一种斑马鱼gnai2a基因突变体模型建立方法技术

本发明专利技术涉及基因编辑技术领域，公开了斑马鱼gnai2a基因编辑靶位点gRNA的设计合成以及突变体模型建立的方法。根据CRISPR/Cas9基因编辑原理，在斑马鱼的gnai2a基因一号外显子上设计两个高效且低脱靶效应的靶位点gRNA。利用体外转录技术合成靶位点gRNA，并将其和Cas9蛋白，显微共注射至斑马鱼一细胞期受精卵中，胚胎培养至48hpf后，通过随机选取胚胎进行基因型分析，从而证实所选靶位点的有效性，并将有效编辑的胚胎培育至成年进行传代繁育，得到纯合子突变体后代。本发明专利技术能更高效且更精确地在生物体基因组中编辑特定基因，操作简单、成本低，可同时对靶基因上多个位点进行编辑以及沉默任意数目的单个基因。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因编辑，具体涉及crispr/cas9 系统介导的斑马鱼 gnai2a基因突变体的构建方法。

技术介绍

1、  gnai2a（ guanine nucleotide binding protein (g protein), alphainhibiting activity polypeptide 2a ）基因位于斑马鱼第 11号染色体上，包含9个外显子和8个内含子，mrna全长2603bp，编码355个氨基酸。 gnai2a 属于小g蛋白家族成员，编码的蛋白质含有鸟嘌呤核苷酸结合位点，包含一个高度保守的gα结构域，具有gtp酶活性。鸟嘌呤核苷酸结合蛋白（g 蛋白）作为各种跨膜信号系统中的调节因子或信号转导因子，参与调节多种细胞生命活动。

2、斑马鱼与人类发育过程中的调控基因、信号转导具有高度同源性，且 gnai2a基因进化上较为保守，研究发现 gn本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.斑马鱼gnai2a基因编辑靶位点gRNA的设计合成及突变体模型建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的斑马鱼gnai2a基因编辑靶位点gRNA的设计合成方法，其特征在于，步骤（1）中靶位点的选择遵循以下标准：靶位点的3’端是NGG结构；靶点的位置在基因的蛋白编码区或功能结构域内。

3.根据权利要求1所述的斑马鱼gnai2a基因编辑靶位点gRNA的设计合成方法，其特征在于，步骤（3）中所述的PCR扩增实验中所用的PCR酶为高保真DNA聚合酶产品。

4.根据权利要求1所述的斑马鱼gnai2a基因编辑靶位点gRNA的设计合成方法，...

【技术特征摘要】

1.斑马鱼gnai2a基因编辑靶位点grna的设计合成及突变体模型建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的斑马鱼gnai2a基因编辑靶位点grna的设计合成方法，其特征在于，步骤（1）中靶位点的选择遵循以下标准：靶位点的3’端是ngg结构；靶点的位置在基因的蛋白编码区或功能结构域内。

3.根据权利要求1所述的斑马鱼gnai2a基因编辑靶位点grna的设计合成方法，其特征在于，步骤（3）中所述的pcr扩增实验中所用的pcr酶为高保真dna聚合酶产品。

4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡翔，黄淑兰，苏娜，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：