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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,属于医药检测。
技术介绍
1、左卡尼汀的主要功能是促进脂类代谢,临床上适用于因体内左卡尼汀缺乏产生的一系列并发症状,如心肌病、骨骼肌病、心律失常、高脂血症,以及低血压和透析中肌痉挛等。
2、左卡尼汀在酶法合成制备过程中,可能会有潜在蛋白质残留至终产品中,目前还没有相关文献检测左卡尼汀中蛋白残留的方法,因此,建立一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法对左卡尼汀的质量控制具有非常重要的意义。
技术实现思路
1、本专利技术旨在建立一种简便快捷、准确度高、耐用性好且高效的测定左卡尼汀中残留蛋白的方法。
2、为实现上述目的,本专利技术提供如下技术方案:
3、一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,所述检测方法包括以下步骤:
4、(1)系列标准曲线溶液的制备:
5、取牛血清白蛋白标准溶液适量,分别加磷酸盐缓冲液溶解并稀释成每1ml含牛血清白蛋白12µg、10µg、8µg、6µg、4µg和 2µg的系列标准品溶液;
6、(2)供试品溶液的制备:
7、取样品,精密称定,加磷酸盐缓冲液溶解并稀释,摇匀;取上述溶液,置于超滤管中,以11500-12000rpm离心25-32min,弃管底溶液;再加磷酸盐缓冲液至超滤管,以11500-12000rpm离心25-32min,弃管底溶液,重复上述步骤3-5次;加磷酸盐缓冲液至超滤管,倒置超滤管于离心管,以950-1000r
8、(3)测定方法:
9、精密量取含牛血清白蛋白12µg、10µg、8µg、6µg、4µg和 2µg的系列标准品溶液,置酶标板中,分别加入考马斯亮蓝试剂,550-650rpm振摇30-45秒,室温反应30-45分钟,以磷酸盐缓冲液作为空白,用酶标仪在580-600nm的波长处测定,以标准品溶液浓度与其相应的吸光度绘制标准曲线,线性回归方程的相关系数不得低于0.99;
10、精密量取供试品溶液,置酶标板中,加入考马斯亮蓝试剂,以550-650rpm振摇30-60秒,室温反应30-45分钟,以磷酸盐缓冲液作为空白,用酶标仪在580-600nm的波长处测定,根据线性回归方程计算供试品溶液中蛋白质的浓度,并计算供试品中残留蛋白的含量。
11、优选的,所述步骤(1)中牛血清白蛋白标准溶液浓度为2mg/ml。
12、优选的,所述磷酸盐缓冲液为0.01mol/l磷酸盐缓冲液,所述磷酸盐为磷酸氢二钠和磷酸氢二钾。
13、优选的,所述步骤(2)中所述超滤管为amicon-0.5ml,3kd;超滤管使用前加0.5ml磷酸盐缓冲液于超滤管,12000rpm离心30min,弃管底溶液后,备用。
14、优选的,所述步骤(3)中考马斯亮蓝试剂为考马斯蛋白检测试剂盒。
15、优选的,所述步骤(3)中供试品中残留蛋白的含量不得大于10ppm。
16、优选的,所述步骤(3)中酶标仪在595nm的波长处测定。
17、优选的,所述检测方法包括以下步骤:
18、(1)系列标准曲线溶液的制备:
19、取牛血清白蛋白标准溶液适量,分别加0.01mol/l磷酸盐缓冲液溶解并稀释成每1ml含牛血清白蛋白12µg、10µg、8µg、6µg、4µg、2µg的系列标准溶液。
20、(2)供试品溶液的制备:
21、取样品3g,精密称定,置10ml量瓶,加0.01mol/l磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度,摇匀;取0.5ml上述溶液4份,分别置于超滤管,12000rpm离心30min,弃管底溶液;加0.4ml0.01mol/l磷酸盐缓冲液至超滤管,12000rpm离心30min,弃管底溶液,重复上述步骤3次;加0.15ml 0.01mol/l磷酸盐缓冲液至超滤管,倒置超滤管于1.5ml离心管,1000rpm离心1min,回收4份管底溶液至同一1.5ml离心管,用0.01mol/l磷酸盐缓冲液定容至1ml,得到0.6g/ml的供试品溶液。
22、(3)测定方法:
23、精密量取含牛血清白蛋白12µg、10µg、8µg、6µg、4µg和 2µg的系列标准品溶液各100µl,置酶标板中,分别加入考马斯亮蓝试剂100µl,600rpm振摇30秒,室温反应30分钟,以0.01mol/l磷酸盐缓冲液作为空白,用酶标仪在595nm的波长处测定,以标准品溶液浓度与其相应的吸光度绘制标准曲线,线性回归方程的相关系数不得低于0.99。
24、精密量取供试品溶液100µl,置酶标板中,加入考马斯亮蓝试剂100µl,600rpm振摇30秒,室温反应30分钟,以0.01mol/l磷酸盐缓冲液作为空白,用酶标仪在595nm的波长处测定,根据线性回归方程计算供试品溶液中蛋白质的浓度,并计算供试品中残留蛋白的含量。
25、本专利技术的有益效果是:
26、(1)本专利技术首次提出测定左卡尼汀中蛋白残留量的方法。
27、(2)本专利技术建立了一种提取左卡尼汀中蛋白质的制备方法,操作步骤简便快捷。
28、(3)本专利技术检测方法简洁方便、分析速度快、准确度高、耐用性好,可以准确定量检测左卡尼汀中的蛋白残留,对产品的质量控制具有重要的现实意义。
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1.一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中牛血清白蛋白标准溶液浓度为2mg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述磷酸盐缓冲液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液,所述磷酸盐为磷酸氢二钠和磷酸氢二钾。
4.根据权利要求1所述的一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述步骤(2)中所述超滤管为Amicon-0.5ml,3KD;超滤管使用前加0.5ml磷酸盐缓冲液于超滤管,12000rpm离心30min,弃管底溶液后,备用。
5.根据权利要求1所述的一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述步骤(3)中考马斯亮蓝试剂为考马斯蛋白检测试剂盒。
6.根据权利要求1所述的一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述步骤(3)中供试品中残留蛋白的含量不得大于10ppm。
7.根据权利要求1所述的一种测定左
8.根据权利要求1所述的一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括以下步骤:
...【技术特征摘要】
1.一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中牛血清白蛋白标准溶液浓度为2mg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述磷酸盐缓冲液为0.01mol/l磷酸盐缓冲液,所述磷酸盐为磷酸氢二钠和磷酸氢二钾。
4.根据权利要求1所述的一种测定左卡尼汀中蛋白残留量的检测方法,其特征在于,所述步骤(2)中所述超滤管为amicon-0.5ml,3kd;超滤管使用前加0.5ml磷酸盐缓冲液于超滤管...
【专利技术属性】
技术研发人员:董旭,周悦芳,王学习,刘印,杨学谦,任文刚,张涛,张建勇,宋文姬,任继波,辛晓倩,于长安,
申请(专利权)人:山东齐都药业有限公司,
类型:发明
国别省市:
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