【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物分析检测领域中的病毒抗体检测，特别涉及一种仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒及其多瘤病毒抗体的检测方法。
技术介绍
1、仓鼠属哺乳纲、啮齿目动物，仓鼠科(cricetidae)是哺乳动物的最大科，现存种类超过600种，中国仓鼠和叙利亚仓鼠是其最为常用的2个实验动物品种。
2、多瘤病毒(polyoma virus)在分类上属乳多空病毒科，多瘤病毒属，是一种高度稳定的dna病毒，因其能诱导动物产生肿瘤而得名，主要包括猴多瘤病毒40(sv40)、人多瘤病毒jc病毒(jcv)及bk病毒(bkv)等。在自然条件下，多瘤病毒可以以隐性感染或亚临床感染的方式存在于某些实验小鼠群和都市及乡村的一些野鼠之中。多瘤病毒不仅可以感染小鼠，还会感染大鼠、仓鼠等啮齿类动物，在哺乳动物(包括人类)、鸟类甚至海洋鱼类中也发现了多瘤病毒的存在。
3、多瘤病毒为《gb 14922-2022实验动物微生物、寄生虫学等级及监测》中spf级小鼠必要时需检测项目，且要求检测结果为阴性。
4、《中国药典》生物制品通则《生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制》中对于鼠源细胞系的外源病毒因子检查，推荐采用抗体产生试验(map、rap及hap)来检测其种属特异性病毒。
5、仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒可应用于仓鼠抗体产生试验(hap)，用于评价供试品中是否含有多瘤病毒。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒，该试剂盒
2、本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
3、一种仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒，该仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒包括捕获板、阳性对照和阴性对照，所述捕获板是通过包被多瘤病毒阳性抗原和多瘤病毒阴性抗原，封闭液封闭后制备得到，所述多瘤病毒阳性抗原为sv40；所述多瘤病毒阴性抗原为vero细胞经多次冻融获得的混合蛋白。
4、本专利技术利用间接elisa方法开发的elisa试剂盒，用于检测仓鼠血清中是否含有多瘤病毒抗体。本专利技术所述试剂盒中所述间接elisa方法模型为：捕获板上预包被的抗原作为捕获试剂，样本(阳性对照、阴性对照、待测血清)作为一抗，hrp标记的羊抗仓鼠igg作为二抗。
5、本专利技术中，仓鼠多瘤病毒阳性抗原和仓鼠多瘤病毒阴性抗原预包被在高亲和力的酶标板上，酶标板孔中加入质控品、待测样本，经过孵育，样本中存在的多瘤病毒抗体与包被在酶标板上的仓鼠多瘤病毒阳性抗原结合。洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗仓鼠igg抗体。洗涤后，加入显色底物tmb，避光显色。加入终止液终止反应，在450nm波长测定吸光度值。根据δod 450nm判断样本阴/阳性。
6、采用vero细胞经多次冻融获得的混合蛋白作为多瘤病毒阴性抗原，可避免针对阴性抗原的假阳性出现。
7、作为优选，所述捕获板的制备方法是：
8、采用ph值为7.2±0.2的10mm pbs溶液将多瘤病毒阳性抗原和多瘤病毒阴性抗原稀释成浓度为2μg/ml的包被液，按照100μl/孔均匀的加入酶标板中，封口膜封口后放置于2～8℃孵育16～20小时；
9、弃去酶标板中的包被液，洗板；
10、加入封闭液，于25～37℃条件下封闭1～4小时；
11、弃去酶标板中的封闭液，将酶标板放置于25～37℃条件下干燥1～4小时；
12、干燥完成后，包被好的酶标板真空包装，即为试剂盒捕获板。
13、作为优选，该仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒还包括20×洗液、样本稀释液、hrp标记溶液、tmb底物显色液和终止液。
14、作为优选，所述阳性对照是通过sv40免疫spf级叙利亚仓鼠获得的混合抗血清；所述阴性对照是spf级叙利亚仓鼠混合血清。
15、作为优选，该仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒的组分是：包被多瘤病毒阳性抗原和多瘤病毒阴性抗原的捕获板、含多瘤病毒抗血清的阳性对照、1/50spf级叙利亚仓鼠混合血清的阴性对照、20×洗液、样本稀释液、hrp标记溶液、tmb底物显色液和终止液。终止液优选为1mol/l的盐酸溶液。
16、作为优选，20×洗液配制：取2.71gna2hpo4、5.44g kh2po4、160.13gnacl、4.03gkcl加入适量超纯水，搅拌溶解后加入10.00mltween-20、10.00mlproclin300，搅拌混匀，用超纯水定容至1.00l，过滤后即得；
17、样本稀释液配制：取2.27g na2hpo4、0.54g kh2po4、16.01gnacl、0.40g kcl、40.00g蔗糖、10.00g bsa，加入适量超纯水，搅拌溶解后加入1.00mltween-20、1.00mlproclin 300，搅拌混匀，用超纯水定容至2.00l，过滤后即得；
18、hrp标记溶液配制：取300ml样本稀释液，加入9.4μlhrp标记的羊抗仓鼠igg(jackson immunoresearch inc.，107-035-142)，配制成浓度为25ng/ml的工作溶液，过滤后即得。
19、作为优选，所述多瘤病毒阳性抗原的制备方法：
20、使用sv40感染vero细胞，直至80％vero细胞产生cpe，收获感染后的上清液，0.22μm滤膜过滤后加入核酸酶处理1～2小时，去除核酸杂质，层析，收集流穿液，得到高纯度、高活性的sv40。
21、作为优选，所述多瘤病毒阴性抗原的制备方法：vero细胞经离心、10mm pbs溶液(ph值为7.2±0.2)置换，多次冻融后获取蛋白，0.22μm滤膜过滤后得到。
22、一种所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒的多瘤病毒抗体的检测方法，该方法包括以下步骤：
23、s1、检测过程
24、将20×洗液稀释至1×洗液进行使用；
25、将待测仓鼠血清样本按照1:50稀释(如：10μl血清+490μl样本稀释液)；
26、向预包被阳性抗原和阴性抗原的捕获板中分别加入100μl质控和稀释后的样本，封板，放置于37℃条件下孵育1小时；
27、弃去溶液，用洗液洗板；
28、加入100μlhrp标记溶液，封板，放置于37℃孵育30分钟；
29、弃去溶液，用洗液洗板；
30、加入100μltmb底物显色液，避光，室温孵育15分钟；
31、加入100μl终止液终止反应，测定od450nm；
32、s2、吸光度计算及结果判定
33、计算质控和样本的δod450nm值；如果是做复孔，需计算复孔δod450nm的均值；根据δod450nm判本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒，该仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒包括捕获板、阳性对照和阴性对照，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒，其特征在于所述捕获板的制备方法是：
3.根据权利要求1所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒，其特征在于：该仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒还包括20×洗液、样本稀释液、HRP标记溶液、TMB底物显色液和终止液。
4.根据权利要求1所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒，其特征在于该仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒的组分是：
6.根据权利要求1所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒，其特征在于：
7.根据权利要求1所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒，其特征在于所述多瘤病毒阳性抗原的制备方法：
8.一种权利要求1所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体ELISA试剂盒的多瘤病毒抗体的检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒，该仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒包括捕获板、阳性对照和阴性对照，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒，其特征在于所述捕获板的制备方法是：
3.根据权利要求1所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒，其特征在于：该仓鼠多瘤病毒抗体elisa试剂盒还包括20×洗液、样本稀释液、hrp标记溶液、tmb底物显色液和终止液。
4.根据权利要求1所述的一种仓鼠多瘤病毒抗体elis...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴涛，操德群，胡孟军，苏春超，方兴建，孙晶，朱向莹，
申请(专利权)人：浙江恒驭生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。