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【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物,具体涉及一种hbsag和hbcag相关标志物的检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、乙型肝炎病毒(hepatitis b virus,hbv)的慢性感染是威胁人民身体健康的主要疾病之一,如果hbv感染患者在发展到肝硬化和肝癌之前出现hbsag转阴,其远期预后会非常好。干扰素-α(interferon-α,ifn-α)抗病毒治疗已被证实能抑制hbv复制、延缓疾病进展,并能使chb(慢性乙型肝炎)患者实现功能性治愈(病毒持续抑制、转氨酶正常、hbsag转阴)。但是,chb患者的功能性治愈率仍然较低,其关键在于对ifn-α抗病毒治疗过程中实现功能性治愈的关键作用机制缺乏深入的研究,尤其是对实现功能性治愈人群和未实现功能性治愈人群的关键免疫学特征及机制缺乏了解。因此,鉴定ifn-α抗病毒治疗过程中实现功能性治愈的关键亚群,并解析该关键亚群在导致不同临床结局过程中的表型功能差异及作用机制有利于提高功能性治愈率,具有重要的研究意义和价值。
2、目前的临床治疗研究表明,ifn-α疗法以及ifn-α+nas疗法具有相对较高的功能性治愈率,尤其是治疗年龄越小,hbsag清除率越高。因此,中华医学会《慢乙肝防治指南(2019版)》(征求意见稿)推荐聚乙二醇化的ifn-α(peg-ifn-α)和强效低耐药的nas为临床首选的抗病毒治疗药物。虽然基于ifn-α的疗法是目前的首选,但是总体的功能性治愈率仍有较大的提升空间,而解析ifn-α治疗后儿童chb患者的关键差异机制将有利于新策略的提出和优化。
3、有研究报
4、值得注意的是,除了t细胞相关的体液免疫发挥重要作用,b细胞和针对hbv的抗体反应引起了越来越多的关注。hbsab最初被认为是hbv感染(或疫苗接种)急性缓解后的保护性免疫标志物,现在被定义为chb功能性治愈的生物标志物。通过这种方式,针对hbv特异性b细胞的治疗和诱导抗hbsab反应是实现功能性治愈的核心要素:夏宁邵教授团队在前期对anti-hbsag单抗盘的性质及其体内外生物学功能的研究中发现,抗体还能通过fc介导的调理作用高效清除循环中的hbsag,并通过筛选得到了识别非免疫优势hbsag表位的e6f6抗体,其在动物体内具有持久有效的hbsag清除功能,基于此设计的新型乙肝治疗性疫苗抗原cr-t3-seq13可在hbv转基因小鼠、hdi-hbv小鼠等多种hbv持续携带动物模型中刺激机体产生识别hbsag表位的类e6f6抗体,进而有效降低各模型小鼠体内hbsag、hbv dna水平;在非人灵长类动物模型中,cr-t3-seq13能诱导食蟹猴产生高滴度的hbsag表位抗体,其免疫后多抗血清通过被动免疫可有效清除hbv携带小鼠体内的病毒。申请人课题组在前期工作中聚焦于b细胞与功能性治愈的关系及机制研究:通过建立236人的儿童慢乙肝队列并随访144周,发现功能性治愈人群的b细胞亚群比例明显增高。此外,研究了不同阶段慢性乙型肝炎患者【免疫耐受(it)、免疫激活(ia)、免疫清除(ic)】外周血b细胞亚群的频率、表型和功能。结果显示,ia患者的外周血记忆b细胞相较于其它组而言百分比较低;在ia患者中观察到b细胞的总体多克隆活化,表现为较高水平的活化标志物和igg/igm分泌。这种b细胞过度活化可以由ia患者中增加的ifn-α和cd40配体诱导。值得注意的是,与hc受试者相比,it、ia和ic患者的共刺激分子cd80、hbsab以及hbsag特异性b细胞的频率均显着降低。更重要的是观察到b细胞cd80表达水平恢复和hbsag特异性b细胞功能恢复与功能性治愈密切相关。
5、ifn-α治疗后,hbsab水平也被证明是功能性治愈持久性的独立预测因子。最近宁琴教授团队在获得持久的功能性治愈的患者中发现,hbv包膜特异性cd8+t细胞和b细胞的比例保持不变,在干扰素治疗停药后滤泡辅助性t细胞的比例显著增加,而在随访结束时hbv聚合酶特异性cd8+t细胞和cd86+cd19+b细胞的比例显著升高。这些结果都说明ifn-α治疗后b细胞和hbsab在慢乙肝患者功能性治愈过程中发挥着至关重要的作用。然而,目前临床上仍然缺少chb患者ifn-α治疗后的功能性治愈早期预测靶标,从而阻碍了chb患者的治疗策略优化。基于相关研究发现所建立的诊断方法能够为功能性治愈的临床结局提供早期筛选,从而及时对不能实现功能性治愈的人群进行治疗策略的优化,具有重要的临床转化意义。
技术实现思路
1、针对现有技术的缺点和不足,本专利技术的首要目的在于提供一种hbsag和hbcag相关标志物的检测试剂盒。
2、本专利技术的另一目的在于提供上述检测试剂盒的应用。
3、为了实现上述目的,本专利技术采用了以下技术方案:
4、一种hbsag和hbcag相关标志物的检测试剂盒,所述检测试剂盒包括:
5、hbsag和hbcag标准品;
6、elisa板;
7、酶标二抗:anti-human ig,anti-human igg1,anti-human igg2,anti-humanigg3,anti-human igg4,anti-human iga,anti-human igm;
8、试剂:稀释液,封闭液,洗液,底物显色液,终止液。
9、优选的,所述稀释液为pbs溶液。
10、优选的,所述封闭液为脱脂奶粉和牛血清白蛋白的ddh2o溶液,其中每100毫升ddh2o加入5克脱脂奶粉和2克牛血清白蛋白。
11、优选的,所述洗液由吐温20加入ph=7.4的磷酸盐缓冲溶液中溶解得到,其中每1l磷酸盐缓冲溶液中加入500μl的吐温20。
12、优选的,所述底物显色液由h2o2显本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种HBsAg和HBcAg相关标志物的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒包括:
2.根据权利要求1所述HBsAg和HBcAg相关标志物的检测试剂盒,其特征在于,所述稀释液为PBS溶液;所述封闭液为脱脂奶粉和牛血清白蛋白的ddH2O溶液,其中每100毫升ddH2O加入5克脱脂奶粉和2克牛血清白蛋白。
3.根据权利要求1所述HBsAg和HBcAg相关标志物的检测试剂盒,其特征在于,所述洗液由吐温20加入pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液中溶解得到,其中每1L磷酸盐缓冲溶液中加入500μL的吐温20。
4.根据权利要求1所述HBsAg和HBcAg相关标志物的检测试剂盒,其特征在于,所述底物显色液由H2O2显色液和TMB显色液等体积混合而成。
5.根据权利要求1所述HBsAg和HBcAg相关标志物的检测试剂盒,其特征在于,所述终止液为1M的硫酸溶液。
6.权利要求1-5任一项所述HBsAg和HBcAg相关标志物的检测试剂盒的应用,其特征在于,所述检测试剂盒的应用包括如下步骤:
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在
8.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,步骤(1)-(4)所述室温孵育的时间分别为3h、1h、1h、0.5h。
9.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,步骤(1)中将HBsAg用稀释液稀释至1μg/mL。
10.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,将步骤(1)中的HBsAg替换成HBcAg。
...【技术特征摘要】
1.一种hbsag和hbcag相关标志物的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒包括:
2.根据权利要求1所述hbsag和hbcag相关标志物的检测试剂盒,其特征在于,所述稀释液为pbs溶液;所述封闭液为脱脂奶粉和牛血清白蛋白的ddh2o溶液,其中每100毫升ddh2o加入5克脱脂奶粉和2克牛血清白蛋白。
3.根据权利要求1所述hbsag和hbcag相关标志物的检测试剂盒,其特征在于,所述洗液由吐温20加入ph=7.4的磷酸盐缓冲溶液中溶解得到,其中每1l磷酸盐缓冲溶液中加入500μl的吐温20。
4.根据权利要求1所述hbsag和hbcag相关标志物的检测试剂盒,其特征在于,所述底物显色液由h2o2显色液和tmb显色液等体积混合而成。
5.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员:王鑫,张政,付梦婕,
申请(专利权)人:深圳市第三人民医院深圳市肝病研究所,
类型:发明
国别省市:
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