【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及活性蛋白，更具体地，涉及一种抗虫防病的天然活性蛋白制备方法及应用。
技术介绍
1、病虫害一直是影响农作物产量的一个重要因素。每年要投入大量的人力、物力来抑制病虫害，以提高作物产量。大量施用农药造成了环境的严重污染，严重破坏了农田生物多样性，农药残留也逐渐成为威胁人类健康的一个重要因素。
2、活性蛋白是一种复杂的有机化合物。组成蛋白质的基本单位是氨基酸，氨基酸通过脱水缩合形成肽链，蛋白质是由一条或多条多肽链组成的生物大分子，每一条多肽链有二十至数百个氨基酸残基不等，各种氨基酸残基按一定的顺序排列。但现有的天然活性蛋白大都不具备抗虫处理，在对植物使用天然活性蛋白时也不具备抗虫防病效果，植物种植存活率较低。
3、因此，有必要提供具备抗虫防病功能的天然活性蛋白替代农药用于农业生产。
技术实现思路
1、针对现有技术所存在的技术问题，本专利技术提供了一种抗虫防病的天然活性蛋白制备方法及应用。该天然活性蛋白来自于大豆，该活性蛋白能有效抑制大豆植物叶片病斑，减少其病斑面积，提升其抗病性能。同时，该活性蛋白也能有效抵御虫害，可在短时间内杀死大豆蚜虫，提高抗虫性能。且该活性蛋白并不影响大豆植物的正常生长，可被制备为良好的抗虫防病生物制剂，在大豆植株的农业生产应用方面具备广大前景。
2、本专利技术的目的首先是提供了一种抗虫防病的天然活性蛋白，其特征在于，所述天然活性蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。
3、优选地，一种抗虫防病的天然
4、本专利技术的另一个目的在于提供了一种抗虫防病的天然活性核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如seq id no.2所示。
5、进一步地，本专利技术还提供了一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包括抗虫防病的天然活性核苷酸序列。
6、进一步地，本专利技术还提供了一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含所述重组质粒。
7、优选地，所述宿主细胞为大肠杆菌。
8、进一步优选地，本专利技术还提供了一种抗虫防病的产品，其特征在于，所述产品包括抗虫防病的天然活性蛋白。
9、优选地，所述产品中抗虫防病的天然活性蛋白的使用浓度为5-100μg/ml。
10、优选地，所述使用浓度为10μg/ml。
11、本专利技术的另一个目的在于提供了一种抗虫防病的天然活性蛋白制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
12、1)合成n端带有连续6个组氨酸标签的天然活性蛋白的编码序列；
13、2)将步骤1)的编码序列与pmyc2质粒连接；
14、3)将步骤2)所述质粒转化大肠杆菌dh5α感受态细胞，在含有100μg/ml卡那霉素的平板上筛选阳性克隆；
15、4)将步骤3)的阳性克隆接种于lb液体培养基中进行发酵培养，连续培养72h；
16、5)将步骤4)的发酵产物进行超声波破碎，并4℃、2000r/min条件下离心取上清；
17、6)通过his标签蛋白纯化试剂盒对步骤5)中的上清液进行洗脱纯化；
18、7)采用bradford方法测定天然活性蛋白浓度，牛血清白蛋白作为标准蛋白质。
19、本专利技术的优点如下：本专利技术首次提供了一种来自于大豆的抗虫防病的天然活性蛋白，该活性蛋白能有效抑制大豆植物叶片病斑，减少其病斑面积，提升其抗病性能。同时，该活性蛋白也能有效抵御虫害，可在短时间内杀死大豆蚜虫，提高抗虫性能。且该活性蛋白并不影响大豆植物的正常生长，可被制备为良好的抗虫防病生物制剂，在大豆植株的农业生产应用方面具备广大前景。
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1.一种抗虫防病的天然活性蛋白，其特征在于，所述天然活性蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的天然活性蛋白，其特征在于，天然活性蛋白的编码序列如SEQ IDNO.2所示。
3.一种抗虫防病的天然活性核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包括权利要求3所述的抗虫防病的天然活性核苷酸序列。
5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求4所述重组质粒。
6.如权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌。
7.一种抗虫防病的产品，其特征在于，所述产品包括权利要求1或2任一项所述的抗虫防病的天然活性蛋白。
8.如权利要求7所述的产品，其特征在于，所述产品中抗虫防病的天然活性蛋白的使用浓度为5-100μg/mL。
9.如权利要求8所述的产品，其特征在于，所述使用浓度为10μg/mL。
10.权利要求1或2任一项所述的抗虫防病的天然活性蛋白制备方法，其特征在
...【技术特征摘要】
1.一种抗虫防病的天然活性蛋白，其特征在于，所述天然活性蛋白的氨基酸序列如seqid no.1所示。
2.如权利要求1所述的天然活性蛋白，其特征在于，天然活性蛋白的编码序列如seq idno.2所示。
3.一种抗虫防病的天然活性核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如seq id no.2所示。
4.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包括权利要求3所述的抗虫防病的天然活性核苷酸序列。
5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求4所述重组质粒。...
【专利技术属性】
技术研发人员：段鹿梅，柏玉兰，骞大闯，丁刘军，石巧慧，赵进海，
申请(专利权)人：河南柏裕植物免疫科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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