待测样品色谱图中能检出与DBS标准物质色谱图中任一主峰保留时间一致的色谱峰，则表明待测样品中存在十二烷基苯磺酸钠，判断待测样品为地沟油)。较佳地、所述乙醇为体积浓度为40 60%的乙醇溶液。较佳地、步骤B样品处理中，所述涡旋混合3 5min后，重复80 100°C水浴加热 5 IOmin两次。较佳地、步骤B样品处理中，所述已活化的固相萃取柱为依次用甲醇3ml和水:3ml 活化的固相萃取柱。其筛查原理为地沟油，是不法分子将下水道中的油腻漂浮物或者将宾馆、酒楼的剩饭、剩菜(通称泔水)回收，经过过滤、加热、沉淀、分离、脱色、洗油等工序加工、提炼出的油。DBS(十二烷基苯磺酸钠的简称)为常用洗涤剂，被大量使用于餐饮业的清洗消毒环节中，具有中等毒性，动物实验表明有明显促致癌作用。该物质在天然食用油中不可能存在， 但用于精制地沟油的原材料-含有洗碗水中的洗涤剂，且加工、精制过程难以去除该洗涤剂化学成分，导致性质稳定的DBS残留在地沟油中，因此，选择DBS作为鉴别地沟油的特异指标，专属性强。本专利技术包括乙酸铵溶液配置、DBS标准储备溶液的配置、DBS标准系列溶液的配置、样品处理、HPLC仪色谱条件的构建、样品测定和结果判断等步骤，以DBS为鉴别地沟油的特异性指标，利用高效液相色谱仪为主要检测工具，通过反复试验构建出完整的检测条件，本专利技术能快速、精确地检测鉴别出样品是否是地沟油，检出限为20yg/ml，弥补了现行国家标准缺陷。附图说明图1为溶剂空白HPLC图谱，图2为DBS对照HPLC图谱，图3为地沟油HPLC图谱。具体实施例方式为了使本领域技术人员更好的理解本专利技术，以下通过几个具体实施例来进行详尽说明。实施例1一种用HPLC仪检测地沟油的方法，包括如下步骤步骤A、标准溶液的配置(1)、乙酸铵溶液称取乙酸铵0. 3855g，加水500ml溶解，摇勻，即得；(2)、DBS标准储备溶液取DBS约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇勻、即得；(3)、DBS标准系列溶液分别取DBS标准储备液适量，加50%乙醇稀释，制得含 DBS 分别为 4μ g/ml、10y g/ml、20y g/ml、50y g/ml、100y g/ml、500y g/ml 的标准系列溶液；在所构建的色谱条件下，分别精密量取 ο μ 1注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以DBS 浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；步骤B、样品处理取样品10. Oml，加入50 %乙醇20ml，80 °C水浴加热20min，涡旋混合5min，自 “80°C水浴加热20min”重复二次，10000r/min离心lOmin，弃去油层，旋转蒸发至干，加加甲醇-2 %乙酸的水溶液3ml复溶，10000r/min离心lOmin，取上清液加入到已活化的固相萃取柱(依次用甲醇3ml和水3ml活化)，用正己烷3ml淋洗，弃去淋洗液，用体积比为98 2 的甲醇-乙酸铵溶液3ml洗脱，洗脱液用0. 45 μ m滤膜滤过，收集滤液，得到待测样品。步骤C、HPLC仪色谱条件的构建色谱柱C18柱 Q50mmX4. 6mmX5ym)；流动相甲醇-乙酸铵(80 20)混合溶液；流速1. Oml/min ；检测波长244nm；柱温40°C；步骤D、样品测定和结果判断在构建的色谱条件下，精密量取待测样品10 μ 1，注入高效液相色谱仪本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：殷果，王铁杰，鲁艺，谢普，闫研，江坤，黎雪清，
申请(专利权)人：深圳市药品检验所，
类型：发明
国别省市：