单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒技术

本发明专利技术属于病毒分子生物学领域，特别涉及一种单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒。一种单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR检测组合物，所述检测组合物包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1至6所示的检测单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的引物和探针。型的引物和探针。型的引物和探针。

【技术实现步骤摘要】
单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于病毒分子生物学领域，特别涉及一种单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)是疱疹病毒的典型代表，由于感染急性期发生水疱性皮炎即单纯疱疹而得名。根据抗原性的差异，分为HSV
‑
1和HSV
‑
2两种血清型。两型病毒同源性高达50％。HSV
‑
1主要通过口腔分泌物的接触而感染，潜伏于三叉神经节和颈上神经节。HSV
‑
2主要通过性接触而感染，潜伏于骶神经节。HSV
‑
2的感染还会增加HIV
‑
1传播的风险，并且目前还没有针对HSV
‑
2的有效疫苗。因此及时诊断出单纯疱疹病毒，并且区分出HSV
‑
1和HSV
‑
2对指导临床治疗、评估疾病的发展和预期有重大意义。
[0003]目前较通用的单纯疱疹病毒检测方法为通过采集患者血液，检测单纯疱疹病毒IgG或IgM的酶联免疫法检测。单独的单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型PCR法检测试剂盒。酶联免疫法一般耗时3个小时以上，特异性差，容易出现假阳性。部分PCR法仅能检测一种病毒，不能精确定量，PCR后产物处理不方便。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR(qPCR)检测组合物，具有极高灵敏度和特异性。
[0005]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0006]一种单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR检测组合物，所述检测组合物包括如下检测单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的引物和探针：
[0007]上游引物HSV
‑
1(UL30)：GCTCTGTTTTACCGCGTCT，序列如SEQ ID NO：1所示，
[0008]下游引物HSV
‑
1(UL30)：CCCTCGTACTTCTTGATGG，序列如SEQ ID NO：2所示，
[0009]探针HSV
‑
1(UL30)：FAM
‑
CGGGCAGAAGTTGTCGCACAGGTAC
‑
BHQ1，序列如SEQ ID NO：3所示，
[0010]上游引物HSV
‑
2(UL40)：TCCACCGACAAACACACCA，序列如SEQ ID NO：4所示，
[0011]下游引物HSV
‑
2(UL40)：GCCCAGACCCTCACAGATC，序列如SEQ ID NO：5所示，
[0012]探针HSV
‑
2(UL40)：VIC
‑
CGACGGCCCCGGCGTACGAG
‑
BHQ1，序列如SEQ ID NO：6所示。
[0013]一种单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒包含本专利技术所述的检测组合物。
[0014]作为优选，该试剂盒还包含阳性对照品、阴性对照品及荧光定量PCR反应试剂。
[0015]作为优选，该试剂盒组成是：
[0016]荧光定量PCR反应预混液(PremixExTaq(ProbeqPCR)(2XConc.)和ROX)；
[0017]权利要求1所述的荧光定量PCR检测组合物；
[0018]HSV
‑
1和HSV
‑
2的阳性对照品，浓度均为1
×
108copies/μL；
[0019]阴性对照，为无核酶水。
[0020]一种非诊断或治疗目的单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR检测方法，该方法包括如下步骤：
[0021](1)提取待测样品的DNA模板；
[0022](2)采用权利要求1所述的检测组合物建立荧光定量PCR反应体系；
[0023](3)进行荧光定量PCR检测；
[0024](4)待测样品的结果分析。
[0025]作为优选，荧光定量PCR反应体系为20μL，包含荧光定量PCR反应预混液、本专利技术所述的荧光定量PCR检测组合物和阴性对照的混合液18μL和模板2μL；所述模板为待测样品的DNA、阳性对照标准品或阴性对照标准品。
[0026]作为优选，所述反应体系的反应条件为：95℃预变性2min，95℃变性5s，60℃退火30s，40个循环。
[0027]本专利技术用成熟的qPCR检测方法检测单纯疱疹病毒，设计具有极高灵敏度和特异性的探针引物、成本低且快速，若为阳性可区分出其为单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型，应用于临床诊断，可及时判断病情，实现疾病的早期快速精准治疗。
[0028]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0029]1、该检测方法筛选设计引物时分别选取跟其病毒复制直接相关的基因，有较强的特异性；同时该基因序列为保守序列，可检出该病毒的绝大部分亚型；
[0030]2、检测方法针对所选基因设计多对探针引物，最终筛选的探针引物特异性好，灵敏度高，可准确定量5
×
106copies/μL至5copise/μL的病毒含量；
[0031]3、该检测方法较为灵活，可单独检测HSV
‑
1或HSV
‑
2，亦可同时检出，仅需在配置体系时根据检测需求调整试剂B和试剂D的加入量即可；
[0032]4、通过反复筛选优化反应体系，最终该检测方法需要的样本量极少，每次检测最低仅需2μL核酸样本且依然能稳定检出；
附图说明
[0033]图1是用qPCR方法检测HSV
‑
1的标准曲线；
[0034]图2是用qPCR方法检测HSV
‑
1的扩增曲线；
[0035]图3是用qPCR方法检测HSV
‑
2的标准曲线；
[0036]图4是用qPCR方法检测HSV
‑
2的扩增曲线；
[0037]图5是HSV
‑
1质粒信息；
[0038]图6是HSV
‑
2质粒信息。
具体实施方式
[0039]应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0040]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根
据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0041]现结合具体实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR检测组合物，其特征在于：所述检测组合物包括如下检测单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的引物和探针：上游引物HSV
‑
1(UL30)：GCTCTGTTTTACCGCGTCT，序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物HSV
‑
1(UL30)：CCCTCGTACTTCTTGATGG，序列如SEQ ID NO：2所示，探针HSV
‑
1(UL30)：FAM
‑
CGGGCAGAAGTTGTCGCACAGGTAC
‑
BHQ1，序列如SEQ ID NO：3所示，上游引物HSV
‑
2(UL40)：TCCACCGACAAACACACCA，序列如SEQ ID NO：4所示，下游引物HSV
‑
2(UL40)：GCCCAGACCCTCACAGATC，序列如SEQ ID NO：5所示，探针HSV
‑
2(UL40)：VIC
‑
CGACGGCCCCGGCGTACGAG
‑
BHQ1，序列如SEQ ID NO：6所示。2.一种单纯疱疹病毒Ⅰ型或Ⅱ型的荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒包含权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡孟军，高志建，钟伟超，曾炜佳，卢孔鑫，吴涛，朱向莹，
申请(专利权)人：浙江恒驭生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：