【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于水产养殖品种遗传育种，具体地涉及一种生产香港牡蛎和熊本牡蛎四倍体及杂交获得三倍体的方法。
技术介绍
1、香港牡蛎(crass0strea hongkongensis)和熊本牡蛎(crassostrea sikamea)都隶属软体动物门(mollusca)、双壳纲(bivalvia)、翼形亚纲(pterimorphia)、牡蛎目(ostreoida)、牡蛎科(ostreidae)、巨蛎属(crassostrea)，同属于半咸水型的牡蛎类群。
2、香港牡蛎自然分布于我国南方海域，适合高温低盐环境，是福建、广东、广西地区重要的养殖经济种类，体型大且生长快速。香港牡蛎在长期的人工繁育过程中也出现了很多问题，主要表现在近交种质退化、不名原因的规模死亡以及生长缓慢等方面。
3、熊本牡蛎在我国自然资源丰富，广泛分布于江苏南通以南的海湾及河口地区，适高温、中高盐海域，养殖区域主要分布在浙江省。熊本牡蛎相较于香港牡蛎体型较小，但肉质细腻香甜，深受当地消费者喜爱，也具有很高的经济价值。
4、三倍体牡蛎因具有三套染色体组，表现出不育或高度不育的生物学特性，具有生长快、产量高、周年糖原含量稳定等优点，也解决了普通的二倍体牡蛎因夏季繁殖期后消瘦透明而无法上市的难题，同时三倍体牡蛎是利用四倍体和二倍体杂交获得，也规避了由于近交繁育出现的种质退化。经过近几年的推广和市场的选择，长牡蛎三倍体(前沿1号)的养殖规模已经占北方牡蛎养殖的70％以上，福建牡蛎三倍体和杂交牡蛎(长牡蛎x福建牡蛎)三倍体也已经在我国南北方
5、不同学者对二倍体熊本牡蛎和二倍体香港牡蛎的种间杂交进行了初步研究，目前国内还未有熊本牡蛎与香港牡蛎杂交生产三倍体牡蛎的报道。稳定获得香港牡蛎四倍体和熊本牡蛎四倍体是生产三倍体的前提，四倍体牡蛎可以用正常受精的二倍体卵子抑制极体释放获得，也可以通过用三倍体牡蛎卵子和正常二倍体精子受精，抑制极体释放获得(cn1144454a，cn109730008a)，关于香港牡蛎四倍体的制备方法在2017年也有报到(cn107494358a)。但目前生产香港牡蛎四倍体和熊本牡蛎四倍体方法存在不稳定、存活率极低以及倍化率低且倍性不稳定的局限性，以至于尚未见有报到获得四倍体香港牡蛎和四倍体熊本牡蛎的成贝。
技术实现思路
1、本专利技术解决的技术问题在于提供一种生产香港牡蛎和熊本牡蛎四倍体及杂交获得三倍体的方法，为牡蛎养殖提供优良的香港牡蛎四倍体、熊本牡蛎四倍体、熊香杂交三倍体和香熊杂交三倍体。
2、本专利技术通过以下技术方案来实现：
3、一种生产香港牡蛎四倍体的方法，所述的方法为先用30℃高温和盐度的变化刺激三倍体香港牡蛎7天，初始盐度8‰，每天升高2‰至盐度16‰保持，再把三倍体香港牡蛎放25℃的水温下培育至性成熟，取三倍体雌贝卵子中直径从大到小排列，取排名靠前的1/3的卵子和二倍体香港牡蛎的精子受精；从受精后5分钟起，用0.45-0.75mg/l细胞松弛素b(cb)或35-75mg/l6-二甲基氨基嘌呤(6dmap)处理受精卵16分钟，抑制第一极体排放；室内培育阶段温度25℃，盐度15‰，幼虫附着变态后，在海上养殖到成贝获得香港牡蛎四倍体。
4、进一步，所述的30℃高温和盐度变化刺激三倍体香港牡蛎7天之后，温度直接降到25℃，盐度保持不变为16‰。
5、本专利技术还提供一种熊本牡蛎二倍体和香港牡蛎四倍体(熊本2n♀x香港4n♂)杂交获得三倍体的方法，所述方法为亲本培育、人工授精与孵化和幼体培育；
6、所述亲本培育：进行亲本性腺促熟时，为使熊本牡蛎和香港牡蛎性腺发育同步，熊本牡蛎比香港牡蛎早促熟35-45天，根据熊本牡蛎性腺发育情况开始香港牡蛎的性腺促熟工作，先用30℃高温和盐度的变化刺激四倍体香港牡蛎7天，初始盐10‰，每天升高2‰至盐度18‰保持，再把水温每天降1℃、逐渐降至25℃培育30-40天至性腺发育成熟；二倍体熊本牡蛎亲本培育初始温度16℃，后逐渐升温至27℃，初始盐度24-26‰，15天后盐度调整为正常海水盐度16-18‰，培育至性腺发育成熟；
7、所述人工授精与孵化：从大到小排列选用排名在前10％的熊本牡蛎雌贝，收集卵子，收集的卵子在海水中浸泡40-60分钟进行熟化；从大到小排列选用排名在前10％四倍体香港牡蛎雄贝，获取精子；按每个卵子200-300个活跃精子的比例进行授精，孵化，温度25℃，盐度18‰，受精卵孵化密度50个卵/毫升；
8、所述幼体培育：前期幼虫培养密度8-12个/毫升，温度25℃，盐度18‰，金藻为开口饵料，随着幼虫生长，调整幼虫培养密度，饵料投喂量应逐渐增加，幼虫壳长150μm以上时添加包括扁藻、小球和硅藻在内的藻类；出苗前温度和盐度分别每天降低0.5℃和0.5‰，调整至与养殖海域的温度和盐度相差≤3。
9、进一步，所述的亲本培育中，观察熊本牡蛎性腺组织液变少、卵细胞清晰时，开始香港牡蛎的性腺促熟工作。
10、本专利技术还提供一种生产熊本牡蛎四倍体的方法，所述的方法为先用30℃高温和盐度的变化刺激三倍体熊本牡蛎7天，初始盐度30‰，每天降低2‰至盐度20‰保持，再把三倍体熊本牡蛎放25℃的水温下培育至性成熟，取三倍体雌贝卵子按照从大到小的顺序进行排列，取其中直径排名靠前的1/3和二倍体熊本牡蛎的精子受精；从受精后5分钟起，用0.40-0.60mg/l细胞松弛素b(cb)或30-60mg/l6-二甲基氨基嘌呤(6dmap)处理受精卵15分钟，抑制第一极体排放；室内培育阶段温度25℃，盐度20，幼虫附着变态后，在海上养殖到成贝获得熊本牡蛎四倍体。
11、进一步，所述的30℃高温和盐度变化刺激熊本牡蛎四倍体7天之后，温度直接降到25℃，盐度保持不变为20‰。
12、本专利技术还提供一种香港牡蛎二倍体和熊本牡蛎四倍体(香熊杂交组合(香港2n♀x熊本4n♂))杂交获得三倍体的方法，所述方法为亲本培育、人工授精与孵化和幼体培育；
13、所述的亲本培育：先用30℃高温和盐度的变化刺激四倍体熊本牡蛎7天，初始盐度28‰，每天降低2‰至盐度18‰保持，再把水温每天降1度、逐渐降至25℃培育至性腺发育成熟；二倍体香港牡蛎亲本培育初始温度16℃，后逐渐升温至25℃，初始盐度12-14‰，15天后盐度调整为正常海水盐度16-18‰，培育至性腺发育成熟；
14、所述人工授精与孵化：从大到小排列选用排名在前10％香港牡蛎的雌贝，收集卵子，收集的卵子在海水中浸泡40-60分钟进行熟化；从大到小排列选用排名在前10％四倍体熊本牡蛎雄贝，获取精子；按每个卵子200-300个活跃精子的比例进本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种生产香港牡蛎四倍体的方法，其特征在于，所述的方法为先用30℃高温和盐度的变化刺激三倍体香港牡蛎7天，初始盐度8‰，每天升高2‰至盐度16‰保持，再把三倍体香港牡蛎放25℃的水温下培育至性成熟，取三倍体雌贝卵子中直径从大到小排列，取排名靠前的1/3的卵子和二倍体香港牡蛎的精子受精；从受精后5分钟起，用0.45-0.75mg/L细胞松弛素B或35-75mg/L6-二甲基氨基嘌呤处理受精卵16分钟，抑制第一极体排放；室内培育阶段温度25℃，盐度15‰，幼虫附着变态后，在海上养殖到成贝获得香港牡蛎四倍体。
2.根据权利要求1所述的一种生产香港牡蛎四倍体的方法，其特征在于，所述的30℃高温和盐度变化刺激三倍体香港牡蛎7天之后，温度直接降到25℃，盐度保持不变为16‰。
3.一种雌性熊本牡蛎二倍体和雄性香港牡蛎四倍体杂交获得三倍体的方法，所述方法包括亲本培育、人工授精与孵化和幼体培育；其特征在于，
4.根据权利要求3所述的获得三倍体的方法，其特征在于，所述的亲本培育中，观察熊本牡蛎性腺组织液变少、卵细胞清晰时，开始香港牡蛎的性腺促熟工作。
<...【技术特征摘要】
1.一种生产香港牡蛎四倍体的方法，其特征在于，所述的方法为先用30℃高温和盐度的变化刺激三倍体香港牡蛎7天，初始盐度8‰，每天升高2‰至盐度16‰保持，再把三倍体香港牡蛎放25℃的水温下培育至性成熟，取三倍体雌贝卵子中直径从大到小排列，取排名靠前的1/3的卵子和二倍体香港牡蛎的精子受精；从受精后5分钟起，用0.45-0.75mg/l细胞松弛素b或35-75mg/l6-二甲基氨基嘌呤处理受精卵16分钟，抑制第一极体排放；室内培育阶段温度25℃，盐度15‰，幼虫附着变态后，在海上养殖到成贝获得香港牡蛎四倍体。
2.根据权利要求1所述的一种生产香港牡蛎四倍体的方法，其特征在于，所述的30℃高温和盐度变化刺激三倍体香港牡蛎7天之后，温度直接降到25℃，盐度保持不变为16‰。
3.一种雌性熊本牡蛎二倍体和雄性香港牡蛎四倍体杂交获得三倍体的方法，所述方法包括亲本培育、人工授精与孵化和幼体培育；其特征在于，
4.根据权利要求3所述的获得三倍体的方法，其特征在于，所述的亲本培育中，观察熊本牡蛎性腺组织液变少、卵细胞清晰时，开始香港牡蛎的性腺促熟工作。
5...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭希瑞，李晓喻，李雅林，付杰，纪右康，郭晓雨，王贡明，
申请(专利权)人：青岛前沿海洋种业有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。