【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及类固醇激素检测领域，尤其是涉及一种在线分析系统及血清中20种类固醇激素的检测方法。
技术介绍
1、类固醇激素是临床实验室重要的内分泌项目，是胆固醇经一系列酶催化产生的脂溶性小分子，具有维持新陈代谢、调节性功能等重要作用，定量检测类固醇激素对许多内分泌疾病的诊断和治疗有重要意义。但由于类固醇激素涉及分子种类多、结构类似、体内含量低，定量检测分析存在一定的难度。
2、目前，检测类固醇激素的方法主要包括气相色谱-质谱法(gc-ms)和液相色谱-串联质谱法(lc-ms/ms)。gc-ms法特异性好，可同时检测多种类固醇激素，但样品的提取、纯化和衍生步骤比较繁琐，使其在临床广泛开展难度很大。
3、相比于gc-ms法，lc-ms/ms主要采用电喷雾离子源-三重四极杆分析器质谱，在类固醇激素检测中具有实验结果的特异性高，检测灵敏度不低于甚至优于其他检测方法。但由于血清中类固醇激素普遍浓度水平较低，基质复杂，存在基质效应问题；用lc-ms/ms法测定血清中类固醇激素的含量，需要经过复杂的前处理过程包括以下一种或几种的结合：蛋白沉淀、液液萃取、柱层析、衍生化、离线spe、氮吹复溶等过程，仅仅前处理耗时在2h左右，分析效率极低。
4、因此，亟待开发一种能够更为准确且效率更高的用于检测血清中浓度水平较低的类固醇激素的在线分析系统。
5、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供一种在线spe-lc-ms/ms
2、本专利技术的目的之二在于提供一种采用所述在线spe-lc-ms/ms分析系统检测血清中类固醇激素的方法，该检测方法无需复杂的人工处理样本，仪器自动化程度高，大幅度降低人力物力成本，分析效率更高；并具有很好的专属性、线性、准确度、精密度、灵敏度，整个检测过程可控制在10min以内，为血清中多种类固醇激素的检测技术的应用提供了可能性。
3、为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
4、第一方面，本专利技术提供一种在线spe-lc-ms/ms分析系统，所述在线spe-lc-ms/ms分析系统包括：进样模块、固相萃取模块和液质联用模块；
5、其中，所述进样模块包括输液模块和稀释模块，所述进样模块通过两位六通阀以及连接管路与固相萃取模块中的各固相萃取装置分别连接；
6、其中，所述固相萃取模块包括至少2个以上的固相萃取装置，且各固相萃取装置通过两位六通阀以及连接管路并联连接；
7、其中，所述固相萃取模块和液质联用模块通过两位六通阀以及连接管路连接。
8、在本专利技术中，在线spe-lc-ms/ms分析系统由在线spe和lc-ms/ms组成；通过该系统可对血清中的类固醇激素进行富集，自动净化，上样分析，数据处理；该方法具有很好的专属性、线性、准确度、精密度、灵敏度，整个检测过程在10min以内。且该在线spe-lc-ms/ms分析系统，可以将类固醇激素的提取液上样至经过活化的在线固相萃取仪，实现在线的富集、纯化、净化功能，避免了离心、氮吹、复溶等人工操作。
9、在本专利技术中，在进样模块部分所述设置的稀释模块应用在线稀释功能，对上样样品进行实时稀释，可在样品转移过程中，对样品进行稀释后在上样至spe小柱上，很大程度上解决了溶剂效应问题。
10、作为本专利技术一优选方案，所述固相萃取模块包括第一固相萃取装置和第二固相萃取装置。
11、优选地，所述进样模块和固相萃取模块间设置第一两位六通阀，所述第一固相萃取装置和第二固相萃取装置间设置第二两位六通阀，所述固相萃取模块和液质联用模块间设置第三两位六通阀。
12、优选地，所述第一两位六通阀的接口1位通过中空连接管路与第三两位六通阀的接口2位连接；第一两位六通阀的接口2位通过中空连接管路与第一固相萃取装置进口的连接；第一两位六通阀的接口3位通过中空连接管路与第一两位六通阀的接口5位连接；第一两位六通阀的接口4位通过中空连接管路与所述进样模块的出口连接；第一两位六通阀的接口6位通过中空连接管路与第二固相萃取装置进口的连接。
13、优选地，所述输液模块包括输液泵。
14、优选地，所述稀释模块包括稀释泵。
15、优选地，所述第一两位六通阀与进样模块间还设置具有三通结构的混合装置。
16、优选地，所述三通结构的混合装置的三个连接位，分别通过中空连接管路与输液泵的出口、稀释泵的出口以及第一两位六通阀的接口4位连接。
17、优选地，所述进样模块的进样量为0.1ml以上，例如可以是0.1ml、0.2ml、0.5ml、0.6ml、0.8ml、1ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml、1.8ml、2ml、2.5ml、3ml、3.5ml、4ml等，优选为1～3ml，进一步优选为2ml。
18、本专利技术通过在线spe-lc-ms/ms分析系统中的大体积进样模块，可通过增大进样量来提高灵敏度。普通的进样系统，仅仅可进样2～10μl样品，需要对样品浓缩后再上样；而大体积进样器，通过增加上样体积至2ml以上，而无需对样品进行氮吹、复溶、固相萃取等复杂费时的前处理过程。
19、优选地，所述第二两位六通阀的接口1位通过中空连接管路与第三两位六通阀的3位连接；第二两位六通阀的接口2位通过中空连接管路与第一固相萃取装置出口的连接；第二两位六通阀的接口3位通过中空连接管路与第二两位六通阀的接口5位连接；第二两位六通阀的接口4位通过中空连接管路排出废液；第二两位六通阀的接口6位通过中空连接管路与第二固相萃取装置出口的连接。
20、优选地，所述第三两位六通阀的接口1位通过中空连接管路与液质联用模块的进口连接。
21、优选地，所述在线spe-lc-ms/ms分析系统还包括高压混合系统。
22、优选地，所述高压混合系统包括超高压二元泵。
23、优选地，所述超高压二元泵通过连接管路与第三两位六通阀的接口4位连接。
24、优选地，所述两位六通阀包括第一阀位和第二阀位，所述两位六通阀在两个阀位形成的流路之间动态完成切换；
25、其中，所述第一阀位为1-6位，所述1-6位具体为：接口1位和接口6位联通，接口2位和接口3位联通，接口4位和接口5位联通；
26、其中，所述第二阀位为1-2位，所述1-2位具体为：接口1位和接口2位联通，接口3位和接口4位联通，接口5位和接口6位联通；
27、其中，所述两位六通阀的1位、2位、3位、4位、5位、6位仅表示邻接关系，不必与两位六通阀的物理标记对应，其号位命名和排序为从两位六通阀的任意接口开始按照逆时针或顺时针从1开始排序命名。
28、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种在线SPE-LC-MS/MS分析系统，其特征在于，所述在线SPE-LC-MS/MS分析系统包括：进样模块、固相萃取模块和液质联用模块；
2.根据权利要求1所述的在线SPE-LC-MS/MS分析系统，其特征在于，所述固相萃取模块包括第一固相萃取装置和第二固相萃取装置；
3.根据权利要求2所述的在线SPE-LC-MS/MS分析系统，其特征在于，所述第一两位六通阀的接口1位通过中空连接管路与第三两位六通阀的接口2位连接；第一两位六通阀的接口2位通过中空连接管路与第一固相萃取装置进口的连接；第一两位六通阀的接口3位通过中空连接管路与第一两位六通阀的接口5位连接；第一两位六通阀的接口4位通过中空连接管路与所述进样模块的出口连接；第一两位六通阀的接口6位通过中空连接管路与第二固相萃取装置进口的连接；
4.根据权利要求2或3所述的在线SPE-LC-MS/MS分析系统，其特征在于，所述第二两位六通阀的接口1位通过中空连接管路与第三两位六通阀的3位连接；第二两位六通阀的接口2位通过中空连接管路与第一固相萃取装置出口的连接；第二两位六通阀的接口3位通过中空
5.根据权利要求1～4中任一项所述的在线SPE-LC-MS/MS分析系统，其特征在于，所述两位六通阀包括第一阀位和第二阀位，所述两位六通阀在两个阀位形成的流路之间动态完成切换；
6.一种根据权利要求1～5中任一项所述的在线SPE-LC-MS/MS分析系统在检测样品中类固醇激素中的应用。
7.一种检测血清中类固醇激素的方法，其特征在于，所述方法采用权利要求1～5中任一项所述的在线SPE-LC-MS/MS分析系统进行检测，具体包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述检测血清中类固醇激素的方法，其特征在于，所述类固醇激素包括地塞米松、皮质醇、可的松、11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇、皮质酮、睾酮、雄烯二酮、17α-羟孕酮、11-脱氧皮质酮、双氢睾酮、孕烯醇酮、脱氢表雄酮、孕酮、醛固酮、雌三醇、雌酮、雌二醇、17-羟基孕烯醇酮或硫酸脱氢表雄酮中的任意一种或至少两种的组合。
9.根据权利要求7所述检测血清中类固醇激素的方法，其特征在于，所述类固醇激素的样品提取液为通过对血清样品进行蛋白沉淀提取得到；
10.根据权利要求7所述检测血清中类固醇激素的方法，其特征在于，通过超高压二元泵将SPE柱上吸附的分析物反冲洗到液相色谱柱上；
...【技术特征摘要】
1.一种在线spe-lc-ms/ms分析系统，其特征在于，所述在线spe-lc-ms/ms分析系统包括：进样模块、固相萃取模块和液质联用模块；
2.根据权利要求1所述的在线spe-lc-ms/ms分析系统，其特征在于，所述固相萃取模块包括第一固相萃取装置和第二固相萃取装置；
3.根据权利要求2所述的在线spe-lc-ms/ms分析系统，其特征在于，所述第一两位六通阀的接口1位通过中空连接管路与第三两位六通阀的接口2位连接；第一两位六通阀的接口2位通过中空连接管路与第一固相萃取装置进口的连接；第一两位六通阀的接口3位通过中空连接管路与第一两位六通阀的接口5位连接；第一两位六通阀的接口4位通过中空连接管路与所述进样模块的出口连接；第一两位六通阀的接口6位通过中空连接管路与第二固相萃取装置进口的连接；
4.根据权利要求2或3所述的在线spe-lc-ms/ms分析系统，其特征在于，所述第二两位六通阀的接口1位通过中空连接管路与第三两位六通阀的3位连接；第二两位六通阀的接口2位通过中空连接管路与第一固相萃取装置出口的连接；第二两位六通阀的接口3位通过中空连接管路与第二两位六通阀的接口5位连接；第二两位六通阀的接口4位通过中空连接管路排出废液；第二两位六通阀的接口6位通过中空连接管路与第二...
【专利技术属性】
技术研发人员：裴海燕，俞晓峰，杨继伟，周衍霄，陈钰灵，
申请(专利权)人：杭州谱聚医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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