一种醋酸曲普瑞林的高效制备方法技术

技术编号：40398309 阅读：6 留言：0更新日期：2024-02-20 22:25

本发明专利技术属于药物合成技术领域，具体涉及一种醋酸曲普瑞林的高效制备方法。本发明专利技术采用固相和液相结合的片段缩合方式，以固相法制备片段1～7，液相法制备片段8～10，然后以固相法将片段1～7和片段8～10缩合制得曲普瑞林10肽树脂，最后切割树脂、纯化，制得醋酸曲普瑞林。本方法能够有效避免His、Pyr的消旋，使得D‑His2‑曲普瑞林杂质显著减小，并以高达65％的总收率制得纯度在99.9％以上的醋酸曲普瑞林。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物合成，具体涉及一种醋酸曲普瑞林的高效制备方法。

技术介绍

1、瑞林类药物，是以促性腺激素释放激素(gnrh)结构为基础的一类人工合成的多肽类药物，用于治疗对性激素依赖疾病(前列腺癌、子宫内膜异位等)。国内常用的三种瑞林类药物即亮丙瑞林、戈舍瑞林和曲普瑞林，均有着巨大的应用市场。

2、曲普瑞林，一个合成十肽(含一个非天然氨基酸)，是天然促性腺释放激素的类似物，分子式c64h82n18o13，分子量1311.45，英文名：triptorelin。曲普瑞林一般以其醋酸盐的形式应用于临床，用于治疗需要把类固醇激素如雄性激素和雌性激素降低到低水平的患者，适用于前列腺癌、性早熟、生殖器内外的子宫内膜异位症、女性不孕症、子宫肌瘤等疾病。曲普瑞林结构中的肽序为pyr-his-trp-ser-tyr-d-trp-leu-arg-pro-gly-nh2，结构式如下：

3、

4、专利us4010125公开了一种曲普瑞林的合成方法，其用benzhydryl amine树脂为起始原料，以boc保护的氨基酸为单体，通过逐个缩合制备十肽曲普瑞林；专利cn200710044419.7、cn201310013712.2和cn201310014882.2，均以rink amide mbha树脂或者rink amide am树脂为起始原料，以fmoc保护的氨基酸为单体，依次逐个接上氨基酸，裂解获得曲普瑞林粗品。上述逐个缩合的方法，由于曲普瑞林序列中存在arg-pro，在常规条件下用固相缩合需要过量氨基酸，且缩合效

5、专利cn201410743707.1、cn202011087408.9均采用固液相结合片段缩合的方式，前者是先固相制备片段一：pyr-his(trt)-trp(boc)-ser(tbu)-tyr(tbu)-d-trp(boc)-leu-oh；液相制备片段二：fmoc-arg(pbf)-pro-gly-nh2；然后液相将片段一和片段二缩合，裂解、纯化制得曲普瑞林纯品，总收率38.7％；后者先固相合成片段一：boc-pyr-his(trt)-trp(boc)-ser(tbu)-tyr(tbu)-d-trp(boc)-leu-oh；液相制备片段二：arg(pbf)-pro-gly-nh2；然后液相将片段一和片段二缩合，裂解制得曲普瑞林粗品。但上述固液相结合片段缩合的方法中，his、pyr仍以固相法缩合，仍然存在上述his、pyr易消旋的问题以及d-his2-曲普瑞林杂质的生成，从而导致纯化困难、收率低。

6、专利cn202111007822.9公开了一种全液相合成曲普瑞林的方法，直接以片段fmoc-trp(boc)-ser(tbu)-osu为原料，共经过11个步骤制得曲普瑞林粗品，操作繁琐，原料更贵且总收率低。

7、基于上述现有技术中存在的问题，有必要开发一种新的曲普瑞林的制备方法，能够有效降低杂质生成，提高产品的收率、纯度，适应工业化生产。

技术实现思路

1、基于现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种醋酸曲普瑞林的高效制备方法，采用固相和液相结合的片段缩合方式，能够显著降低杂质的生成，以高收率制得目标产品。

2、为解决上述问题，本专利技术提供如下技术方案：

3、一种醋酸曲普瑞林的高效制备方法，采用固相和液相结合的片段缩合方式，采用固相法制备片段1～7，采用液相法制备片段8～10，采用固相法将片段1～7和片段8～10缩合制得曲普瑞林10肽树脂。

4、其中，片段1～7序列为曲普瑞林主链肽序从gly端开始的第1～7个氨基酸；片段8～10序列为曲普瑞林主链肽序从gly端开始的第8～10个氨基酸组成的肽链。

5、优选地，所述醋酸曲普瑞林的高效制备方法包括以下步骤：

6、(1)固相法制备片段1～7：以rink amide mbha树脂为原料，溶胀rink amide mbha树脂并脱去fmoc保护，在偶联试剂和活化剂的作用下依次偶联具有n端fmoc保护且侧链保护的氨基酸，偶联的氨基酸单体顺序为：fmoc-gly-oh、fmoc-pro-oh、fmoc-arg(pbf)-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-d-trp(boc)-oh、fmoc-tyr(tbu)-oh、fmoc-ser(tbu)-oh，合成全保护的曲普瑞林7肽树脂rink amide mbha-gly-pro-arg(pbf)-leu-d-trp(boc)-tyr(tbu)-ser(tbu)-fmoc；

7、(2)液相法制备片段8～10：先将h-pyr-oh的n端和c端进行保护制得boc-pyr-coor1，然后boc-pyr-coor1与h-his(trt)-oh反应制得boc-pyr-his(trt)-oh，对boc-pyr-his(trt)-oh的c段进行保护得到boc-pyr-his(trt)-coor2，boc-pyr-his(trt)-coor2与h-trp(boc)-oh反应制得boc-pyr-his(trt)-trp(boc)-oh；

8、(3)固相法将片段1～7和片段8～10偶联：将片段1～7脱fmoc保护，然后与步骤2中制得的boc-pyr-his(trt)-trp(boc)-oh在偶联试剂和活化剂的作用下偶联制得rinkamide mbha-gly-pro-arg(pbf)-leu-d-trp(boc)-tyr(tbu)-ser(tbu)-trp(boc)-his(trt)-pyr-boc；

9、(4)切割，将肽从树脂上切除，同时脱除侧链保护基得到曲普瑞林粗肽：pyr-his-trp-ser-tyr-d-trp-leu-arg-pro-gly-nh2；

10、(5)曲普瑞林粗肽经初步纯化、纯化换盐制得醋酸曲普瑞林纯品。

11、优选地，步骤(1)中，制备片段1～7的过程中，使用的氨基脱fmoc保护试剂为20％的哌啶的dmf溶液；偶联试剂为oxyma、hobt、hoat中的一种或其组合；活化剂为dic；步骤(1)中rink amide mbha：fmoc-gly-oh：偶联试剂：活化剂的投料摩尔比为1：2.4～3.6：2.4～3.6：3～3.6(后续偶联反应投料摩尔比与此相同，如rink amide mbha-gly-fmoc：fmoc-pro-oh：偶联试剂：活化剂＝1：2.4～3.6：2.4～3.6：3～3.6)；优选1：3：3.6：3.6。

12、优选地，步骤(2)中氨基酸n端保护为boc保护，反应条件为在碳酸钠作用下与boc酸酐反应，氨基酸：碳酸钠：boc酸酐的投料摩尔比为1：1.2～2.5：1.1～1.8；优选1：1.5：1.2。

13、优选地，步骤(本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种醋酸曲普瑞林的高效制备方法，其特征在于，采用固相和液相结合的片段缩合方式，采用固相法制备片段1～7，采用液相法制备片段8～10，采用固相法将片段1～7和片段8～10缩合制得曲普瑞林10肽树脂；其中，片段1～7序列为曲普瑞林主链肽序从Gly端开始的第1～7个氨基酸；片段8～10序列为曲普瑞林主链肽序从Gly端开始的第8～10个氨基酸组成的肽链。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(3)固相法合成过程中使用的氨基脱保护试剂为20％的哌啶的DMF溶液；偶联试剂为Oxyma、HOBT、HOAT中的一种或其组合；活化剂为DIC。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中Rink Amide MBHA：Fmoc-Gly-OH：偶联试剂：活化剂的投料摩尔比为1：2.4～3.6：2.4～3.6：3～3.6；优选1：3：3.6：3.6。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中氨基酸N端保护为Boc保护，反应条件为在碳

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中C端保护基R1和R2分别选自Su和PNP中的一种，二者可以相同或不同；R1或R2为Su时，反应条件为以DCC为活化剂，与NHS反应，氨基酸与NHS、DCC的投料摩尔比为1：1.05～1.65：1.2～2.5，优选1：1.2：1.5；当R1或R2为PNP时，反应条件为以DCC为活化剂，与PNP反应，氨基酸与PNP、DCC的投料摩尔比为1：1.05～1.65：1.2～2.5，优选1：1.2：1.5。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中片段1～7和片段8～10、偶联试剂、活化剂的投料摩尔比为1：2.4～3.6：2.4～3.6：3～3.6；优选1：3：3.6：3.6。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，肽从树脂上切除的裂解试剂为包含TFA、DTT、TIPS和H2O的混合溶液；裂解试剂中TFA、DTT、TIPS和H2O的体积比为85～92：3～7：2～6：1～4，优选90：5：3：2。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，初步纯化为C18柱高效液相色谱纯化，流动相系统为0.02M磷酸二氢铵水溶液和0.1％TFA/乙腈溶液。

10.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，纯化换盐采用C18柱色谱纯化，流动相系统为1％醋酸/水溶液和甲醇。

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【技术特征摘要】

1.一种醋酸曲普瑞林的高效制备方法，其特征在于，采用固相和液相结合的片段缩合方式，采用固相法制备片段1～7，采用液相法制备片段8～10，采用固相法将片段1～7和片段8～10缩合制得曲普瑞林10肽树脂；其中，片段1～7序列为曲普瑞林主链肽序从gly端开始的第1～7个氨基酸；片段8～10序列为曲普瑞林主链肽序从gly端开始的第8～10个氨基酸组成的肽链。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(3)固相法合成过程中使用的氨基脱保护试剂为20％的哌啶的dmf溶液；偶联试剂为oxyma、hobt、hoat中的一种或其组合；活化剂为dic。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中rink amide mbha：fmoc-gly-oh：偶联试剂：活化剂的投料摩尔比为1：2.4～3.6：2.4～3.6：3～3.6；优选1：3：3.6：3.6。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中氨基酸n端保护为boc保护，反应条件为在碳酸钠作用下与boc酸酐反应，氨基酸：碳酸钠：boc酸酐的投料摩尔比为1：1.2～2.5：1.1～1.8。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中c端保...

【专利技术属性】
技术研发人员：李阳，龙神州，
申请(专利权)人：山东新时代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人