【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及酪氨酸激酶抑制剂的检测，尤其是涉及一种酪氨酸激酶抑制剂的检测方法及其应用。
技术介绍
1、酪氨酸激酶抑制剂是典型的靶向肿瘤治疗药物，推出新药速度快，往往临床欠缺定量方法，需要针对性进行方法建立，且针对性的每种药物需要对应的标准品参考做定量，工作繁复，无法及时满足新药在临床上血药浓度监测及代谢，动力学数据建设的需求。目前，缺乏将多种不同时期开发的酪氨酸激酶抑制剂同时进行分析的统一方法，临床用药对比同类但不同时期的酪氨酸激酶抑制剂药物迫切需要这样的方法，而非现有的单独药物分开定量分析。
2、临床工作者和研究者关注用药有效性及安全性，众所周知，个体差异引起用药的疗效差异，关注药物的有效治疗浓度窗口很有必要，需要一种同时能够检测目标药物的方法，用以有效评估体内临床数据指标方便指导用药，帮助突破现阶段缺乏足够依据时临床医生多采用观察手段来判断药效的状态。
3、cn104865321a公开了一种伊马替尼有关物质的高灵敏度分析检测方法，该方法使用高效液相色谱分析法对伊马替尼原料药或包含伊马替尼的药物制剂进行质量分析，所述高效液相色谱分析法使用的色谱柱是十八烷基键和硅胶色谱柱，所述高效液相色谱分析法使用梯度洗脱进行分离，所述梯度洗脱使用乙腈和磷酸盐溶液两种流动相。该检测方法仅适用于伊马替尼的检测，而无法对多种不同时期开发的酪氨酸激酶抑制剂同时进行分析。且该方法无法直接转用于检测酪氨酸激酶抑制剂的新药，无法确定内标物、标准品的物质进而难以开展对新药的定量分析。
4、cn115144511a公开了一
5、基于此，不难发现上述专利主要是采用逐一购买或制备药物的标准品，再通过原料药物进行液相色谱或者液相色谱串联质谱方法建立，这种方法对于无法确定标准品的新药来说难以开展相关的定量分析。此外，现有方法多为分开测试常见的几种酪氨酸激酶抑制剂，缺乏覆盖多种不同时期上市药物的方法，缺乏临床药物浓度的可比性。
6、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供一种酪氨酸激酶抑制剂的检测方法。所述检测方法配合同位素内标测定，可以快速的定量类似结构，同时检测15种不同时期上市药物，通过简单的前处理方法能够在10分钟内完成以上药物的定量分析。
2、本专利技术的目的之二在于提供一种所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法在检测酪氨酸激酶抑制剂的新药中的应用。本专利技术所述检测方法采用靶向药物的代表性酪氨酸激酶抑制剂同位素标准品建立一种液相色谱串联质谱方法和校准曲线，根据化合物结构及质谱库信息检索，可应用于对体液中新药进行定量分析。
3、本专利技术的目的之三在于提供一种酪氨酸激酶抑制剂的新药的定量检测方法。本专利技术所述检测方法不仅能够同时检测上述15种不同时期上市的酪氨酸激酶抑制剂，而且还能进一步覆盖更多与对应前代药结构类似的酪氨酸激酶抑制剂的新药。
4、为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
5、第一方面，本专利技术提供一种酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
6、将同位素内标物溶解于甲醇和乙腈的混合溶液中，得到内标工作液；
7、将待测酪氨酸激酶抑制剂溶解于甲醇后，得到待测样本液，再与内标工作液混合后进行稀释，得到含同位素内标物的待测样品液；
8、采用液相色谱串联质谱方法对酪氨酸激酶抑制剂进行定量分析；
9、其中，所述酪氨酸激酶抑制剂包括阿来替尼、阿帕替尼、奥希替尼、达沙替尼、埃罗替尼、吉非替尼、克唑替尼、拉帕替尼、伊马替尼、鲁索替尼、帕纳替尼、尼罗替尼、帕唑帕尼、索拉非尼或依鲁替尼中的任一种或至少两种的组合；所述同位素内标物包括伊马替尼-d8和/或达沙替尼-d8。
10、优选地，所述内标工作液的浓度为10～100ng/ml，例如可以是10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、60ng/ml、70ng/ml、80ng/ml、90ng/ml、100ng/ml等。
11、优选地，在所述甲醇和乙腈的混合溶液中，甲醇和乙腈的体积比为1:(0.8～1.2)，例如可以是1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2等。
12、优选地，所述待测样本液的浓度1～3000ng/ml，例如可以是1ng/ml、4ng/ml、8ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、150ng/ml、300ng/ml、500ng/ml、750ng/ml、1000ng/ml、1500ng/ml、2250ng/ml、3000ng/ml等。
13、优选地，所述待测样本液和内标工作液的体积比为1:(3～5)，例如可以是1:3、1:3.5、1:4、1:4.5、1:5等。
14、优选地，所述含同位素内标物的待测样品液具体由以下步骤制备得到：
15、向待测样本液中加入内标工作液并进行第一次涡旋处理，再进行离心处理，收集上清液；
16、采用稀释剂对所述上清液进行稀释处理后，进行第二次涡旋处理，得到含同位素内标物的待测样品液。
17、优选地，所述第一次涡旋处理的转速为2000～3000r/min，例如可以是2000r/min、2200r/min、2400r/min、2600r/min、2800r/min、3000r/min等，第一次涡旋处理的时间为1～10min，例如可以是1min、2min、4min、6min、8min、10min等。
18、优选地，所述离心处理的转速为3000～5000r/min，例如可以是3000r/min、3200r/min、3400r/min、3600r/min、3800r/min、4000r/min、4200r/min、4400r/min、4600r/min、4800r/min、5000r/min等，离心处理的时间为5～20min，例如可以是5min、6min、8min、10min、12min、14min、16min、18min、20min等。
19、优选地，所述稀释剂为水。
20、优选地，所述稀释处理中，所述上清液和稀释剂的体积比为1:(2～4)，例如可以是1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4等。
21、优选地，所述第二次涡旋处理的转速为2000～3000r/本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，所述内标工作液的浓度为10～100ng/mL；
3.根据权利要求1所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，所述待测样本液的浓度1～3000ng/mL；
4.根据权利要求1所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，所述含同位素内标物的待测样品液具体由以下步骤制备得到：
5.根据权利要求1所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，在液相色谱的检测中，采用的色谱柱为Polar C18色谱柱，其规格为3.0×100mm，3μm；
6.根据权利要求1所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，在液相色谱的检测中进行梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序如下所示：
7.根据权利要求1所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，在串联质谱的检测中，质谱条件的参数设定如下所示：
8.一种权利要求1～7中任一项所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法在检测酪氨酸激酶抑制剂的新药
9.一种酪氨酸激酶抑制剂的新药的定量检测方法，其特征在于，所述定量检测方法具体包括以下步骤：
10.根据权利要9所述的酪氨酸激酶抑制剂的新药的定量检测方法，其特征在于，所述化学结构类似的酪氨酸激酶抑制剂的新药需满足以下标准：
...【技术特征摘要】
1.一种酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，所述内标工作液的浓度为10～100ng/ml；
3.根据权利要求1所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，所述待测样本液的浓度1～3000ng/ml；
4.根据权利要求1所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，所述含同位素内标物的待测样品液具体由以下步骤制备得到：
5.根据权利要求1所述的酪氨酸激酶抑制剂的检测方法，其特征在于，在液相色谱的检测中，采用的色谱柱为polar c18色谱柱，其规格为3.0×100mm，3μm；<...
【专利技术属性】
技术研发人员：王军娟，刘辉，朱浦嘉，俞晓峰，
申请(专利权)人：杭州谱聚医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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