一种血清中胆汁酸的检测方法技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体涉及一种血清中胆汁酸的检测方法。本发明专利技术采用的检测方法可以实现多种胆汁酸及其同分异构体高效的色谱分离，分离效果好，同时采用同位素内标法，定量分析结果准确。本发明专利技术采用的检测方法可以避免不同采血管中凝血剂种类不同对胆汁酸测定结果的影响。本发明专利技术采用平行液相色谱仪串联质谱仪技术，充分利用样品洗脱和清洗平衡时间，有效缩短检测时间，提高样品分析通量及检测效率。检测效率。检测效率。

【技术实现步骤摘要】
一种血清中胆汁酸的检测方法


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种血清中胆汁酸的检测方法。

技术介绍

[0002]胆汁酸是在肝脏中由胆固醇合成的一类两性甾醇类化合物，是胆汁的重要成分，在调节机体脂肪代谢上发挥重要作用。健康人体中，胆汁酸谱组分相对恒定，发生胆石症、动脉粥样硬化、高血压等多种疾病时，会引起人体胆汁酸代谢异常，导致胆汁酸含量发生改变，建立稳定可靠的胆汁酸检验方法，可以了解机体胆汁酸的代谢，有助于为疾病的诊断和治疗提供可靠的依据。目前临床上主要以血清总胆汁酸浓度作为急慢性肝炎、肝硬化以及妊娠期肝内胆汁淤积症等肝脏疾病的诊断指标，在国内医疗机构中将胆汁酸分型检测技术作为常规检测项目的开展尚不成熟。总胆汁酸浓度检测虽然简便快捷，但检测结果对疾病的诊断及治疗的指导作用有限，对于某些疾病进程的诊断，个别胆汁酸浓度的变化往往具有更高的诊断灵敏度。因此，检测每一种胆汁酸的体内水平而非简单地定量总胆汁酸含量，对于肝胆和肠道疾病的筛查、诊断和鉴别诊断具有重要价值。
[0003]由于胆汁酸种类繁多，不同种类之间理化性质差别较大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血清中胆汁酸的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(S.1)胆汁酸标准曲线储备液、系列混合标准曲线工作液及校准品溶液的制备；(S.2)胆汁酸质控储备液、混合质控工作液及质控样品工作液的制备；(S.3)内标储备液及内标工作液的制备；(S.4)血清样本的前处理；(S.5)样本检测利用液相色谱串联质谱仪对步骤(S.1)中的待测目标胆汁酸的校准品溶液进行检测，采用内标法拟合得到目标胆汁酸的标准曲线；利用液相色谱串联质谱仪对步骤(S.2)中的质控样品工作液进行检测，利用目标胆汁酸的标准曲线计算得到质控样品浓度和回收率，从而验证目标胆汁酸的标准曲线的准确性；取步骤(S.4)中经过前处理后的待测样品进行液相色谱串联质谱检测，将所得待测样品的检测曲线与目标胆汁酸的标准曲线进行比对，从而判断待测样品中胆汁酸的种类并计算出相对应的含量。2.根据权利要求1所述的一种血清中胆汁酸的检测方法，其特征在于，所述步骤(S.5)中液相采用梯度洗脱和清洗平衡，所述梯度洗脱程序如下：以0～13min，流动相A从50～70％线性变化至10～20％，流动相B从30～50％线性变化至80～90％，13～17min，流动相A从10～20％线性变化至50～70％，流动相B从80～90％线性变化至30～50％进行梯度洗脱；所述清洗平衡程序如下：0～17min，以50～70％的流动相A，30～50％的流动相B进行清洗平衡。3.根据权利要求2所述的一种血清中胆汁酸的检测方法，其特征在于，所述液相中的流动相A为质量浓度5～15％的甲酸水溶液；液相中的流动相B为含有乙腈和甲醇的混合溶剂，所述混合溶剂中乙腈和甲醇的体积比为1:1～5:1。4.根据权利要求1所述的一种血清中胆汁酸的检测方法，其特征在于，所述步骤(S.5)中液相色谱采样采用至少两台液相进行双样品交替分析，任一平行液相分析的同时另一平行液相清洗平衡，从而实现连续数据采集。5.根据权利要求1所述的一种血清中胆汁酸的检测方法，其特征在于，所述步骤(S.5)中液相色谱条件为：采用胆汁酸C18色谱柱(3.0mm
×
50mm
×
5μm)，流动相流速为0.3～0.5mL/min，柱温为35～50℃。6.根据权利要求1所述的一种血清中胆汁酸的检测方法，其特征在于，所述步骤(S.5)中质谱条件为：在电喷雾离子源负离子模式下，采用多反应监测扫描模式进行扫描...

【专利技术属性】
技术研发人员：周衍霄，裴海燕，鄢茜，杨继伟，俞晓峰，
申请(专利权)人：杭州谱聚医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：