【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种核酸与蛋白质的共检测试剂盒及其应用，属于生物检测。
技术介绍
1、转录组信息可以揭示特定样本的功能映射，而蛋白质组信息可以提供空间表型以及细胞领域信息。转录组与蛋白质组的结合检测可以推断出细胞类型与位置信息，探寻细胞功能可能发生的变化；可以探索新的空间生物标志物，并发现有关肿瘤问题的关键机制；同时，可以在临床上用于早期癌症筛查、诊断、反应评估和预后预测。因此，需要合适的技术用于转录组和蛋白质组信息的共检测，从而为生物学和临床的研究提供更合适的工具。
2、伴随着单细胞成像技术的的发展，单个rna分子的亚细胞原位可视化成为可能。目前单分子rna检测方法基于荧光信号的原位成像技术，例如：rnascope技术和滚环扩增(rca)技术等。于此同时，针对蛋白质的原位成像技术包括免疫荧光法和基于酪胺信号放大(tsa)反应的方法等。
3、然而，rna scope需要结合多个探针，通过多轮杂交来产生可见信号，过程复杂，需要投入大量的成本和劳动力。与此同时，免疫荧光技术检测靶标蛋白对仪器的要求较高，从而显著地提高了成本，且使用了免疫荧光法的样本无法长时间保存。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术提供了一种核酸与蛋白质的共检测试剂盒，所述核酸与蛋白质的共检测试剂盒包括双连接探针杂交试剂、双连接探针连接试剂、双连接探针环化试剂、滚环扩增试剂、至少一种检测探针杂交试剂、过氧化酶抑制试剂、至少一种抗体标记试剂、过氧化酶标记试剂、酪胺信号放大试剂和抗原修复试剂
2、在本专利技术的一种实施方式中，所述检测探针杂交试剂还包括至少一种锚定序列；所述锚定序列用于与滚环扩增产物杂交，使得检测探针组能够通过锚定序列与环状扩增产物特异性结合。
3、在本专利技术的一种实施方式中，所述酪胺信号放大试剂还包括酪胺反应终止溶液；所述酪胺反应终止溶液用于终止酪胺分子与靶标蛋白之间的共价结合。
4、在本专利技术的一种实施方式中，所述核酸与蛋白质的共检测试剂盒还包括封闭试剂；所述封闭试剂用于减少第一抗体的非特异结合位点，以提高第一抗体与靶标蛋白之间的特异性结合能力。
5、在本专利技术的一种实施方式中，所述双连接探针组和所述检测探针杂交试剂的数量与靶标核酸的数量一一对应；所述抗体标记试剂的数量与靶标蛋白的数量一一对应。
6、在本专利技术的一种实施方式中，所述第一荧光标记物偶联于检测探针组的探针的5’端。
7、在本专利技术的一种实施方式中，所述第一荧光标记物包括荧光基团；所述荧光基团包括cy5、cy3、txr和/或alexa fluor 750。
8、在本专利技术的一种实施方式中，所述第二荧光标记物包括荧光基团；所述荧光基团包括alexa fluor 546、alexa fluor 647、alexa fluor 594和/或荧光基团alexa fluor488。
9、在本专利技术的一种实施方式中，所述第一抗体为单克隆抗体。
10、在本专利技术的一种实施方式中，所述偶联有过氧化物酶第二抗体包括多聚辣根过氧化物酶偶联山羊抗兔二抗和/或多聚辣根过氧化物酶偶联鼠抗兔二抗。
11、在本专利技术的一种实施方式中，所述核酸与蛋白质的共检测试剂盒还包括封片剂；所述封片剂为含dapi(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)的抗淬灭封片剂。
12、在本专利技术的一种实施方式中，所述靶标核酸包括ttf-1基因的mrna、tp63基因的mrna、ptprc基因的mrna和/或pecam1基因的mrna。
13、在本专利技术的一种实施方式中，所述靶标蛋白包括cd45蛋白、p63蛋白、ttf1蛋白、cd31蛋白、vim蛋白和/或ck-pan蛋白。
14、在本专利技术的一种实施方式中，所述双连接探针组包括第一双连接探针组、第二双连接探针组、第三靶标核酸以及第四双连接探针组；所述第一双连接探针组以ttf-1基因的mrna为第一靶标核酸；所述第二双连接探针组以tp63基因的mrna为第二靶标核酸；所述第三双连接探针组以ptprc基因的mrna为第三靶标核酸；所述第四双连接探针组以pecam1基因的mrna为第四靶标核酸。
15、在本专利技术的一种实施方式中，所述第一双连接探针组包括核苷酸序列如seq idno.1～seq id no.14所示的探针；所述第二双连接探针组包括核苷酸序列如seq id no.15～seq id no.30所示的探针；所述第三双连接探针组包括核苷酸序列如seq id no.31～seq id no.46所示的探针；所述第四双连接探针组包括核苷酸序列如seq id no.47～seqid no.62所示的探针。
16、在本专利技术的一种实施方式中，所述检测探针杂交试剂包括第一检测探针杂交试剂、第二检测探针杂交试剂、第三检测探针杂交试剂以及第四检测探针杂交试剂；所述第一检测探针杂交试剂、第二检测探针杂交试剂、第三检测探针杂交试剂以及第四检测探针杂交试剂分别包含第一检测探针组、第二检测探针组、第三检测探针组以及第四检测探针组。
17、在本专利技术的一种实施方式中，所述第一检测探针组包括核苷酸序列如actcannag、actcannct、actcannga、actcanntc所示的探针；所述第二检测探针组包括核苷酸序列如agnnactca、ctnnactca、gannactca、tcnnactca所示的探针；所述第三检测探针组包括核苷酸序列如actcaagnn、actcactnn、actcagann、actcatcnn所示的探针；所述第四检测探针组包括核苷酸序列如nnagactca、nnctactca、nngaactca、nntcactca所示的探针(n是指简并碱基，为“a”、“c”、“g”或“t”)。
18、在本专利技术的一种实施方式中，所述第一检测探针杂交试剂和第二检测探针杂交试剂均包括第一锚定序列；所述第本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸与蛋白质的共检测试剂盒，其特征在于，所述核酸与蛋白质的共检测试剂盒包括双连接探针杂交试剂、双连接探针连接试剂、双连接探针环化试剂、滚环扩增试剂、至少一种检测探针杂交试剂、过氧化酶抑制试剂、至少一种抗体标记试剂、过氧化酶标记试剂、酪胺信号放大试剂和抗原修复试剂；所述双连接探针杂交试剂包括至少一组双连接探针组；所述双连接探针组能够与靶标核酸特异性结合，形成杂合体；所述双连接探针连接试剂用于将杂合体连接；所述双连接探针环化试剂包括夹板序列，用于将杂合体环化，形成环化产物，并引发以环化产物为模板的滚环扩增；所述滚环扩增试剂用于将环化产物滚环扩增，形成环状扩增产物；所述检测探针杂交试剂包括检测探针组；所述检测探针组能够与环状扩增产物特异性结合，并且，所述检测探针组的探针上偶联有第一荧光标记物；所述过氧化酶抑制试剂用于抑制内源性过氧化物酶的活性；所述抗体标记试剂包括第一抗体；所述第一抗体能够与靶标蛋白特异性结合；所述过氧化酶标记试剂包括偶联有过氧化物酶的第二抗体；所述第二抗体能够与第一抗体特异性结合；所述酪胺信号放大试剂包括酪胺工作溶液和酪胺反应终止溶液；所述酪胺工作溶液包括酪胺
2.如权利要求1所述的核酸与蛋白质的共检测试剂盒，其特征在于，所述检测探针杂交试剂还包括至少一种锚定序列；所述锚定序列用于与滚环扩增产物杂交，使得检测探针组能够通过锚定序列与环状扩增产物特异性结合。
3.如权利要求1或2所述的核酸与蛋白质的共检测试剂盒，其特征在于，所述酪胺信号放大试剂还包括酪胺反应终止溶液；所述酪胺反应终止溶液用于终止酪胺分子与靶标蛋白之间的共价结合。
4.如权利要求1～3任一项所述的核酸与蛋白质的共检测试剂盒，其特征在于，所述核酸与蛋白质的共检测试剂盒还包括封闭试剂；所述封闭试剂用于减少第一抗体的非特异结合位点，以提高第一抗体与靶标蛋白之间的特异性结合能力。
5.如权利要求1～4任一项所述的核酸与蛋白质的共检测试剂盒，其特征在于，所述核酸与蛋白质的共检测试剂盒还包括封片剂；所述封片剂为含DAPI的抗淬灭封片剂。
6.如权利要求1～5任一项所述的核酸与蛋白质的共检测试剂盒，其特征在于，所述靶标核酸包括TTF-1基因的mRNA、TP63基因的mRNA、PTPRC基因的mRNA和/或PECAM1基因的mRNA。
7.如权利要求1～6任一项所述的核酸与蛋白质的共检测试剂盒，其特征在于，所述靶标蛋白包括CD45蛋白、P63蛋白、TTF1蛋白、CD31蛋白、VIM蛋白和/或CK-PAN蛋白。
8.一种核酸与蛋白质的共检测方法，其特征在于，所述方法非疾病的诊断和治疗目的，所述方法使用权利要求1～7任一项所述的核酸与蛋白质的共检测试剂盒对待测样本进行检测。
9.如权利要求8所述的核酸与蛋白质的共检测方法，其特征在于，所述方法包含如下步骤：
10.权利要求1～7任一项所述的核酸与蛋白质的共检测试剂盒或权利要求8或9所述的核酸与蛋白质的共检测方法在靶标核酸和/或靶标蛋白检测中的应用，其特征在于，所述应用非疾病的诊断和治疗目的。
...【技术特征摘要】
1.一种核酸与蛋白质的共检测试剂盒，其特征在于，所述核酸与蛋白质的共检测试剂盒包括双连接探针杂交试剂、双连接探针连接试剂、双连接探针环化试剂、滚环扩增试剂、至少一种检测探针杂交试剂、过氧化酶抑制试剂、至少一种抗体标记试剂、过氧化酶标记试剂、酪胺信号放大试剂和抗原修复试剂；所述双连接探针杂交试剂包括至少一组双连接探针组；所述双连接探针组能够与靶标核酸特异性结合，形成杂合体；所述双连接探针连接试剂用于将杂合体连接；所述双连接探针环化试剂包括夹板序列，用于将杂合体环化，形成环化产物，并引发以环化产物为模板的滚环扩增；所述滚环扩增试剂用于将环化产物滚环扩增，形成环状扩增产物；所述检测探针杂交试剂包括检测探针组；所述检测探针组能够与环状扩增产物特异性结合，并且，所述检测探针组的探针上偶联有第一荧光标记物；所述过氧化酶抑制试剂用于抑制内源性过氧化物酶的活性；所述抗体标记试剂包括第一抗体；所述第一抗体能够与靶标蛋白特异性结合；所述过氧化酶标记试剂包括偶联有过氧化物酶的第二抗体；所述第二抗体能够与第一抗体特异性结合；所述酪胺信号放大试剂包括酪胺工作溶液和酪胺反应终止溶液；所述酪胺工作溶液包括酪胺分子和过氧化氢；所述酪胺分子能够在过氧化酶和过氧化氢的催化作用下通过酪胺分子和蛋白残基之间的共价结合沉淀在靶标蛋白周围，并且，所述酪胺分子上偶联有第二荧光标记物；所述抗原修复试剂用于洗脱靶标蛋白上标记的第一抗体。
2.如权利要求1所述的核酸与蛋白质的共检测试剂盒，其特征在于，所述检测探针杂交试剂还包括至少一种锚定序列；所述锚定序列用于与滚环扩增产物杂交，使得检测探针组能够通过锚定序列与环状扩增产物特异性结合。
3...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘丹，林婕，吴钰媛，王莹，岳晨思荣，方星，张丹琛，姜萌，顾志鹏，
申请(专利权)人：苏州德运康瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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