【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及干细胞和再生医学领域，特别涉及一种利用聚乙烯醇由人多能干细胞分化获得定型内胚层细胞的方法。
技术介绍
1、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,bsa)是牛血清中的一种球蛋白，常用于细胞培养、组织培养，一方面可提供对细胞生长重要的氮、必需氨基酸，有助于维持细胞培养环境中的渗透压平衡；另一方面可作为细胞附着的底物，帮助稳定ph值，保护细胞免受压力和损伤，并依据细胞类型和培养应用bsa添加的浓度不一。在动物细胞无血清培养中，添加bsa可起到生理和机械保护作用和载体作用，因此bsa在干细胞培养应用广泛。现有的人多能干细胞的定型内胚层分化，尤其是内胚层来源的胰腺β细胞特化方案中通常需要添加大量的bsa。但是bsa制备一般采用冷乙醇方法、热休克法和色谱层析法来分离纯化牛血清中的白蛋白或者哺乳动物细胞生产的重组蛋白，制备工艺复杂，成本高、价格昂贵，需要低温存储，存在成分复杂性和不同批次之间的差异，对于干细胞后续应用还存在潜在的免疫原性风险。
2、因此，寻找在干细胞分化中可取代bsa的培养基添加剂是长期以来有待解决的重要问题。如何开发一种能替代bsa以及降低实验成本、且能够提高由人多能干细胞分化获得定型内胚层细胞的效率的培养基，成为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供一种利用聚乙烯醇由人多能干细胞分化获得定型内胚层细胞的培养基和方法，使用化学合成的聚乙烯醇取代价格昂贵的牛血清白蛋白在体外干细胞分化中的添加，不仅不影响细胞的生长，
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、在本专利技术的第一方面，提供了一种聚乙烯醇取代牛血清白蛋白在制备用于诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的培养基中的应用，所述应用包括：加入聚乙烯醇取代牛血清白蛋白提高人多能干细胞向定型内胚层分化的效率。
4、在本专利技术的第二方面，提供了一种用于诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的培养基，所述培养基的组分包括：在基础培养基上添加聚乙烯醇、activin a、chir-99021、细胞培养添加剂b27和青链霉素混合液。
5、进一步地，所述activin a的浓度为80～120ng/ml，chir-99021的浓度为2～3μm，b27的浓度为1～2％，青链霉素混合液为1～2％，所述浓度均为使用终浓度。
6、进一步地，所述的基础培养基包括imdm/f12、dmem、dmem/f12中的一种。
7、进一步地，所述人多能干细胞包括人胚胎干细胞和人诱导多能干细胞中的一种。
8、在本专利技术的第三方面，提供了一种诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的方法，所述方法包括：
9、采用所述的培养基对人多能干细胞进行培养，使其定向分化成定型内胚层细胞。
10、本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
11、本专利技术通过在定型内胚层分化培养基中，使用聚乙烯醇取代牛血清白蛋白的添加，可将人多能干细胞成功分化成内胚层细胞，对细胞生长和分化效率都有积极的效果。本专利技术提供的方法操作简单，能显著降低成本，使培养基化学成分更明确，避免牛血清白蛋白导致再生医学应用的免疫原性，具有良好的应用前景。
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1.一种聚乙烯醇取代牛血清白蛋白在制备用于诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的培养基中的应用，其特征在于，所述应用包括：加入聚乙烯醇取代牛血清白蛋白且提高人多能干细胞向定型内胚层分化的效率。
2.一种用于诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的培养基，其特征在于，所述培养基的组分包括：在基础培养基上添加聚乙烯醇、Activin A、CHIR-99021、细胞培养添加剂B27和青链霉素混合液。
3.根据权利要求2所述的一种用于诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的培养基，其特征在于，所述Activin A的浓度为80～120ng/mL，CHIR-99021的浓度为2～3μM，B27的浓度为1～2％，青链霉素混合液为1～2％，所述浓度均为使用终浓度。
4.根据权利要求2所述的一种用于诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的培养基，其特征在于，所述的基础培养基包括IMDM/F12、DMEM、DMEM/F12中的一种。
5.根据权利要求2所述的一种用于诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的培养基，其特征在于，所述人多能干细胞包括人胚胎干细胞和人诱导多能干细胞中的
6.一种诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的方法，其特征在于，所述方法包括：
...【技术特征摘要】
1.一种聚乙烯醇取代牛血清白蛋白在制备用于诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的培养基中的应用，其特征在于，所述应用包括：加入聚乙烯醇取代牛血清白蛋白且提高人多能干细胞向定型内胚层分化的效率。
2.一种用于诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的培养基，其特征在于，所述培养基的组分包括：在基础培养基上添加聚乙烯醇、activin a、chir-99021、细胞培养添加剂b27和青链霉素混合液。
3.根据权利要求2所述的一种用于诱导人多能干细胞向定型内胚层分化的培养基，其特征在于，所述activin a的浓度为80～120ng...
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