【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体地，本专利技术涉及经类器官培养驯化pdx的方法及其应用。
技术介绍
1、头颈癌，又称为头颈部恶性肿瘤，主要包括口腔、口咽部、喉部及下咽部等多个部位的恶性肿瘤。全球发病率超过50万，据统计，2021年中国头颈癌患者确诊数达15万左右，呈逐年上升趋势。在所有类型中，头颈部鳞癌占头颈部癌症的90％以上。对于早期头颈鳞癌，采用手术或放疗可以取得较好疗效。目前，临床上70％-80％的患者确诊时已处于局部晚期或晚期，因头颈鳞癌对化疗药敏感，同步放化疗治疗模式成为了治疗晚期头颈鳞癌的标准模式，但仍存在复发率高、生存率低的问题。因此，亟需更加有效的治疗方式来治疗头颈鳞癌。
2、研究头颈鳞癌的病理机制和寻找有效治疗药物是关键，但目前缺乏可靠的模型来预测药物效果和指导临床用药。pdx是预测临床结果的最佳临床前体内模型，pdx可以如实概括在癌组织中观察到的基因组和表型复杂性，保留原始患者的肿瘤异质性。但pdx模型构建较难，周期长，成本高。因此亟需开发一种高效的头颈鳞癌模型建立方法。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术提供经类器官培养驯化pdx的方法及其应用。该建立方法可快速实现pdx模型转化为pdxo模型，并对其培养体系进行了优化，得到的头颈鳞癌pdxo模型可以较好地模拟头颈鳞癌的病理特征和基因组特征，可将此模型用于药物的高通量筛选。
2、为此，本专利技术第一方面提供一种培养头颈鳞癌类器官的培
3、基础培养基、bmp2、igf2、ltbp2、egf、hgf。
4、专利技术人经过大量实验得到上述较优培养基，使用该培养基培养的头颈鳞癌类器官生长状态良好，培养效率得到显著提高，极大减少了头颈鳞癌类器官的培养周期和成本。
5、根据本专利技术的实施例，所述bmp2在所述培养基中的终浓度为50-200ng/ml。由此，可促进头颈鳞癌类器官的生长和发育。
6、根据本专利技术的实施例，所述igf2在所述培养基中的终浓度为50-200ng/ml。由此，可促进头颈鳞癌类器官的生长和发育。
7、根据本专利技术的实施例，所述ltbp2在所述培养基中的终浓度为50-200ng/ml。由此，可促进头颈鳞癌类器官的生长和发育。
8、根据本专利技术的实施例，所述egf在所述培养基中的终浓度为50-200ng/ml。由此，可促进头颈鳞癌类器官的生长和发育。
9、根据本专利技术的实施例，所述hgf在所述培养基中的终浓度为50-200ng/ml。由此，可促进头颈鳞癌类器官的生长和发育。
10、根据本专利技术的实施例，所述基础培养基包括选自advanced dmem/f12培养基、prmi1640培养基中的至少一种。
11、根据本专利技术的实施例，所述培养基进一步包括：b27、glutamax、rock抑制剂。由此，可促进头颈鳞癌类器官的生长和发育。
12、根据本专利技术的实施例，所述rock抑制剂包括选自y-27632、thiazovivin中的至少一种。
13、根据本专利技术的实施例，所述rock抑制剂为y-27632，所述y-27632在所述培养基中的终浓度为1-5μm。由此，可显著抑制头颈鳞癌类器官凋亡。
14、根据本专利技术的实施例，所述b27在所述培养基中的体积分数为1-3％。
15、根据本专利技术的实施例，所述glutamax在所述培养基中的体积分数为0.5-1.5％。
16、根据本专利技术的实施例，所述培养基进一步包括青霉素-链霉素双抗、hepes。
17、根据本专利技术的实施例，所述青霉素-链霉素双抗在所述培养基中的体积分数为0.5-1.5％。
18、根据本专利技术的实施例，所述hepes在所述培养基中的终浓度为1-10mm。
19、本专利技术第二方面提供第一方面所述的培养基在培养头颈鳞癌类器官中的用途。专利技术人经过实验发现，采用第一方面所述的培养基获得的头颈鳞癌类器官生长状态良好，且培养效率得到显著提高，减少了头颈鳞癌类器官的培养周期和成本。
20、本专利技术第三方面提供一种头颈鳞癌pdxo模型的建立方法，包括以下步骤：
21、(1)取头颈鳞癌pdx模型的肿瘤组织进行消化处理或取已进行消化后冻存的肿瘤细胞进行复苏处理，获得肿瘤单细胞；
22、(2)使用培养基培养步骤(1)得到的肿瘤单细胞，得到头颈鳞癌类器官；
23、其中，所述培养基为第一方面所述的培养基。
24、目前，各种类型癌症的发病率高、临床表现多变、预后差，但缺乏可靠的模型来预测药物效果和指导临床用药，而pdxo模型在临床前高通量筛选药物及预测药效中有明显优势。专利技术人经过大量的实验研究，将头颈鳞癌pdx模型转化为pdxo模型，并采用优化的培养体系进行培养。该方法不受组织来源的限制，无论是取新鲜头颈鳞癌pdx模型的肿瘤组织，或是已进行消化后冻存的肿瘤细胞，均可用于此方法。随着培养时间的延长，活细胞会逐渐生长为具有3d结构的头颈鳞癌类器官，得到的类器官可以较好地模拟头颈鳞癌的病理特征和基因组特征，用此模型进行药物高通量筛选获得的数据真实性更高。
25、根据本专利技术的实施例，步骤(1)中所述消化处理包括采用消化液对所述肿瘤组织进行组织消化处理。
26、根据本专利技术的实施例，所述消化液包括：基础培养基、胰蛋白酶、dna酶和rock抑制剂。
27、根据本专利技术的实施例，所述基础培养基包括选自advanced dmem/f12培养基、prmi1640培养基中的至少一种。
28、根据本专利技术的实施例，所述rock抑制剂包括选自y-27632、thiazovivin中的至少一种。
29、根据本专利技术的实施例，所述rock抑制剂为y-27632，所述y-27632在所述消化液的终浓度为1-10μm。
30、根据本专利技术的实施例，所述胰蛋白酶在所述消化液的体积分数为0.1-0.5％。
31、根据本专利技术的实施例，所述dna酶在所述消化液的终浓度为10-50u/ml。
32、本专利技术第四方面提供一种头颈鳞癌pdxo模型，所述头颈鳞癌pdxo模型采用第三方面所述的建立方法得到。
33、通过本专利技术第三方面所述的建立方法得到的头颈鳞癌pdxo模型可以较好地模拟头颈鳞癌的病理特征和基因组特征，用此模型进行药物高通量筛选获得的数据真实性更高。
34、本专利技术第五方面提供第四方面所述的头颈鳞癌pdxo模型在药物筛选中的用途。所述头颈鳞癌pdxo模型可以较好地模拟头颈鳞癌的病理特征和基因组特征，用于药物筛选具有广阔前景。
35、本专利技术第六方面提供一种筛选治疗头颈鳞癌药物的方法，所述方法包括：
36、将头颈鳞癌类器官与待筛选药物接触，比较接触前后所述头颈鳞癌类器官中细胞活力变化，所述细胞活力降低是所述待筛选药物为治本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种培养头颈鳞癌类器官的培养基，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述BMP2在所述培养基中的终浓度为50-200ng/mL；
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基包括选自AdvancedDMEM/F12培养基、PRMI 1640培养基中的至少一种；
4.权利要求1-3任一项所述的培养基在培养头颈鳞癌类器官中的用途。
5.一种头颈鳞癌PDXO模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的建立方法，其特征在于，步骤(1)中所述消化处理包括采用消化液对所述肿瘤组织进行组织消化处理；
7.一种头颈鳞癌PDXO模型，其特征在于，所述头颈鳞癌PDXO模型采用权利要求5或6所述的建立方法得到。
8.权利要求7所述的头颈鳞癌PDXO模型在药物筛选中的用途。
9.一种筛选治疗头颈鳞癌药物的方法，其特征在于，所述方法包括：
【技术特征摘要】
1.一种培养头颈鳞癌类器官的培养基，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述bmp2在所述培养基中的终浓度为50-200ng/ml；
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基包括选自advanceddmem/f12培养基、prmi 1640培养基中的至少一种；
4.权利要求1-3任一项所述的培养基在培养头颈鳞癌类器官中的用途。
5.一种头颈鳞癌pd...
【专利技术属性】
技术研发人员：惠贤瑞，黄丹娜，
申请(专利权)人：伯桢生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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