【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物及环境检测领域，具体涉及一种拮抗剂以及含有其的pcr预混液、pcr检测试剂盒和pcr检测方法。
技术介绍
1、水体（例如污水）病毒监测已经在全世界范围内成为了一种重要公共卫生辅助管理手段，例如用于新型冠状病毒感染规模的预警与预测工作。研究证实，同样可以通过水源病毒监测来开展针对诺如病毒、甲型流感病毒、猴痘病毒等其他病毒的人群尺度的感染规模预警预测工作。当前，开展多病原体协同监测，已经成为了水体监测发展的新方向及必然趋势。
2、然而，相比于临床样品，由于水体样品中含有大量包括腐殖酸、植源性多糖、植物多酚等在内的pcr抑制剂，且在核酸提取的过程中，部分抑制剂由于结构与核酸具有类似性，无法被彻底清除。这使得针对水体样品进行荧光定量pcr检测的过程中，不可避免地会受到pcr抑制剂的影响。在抑制剂存在的条件下，会导致检测的样品ct值后延，造成病毒浓度的低估，同时也会导致荧光增量降低，造成低浓度样品检出率下降，出现假阴性的问题。然而，目前市售的核酸检测试剂盒在设计的过程中尚未考虑到含pcr抑制剂样品的检测问题，导致检测水体病毒浓度的定量准确性受到影响。
3、综上，目前针对水体病毒监测，尚缺乏一种可以有效拮抗水体样品中pcr抑制剂影响的核酸检测产品。
技术实现思路
1、基于此，本申请的一个或者多个实施例提供一种能够有效缓解水体样品中pcr抑制剂影响的拮抗剂，同时提供一种包含对应拮抗剂的核酸检测试剂盒及其对应的水体病毒检测及有效性判定方法。
2、本
3、在本申请的一些具体实施方式中，所述拮抗剂满足如下（1）至（3）所示条件中的一个或者多个：
4、（1）所述反转录强化剂包括gp32蛋白、e.coli ssb蛋白和taq ssb蛋白中的一种或者多种；
5、（2）所述酶保护剂包括牛血清蛋白、牛血清白蛋白组分v和重组白蛋白中的一种或者多种；以及，
6、（3）所述金属离子螯合剂包括乙二胺四乙酸和乙二醇二乙醚二胺四乙酸中的一种或者多种。
7、本申请的一个或者多个实施例还提供一种pcr预混液，所述pcr预混液包括拮抗剂以及pcr扩增试剂，所述拮抗剂包括反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂，所述的反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂在包含所述pcr预混液的pcr反应体系中的浓度分别为5~60mg/l、10~100mg/l和0.1mmol/l~1mmol/l。
8、在本申请的一些具体实施方式中，所述拮抗剂满足如下（1）至（3）所示条件中的一个或者多个：
9、（1）所述反转录强化剂包括gp32蛋白、e.coli ssb蛋白和taq ssb蛋白中的一种或者多种；
10、（2）所述酶保护剂包括牛血清蛋白、牛血清白蛋白组分v和重组白蛋白中的一种或者多种；以及，
11、（3）所述金属离子螯合剂包括乙二胺四乙酸和乙二醇二乙醚二胺四乙酸中的一种或者多种。
12、在本申请的一些具体实施方式中，所述pcr扩增试剂包括酶和pcr反应液。
13、本申请的一个或者多个实施例又提供一种pcr检测试剂盒，所述pcr检测试剂盒包括：
14、1）所述的拮抗剂，以及，上述定义的pcr扩增试剂；或者，
15、2）所述的pcr预混液。
16、在本申请的一些具体实施方式中，所述pcr检测试剂盒还包括检测目标核酸的引物对和探针、阴性对照标准品、阳性对照标准品、核酸稀释液以及核酸提取试剂中的一种或者多种。
17、在本申请的一些具体实施方式中，所述pcr检测试剂盒还包括辅助质控核酸片段以及检测所述辅助质控核酸片段的引物对和探针，所述辅助质控核酸片段不属于待测样本污染物所含的核酸。
18、本申请的一个或者多个实施例还提供一种目标核酸的pcr检测方法，所述pcr检测方法包括：
19、对待测样本的核酸进行pcr扩增，根据所得扩增结果确定所述待测样本的核酸中含有目标核酸的情况；
20、pcr扩增的pcr反应体系添加有所述的拮抗剂，或者使用所述的pcr预混液；
21、或者pcr扩增采用所述的pcr检测试剂盒。
22、在本申请的一些具体实施方式中，所述pcr检测方法还包括：在所述阳性对照标准品和所述待测样本的pcr反应体系中添加所述辅助质控核酸片段，并采用检测所述辅助质控核酸片段的引物对和探针进行pcr扩增，根据所得扩增结果辅助判断所述待测样本的核酸中含有目标核酸的情况。
23、在本申请的一些具体实施方式中，所述pcr检测方法对扩增结果的判读标准如下：
24、a）所述阴性对照标准品对应有扩增，则需重新检测；
25、b）所述阴性对照标准品对应无扩增，所述辅助质控核酸片段对应有扩增，所述目标核酸对应无扩增，则需重新检测；
26、c）所述阴性对照标准品对应无扩增，所述辅助质控核酸片段对应无扩增，所述目标核酸对应有扩增且ct≤38，则所述待测样本判定为阳性，结合标准曲线定量；
27、d）所述阴性对照标准品对应无扩增，所述辅助质控核酸片段对应无扩增，所述目标核酸对应有扩增但ct>38，扩增曲线为s型且在对数坐标下存在大于两个数量级的线性增长期，则所述待测样本判定为疑似阳性，需再次复核检验，若复核检验的结果仍为疑似阳性或阳性则判定为阳性并结合标准曲线定量，若复核检验的结果为阴性则判定为阴性；
28、e）所述阴性对照标准品对应无扩增，所述辅助质控核酸片段对应无扩增，所述目标核酸对应无扩增，则所述待测样本判定为阴性；
29、f）所述阴性对照标准品对应无扩增，所述辅助质控核酸片段对应有扩增，所述目标核酸对应有扩增，则需重新检测，直至所述辅助质控核酸片段不再出现扩增后再参照c）项、d）项、e）项判读标准进行判读。
30、在本申请的一些具体实施方式中，所述待测样本包括水样。
31、与传统技术相比，本申请实施例的有益效果包括：
32、本申请提供合适配方的拮抗剂，在对水体中核酸样品检测的过程中，通过在pcr反应体系中引入该抗剂，能够有效缓解提取自水体的核酸样品中各类抑制剂对于实时荧光定量pcr反应的影响，避免抑制条件下定量值偏低的问题，能够提升检测的精密度及灵敏性。
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1.一种拮抗剂，其特征在于，所述拮抗剂包括含量比例为（5~60mg）：（10~100mg）：（0.1~1mmol）的反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂。
2.根据权利要求1所述的拮抗剂，其特征在于，所述拮抗剂满足如下（1）至（3）所示条件中的一个或者多个：
3.一种PCR预混液，其特征在于，所述PCR预混液包括拮抗剂以及PCR扩增试剂，所述拮抗剂包括反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂，所述的反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂在包含所述PCR预混液的PCR反应体系中的浓度分别为5~60mg/L、10~100mg/L和0.1mmol/L~1mmol/L。
4.根据权利要求3所述的PCR预混液，其特征在于，所述拮抗剂满足如下（1）至（3）所示条件中的一个或者多个：
5.根据权利要求3至4中任一项所述的PCR预混液，其特征在于，所述PCR扩增试剂包括酶和PCR反应液。
6.一种PCR检测试剂盒，其特征在于，所述PCR检测试剂盒包括：
7.根据权利要求6所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述PCR检
8.根据权利要求6至7中任一项所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述PCR检测试剂盒还包括辅助质控核酸片段以及检测所述辅助质控核酸片段的引物对和探针，所述辅助质控核酸片段不属于待测样本污染物所含的核酸。
9.一种目标核酸的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR检测方法包括：
10.根据权利要求9所述的目标核酸的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR检测方法还包括：在所述阳性对照标准品和所述待测样本的PCR反应体系中添加所述辅助质控核酸片段，并采用检测所述辅助质控核酸片段的引物对和探针进行PCR扩增，根据所得扩增结果辅助判断所述待测样本的核酸中含有目标核酸的情况。
11.根据权利要求10所述的目标核酸的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR检测方法对扩增结果的判读标准如下：
12.根据权利要求9至11中任一项所述的目标核酸的PCR检测方法，其特征在于，所述待测样本包括水样。
...【技术特征摘要】
1.一种拮抗剂，其特征在于，所述拮抗剂包括含量比例为（5~60mg）：（10~100mg）：（0.1~1mmol）的反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂。
2.根据权利要求1所述的拮抗剂，其特征在于，所述拮抗剂满足如下（1）至（3）所示条件中的一个或者多个：
3.一种pcr预混液，其特征在于，所述pcr预混液包括拮抗剂以及pcr扩增试剂，所述拮抗剂包括反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂，所述的反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂在包含所述pcr预混液的pcr反应体系中的浓度分别为5~60mg/l、10~100mg/l和0.1mmol/l~1mmol/l。
4.根据权利要求3所述的pcr预混液，其特征在于，所述拮抗剂满足如下（1）至（3）所示条件中的一个或者多个：
5.根据权利要求3至4中任一项所述的pcr预混液，其特征在于，所述pcr扩增试剂包括酶和pcr反应液。
6.一种pcr检测试剂盒，其特征在于，所述pcr检测试剂盒包括：
7.根据权利要求6所述的pcr检测试剂盒，其特征在于...
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