【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，具体涉及一种大肠杆菌无抗生素表达系统及其在高效表达目的基因中的应用。
技术介绍
1、大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌，因其遗传背景清晰，易于基因工程操作，繁殖迅速，生长要求低，来源广泛等优点，使其成为利用最为广泛的基因工程菌株，目前已经广泛应用于代谢工程产物以及重组蛋白的生产。ecn是大肠杆菌中唯一一种益生菌，利用ecn益生菌自身的菌体特性，在治疗各种肠胃疾病如溃疡性结肠炎、传染性腹泻等具有良好效果。ecn自身生物安全性加上大肠杆菌的优良特性，在利用ecn生产某些食品级代谢物优于一般大肠杆菌菌株，并且被广泛应用于医药研发中。
2、目前，肠杆菌表达系统中最为主要的原件是质粒载体，大部分的质粒通过抗性筛选标记维持分离稳定性。然而，抗生素的使用会造成耐药菌的出现，会对环境带来负面影响，增加生产成本。同时，质粒上的抗性基因，也会造成基因污染，造成基因突变。在ecn中转入常规抗性质粒，导致ecn的益生菌特性大幅降低，使该菌株在使用范围上极度受限，几乎不能在临床上应用。因此，基于生物安全性益生菌ecn构建无抗生素表达平...
【技术保护点】
1.一种无抗生素筛选标记筛选大肠杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌宿主菌为改造或未改造的大肠杆菌。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碳源选自山梨醇、木糖醇、艾杜醇、核糖醇、半乳糖醇、甘露醇中的一种或几种。
4.一种无抗生素筛选标记的质粒，其特征在于，所述质粒是采用山梨醇脱氢酶编码基因gutB替换了抗性基因的质粒。
5.一种无抗生素筛选标记的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌含有权利要求4所述的质粒。
6.一种大肠杆菌无抗生素表达...
【技术特征摘要】
1.一种无抗生素筛选标记筛选大肠杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌宿主菌为改造或未改造的大肠杆菌。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碳源选自山梨醇、木糖醇、艾杜醇、核糖醇、半乳糖醇、甘露醇中的一种或几种。
4.一种无抗生素筛选标记的质粒，其特征在于，所述质粒是采用山梨醇脱氢酶编码基因gutb替换了抗性基因的质粒。
5.一种无抗生素筛选标记的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌含有权利要求4所述的质粒。
6.一种大肠杆菌无抗生素表达系统，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：王文磊，孔繁智，王斗，王立，郝鑫，程明飞，
申请(专利权)人：苏州优信合生技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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