【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤类器官培养，具体地，本专利技术涉及一种食管鳞癌类器官的无血清专用培养基和培养方法。
技术介绍
1、食道鳞癌是世界上第六大致死癌种，由多种复杂的原因引起，因组织学分型及人口差异而有所不同。食道鳞癌通常分为食管鳞癌(escc)和食管腺癌(eadc)，具有几乎完全不同的地理分布，事件趋势和主要病因，无论是何种病因，该疾病的预后性都较差。
2、类器官是指将干细胞或前体细胞在体外三维培养，通过细胞自我增殖、定向分化和谱系定型及自我组装形成的，具有器官特异性的细胞组成、关键结构和功能特性的培养物。类器官能够部分甚至完全还原体内器官的细胞构成和结构功能，并在长期扩增的同时保持遗传和表型的稳定，解决了传统生物模型无法模拟组织器官的困难，使体外组织器官的研究从二维细胞的表层水平转向三维组织的深层水平，为器官发育等基础研究提供了一个良好模型，为医学转化和疾病治疗开辟了一条创新途径。
3、然而，世界上对于食管鳞癌类器官的构建与研究非常有限，涉及食管鳞癌的培养，目前所有已公开的资料显示原代培养成功率低，且均无法有效地长期传代。因此，亟需研发一种适于食管鳞癌类器官生长的培养方法。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。
2、为了提高食管鳞癌类器官原代培养的成功率，满足食管鳞癌类器官的营养需求，本专利技术提出了一种食管鳞癌类器官的培养基，所述培养基含有ptn(多效蛋白)和mdk(中期因子)因子。通过实验验证，
3、因此，在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种培养基。根据本专利技术的实施例，所述培养基包括基础培养基以及添加物，所述添加物包括多效蛋白和中期因子的至少之一以及n-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、rock抗凋亡因子、alk 5抑制因子、noggin蛋白和血清替代物bplus。专利技术人经过不断试验发现，当培养基中含有上述的添加物时，对食管鳞癌类器官的生长有明显的促进作用，提高食管鳞癌类器官的细胞活性。
4、需要说明的是，本申请中所涉及的“多效蛋白”为ptn，ptn是通过细胞表面蛋白多糖和非蛋白多糖受体介导其信号的分泌生长因子，能够结合alk(间变性淋巴瘤激酶)并通过mapk途径激活促进细胞存活和细胞增殖；本申请中所涉及的“中期因子”为mdk，mdk通过硫酸软骨素(cs)组结合细胞表面蛋白聚糖受体，从而调节许多生命过程，并促进肿瘤细胞异常增殖；本申请中所涉及的“rock抗凋亡因子”为y27632(rock为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，rock蛋白在肿瘤中的发生发展中起着重要作用)；本申请中所涉及的“alk 5抑制因子”为a83-01(a83-01是一个强有力的tgf-βⅰ型受体alk-5(ic50：12nm)/alk4((ic50：45nm)/alk 7(ic50：7.5nm)激酶的抑制剂，a83-01对alk-5的抑制作用很强)；本申请所述的“noggin蛋白”是bmp信号通路的抑制因子；本申请所述的“血清替代物b plus”为血小板裂解物，与血清一样，能够促进细胞的生长繁殖。
5、根据本专利技术的实施例，所述添加物包括多效蛋白、n-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、rock抗凋亡因子、alk 5抑制因子、noggin蛋白和血清替代物b plus。专利技术人经过不断试验发现，当培养基中含有所述的添加物时，对食管鳞癌类器官的生长有明显的促进作用，提高食管鳞癌类器官的细胞活性。
6、根据本专利技术的实施例，所述添加物包括中期因子、n-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、rock抗凋亡因子、alk 5抑制因子、noggin蛋白和血清替代物b plus。专利技术人经过不断试验发现，当培养基中含有所述的添加物时，对食管鳞癌类器官的生长有明显的促进作用，提高食管鳞癌类器官的细胞活性。
7、根据本专利技术的实施例，所述添加物包括多效蛋白、中期因子、n-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、rock抗凋亡因子、alk 5抑制因子、noggin蛋白和血清替代物b plus。专利技术人经过不断试验发现，当培养基中含有所述的添加物时，对食管鳞癌类器官的生长有明显的促进作用，提高食管鳞癌类器官的细胞活性。
8、根据本专利技术的实施例，所述基础培养基为dmem/f12培养基。
9、根据本专利技术的实施例，所述多效蛋白为ptn。因此，所述培养基能够促进细胞存活和细胞增殖。
10、根据本专利技术的实施例，所述中期因子为mdk。因此，所述培养基能够调节许多生命过程，并促进肿瘤细胞异常增殖。
11、根据本专利技术的实施例，所述rock抗凋亡因子为y27632。
12、根据本专利技术的实施例，所述alk 5抑制因子为a83-01。
13、根据本专利技术的实施例，所述基础培养基进一步包括氢离子缓冲剂和glutamax。因此，所述培养基能够满足细胞生长的基本营养需求。
14、根据本专利技术的实施例，所述氢离子缓冲剂为4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
15、根据本专利技术的实施例，所述氢离子缓冲剂在所述培养基中的体积分数为0.5～2％。
16、根据本专利技术的具体实施例，所述氢离子缓冲剂在所述培养基中的体积分数为1％。
17、需要说明的是，本申请所述的“氢离子缓冲剂”储液中的成分为4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)，该成分浓度为1m。
18、根据本专利技术的实施例，所述glutamax在所述培养基中的体积分数为0.5～2％。
19、根据本专利技术的具体实施例，所述glutamax在所述培养基中的体积分数为1％。
20、需要说明的是，本申请所述的“glutamax”储液的浓度为200mm。
21、根据本专利技术的实施例，所述基础培养基进一步包括抗菌成分。因此，进一步确保该培养基能够有利于食管鳞癌类器官的培养，避免食管鳞癌类器官被污染。
22、根据本专利技术的实施例，所述抗菌成分为青链霉素双抗。
23、根据本专利技术的实施例，所述青链霉素双抗在所述培养基中的浓度为90～110iu/ml。
24、根据本专利技术的实施例，所述青链霉素双抗在所述培养基中的浓度为100iu/ml。
25、根据本专利技术的实施例，所述n-乙酰半胱氨酸在所述培养基中的浓度为1～1.5mm，所述烟酰胺在所述培养基中的浓度为0.05～1μg/ml，所述rock抗凋亡因子在所述培养基中的浓度为5～20μm，所述alk 5抑制因子在所述培养基中的浓度为0.1～1μ本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种培养基，其特征在于，包括基础培养基以及添加物，所述添加物包括多效蛋白和中期因子的至少之一以及N-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、ROCK抗凋亡因子、ALK-5抑制因子、Noggin蛋白和血清替代物B plus。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述添加物包括多效蛋白、N-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、ROCK抗凋亡因子、ALK-5抑制因子、Noggin蛋白和血清替代物B plus。
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述添加物包括中期因子、N-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、ROCK抗凋亡因子、ALK-5抑制因子、Noggin蛋白和血清替代物B plus。
4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述添加物包括多效蛋白、中期因子、N-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、ROCK抗凋亡因子、ALK 5抑制因子、Noggin蛋白和血清替代物Bplus。
5.根据权利要求1～4任一项所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；
6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基进一步包括氢离子缓冲剂和Gl
7.根据权利要求6所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基进一步包括抗菌成分；
8.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述N-乙酰半胱氨酸在所述培养基中的浓度为1～1.5mM，所述烟酰胺在所述培养基中的浓度为0.05～1μg/mL，所述ROCK抗凋亡因子在所述培养基中的浓度为5～20μM，所述ALK 5抑制因子在所述培养基中的浓度为0.1～1μM，所述Noggin蛋白在所述培养基中的浓度为0.05～1μg/mL，所述血清替代物Bplus在所述培养基中的体积分数为1～3％。
9.根据权利要求2或8所述的培养基，其特征在于，所述多效蛋白在所述培养基中的浓度为0.05～1μg/mL。
10.根据权利要求3或8所述的培养基，其特征在于，所述中期因子在所述培养基中的浓度为0.05～1μg/mL。
11.根据权利要求4或8所述的培养基，其特征在于，所述多效蛋白在所述培养基中的浓度为0.05～1μg/mL，所述中期因子在所述培养基中的浓度为0.05～1μg/mL。
12.权利要求1～11任一项所述的培养基在培养食管鳞癌类器官中的用途。
13.一种制备食管鳞癌类器官的方法，其特征在于，包括：
14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述食管鳞癌细胞分离自食管鳞癌组织。
...【技术特征摘要】
1.一种培养基，其特征在于，包括基础培养基以及添加物，所述添加物包括多效蛋白和中期因子的至少之一以及n-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、rock抗凋亡因子、alk-5抑制因子、noggin蛋白和血清替代物b plus。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述添加物包括多效蛋白、n-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、rock抗凋亡因子、alk-5抑制因子、noggin蛋白和血清替代物b plus。
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述添加物包括中期因子、n-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、rock抗凋亡因子、alk-5抑制因子、noggin蛋白和血清替代物b plus。
4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述添加物包括多效蛋白、中期因子、n-乙酰半胱氨酸、烟酰胺、rock抗凋亡因子、alk 5抑制因子、noggin蛋白和血清替代物bplus。
5.根据权利要求1～4任一项所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基为dmem/f12培养基；
6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基进一步包括氢离子缓冲剂和glutamax；
7.根据权利要求6所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基进一步包括抗菌...
【专利技术属性】
技术研发人员：董亚腾，朱恩吉，罗克，
申请(专利权)人：伯桢生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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