一种基于Split GFP定量评估微生物细胞表面展示效率的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于Split GFP的多层次细胞表面展示评估方法，1）将GFP10或GFP10‑11片段与锚定蛋白和乘客蛋白融合，诱导表达后加入GFP1‑10或GFP1‑9孵育，用荧光显微镜快速定性评价是否成功表面展示；2）通过酶标仪测定孵育后细胞的荧光强度，建立体外Split GFP自组装复合物的荧光强度与GFP11或GFP10‑11浓度的标准曲线，定量评估表观目的蛋白展示数量；3）用过流式细胞技术测定成功表面展示的细胞比例，并定量评估成功表面展示细胞表面目的蛋白的展示数量。本发明专利技术具有操作简便，成本低廉，对目的蛋白的结构和功能影响小，评估全面、准确，适用性广等优点，可以有效促进新型表面展示系统的开发和应用，具有重要应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，具体属于微生物细胞表面展示领域，更具体涉及一种微生物细胞表面展示目的蛋白的效率评估方法。

技术介绍

1、微生物细胞表面展示技术是近年来对微生物细胞表面改性的生物改性方法。利用基因工程手段将有特定功能的外源蛋白基因与锚定蛋白基因相融合，并在微生物宿主细胞中表达，从而使目的蛋白展示在微生物细胞表面，被展示的多肽和蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性。微生物表面展示系统已被广泛研究，包括：大肠杆菌的嵌合体外膜蛋白a（lpp-ompa）、外膜蛋白c（ompc）和冰晶核蛋白（inaz）等；酿酒酵母的α-凝集素、a-凝集素和絮凝素系统；枯草芽孢杆菌的芽孢包裹蛋白cotz和cgea系统等。应用表面展示技术的关键问题在于：1）目的蛋白成功展示在微生物细胞表面；2）目的蛋白表面展示的分子数量尽可能高；3）表面展示后目的蛋白的功能正常。然而，锚定蛋白（anchor protein）、乘客蛋白（passenger protein）和宿主细胞的特性以及融合方法都会影响蛋白质表面展示的效率。因此，开发表面展示效率的高效评估方法对推广和优化表面展示技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于Split GFP定量评估微生物表面展示效率的方法，其特征在于，将锚定蛋白、目标蛋白和split GFP小肽片段融合表达的表面展示微生物，与split GFP小肽互补片段孵育，通过检测Split GFP片段自组装后的荧光强度定量评估微生物表面展示目标蛋白的效率。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的Split-GFP小肽互补片段选自但不限于GFP1-10和GFP1-9，对应的小肽片段选自但不限于GFP11和GFP10-11。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的Split-GFP小肽互补片段在体外与所述表面展示微生物的孵育时间为1-...

【技术特征摘要】

1.一种基于split gfp定量评估微生物表面展示效率的方法，其特征在于，将锚定蛋白、目标蛋白和split gfp小肽片段融合表达的表面展示微生物，与split gfp小肽互补片段孵育，通过检测split gfp片段自组装后的荧光强度定量评估微生物表面展示目标蛋白的效率。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的split-gfp小肽互补片段选自但不限于gfp1-10和gfp1-9，对应的小肽片段选自但不限于gfp11和gfp10-11。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的split-gfp小肽互补片段在体外与所述表面展示微生物的孵育时间为1-1440 min，孵育浓度为0.05 μm - 1 mm。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表面展示微生物的种类选自但不限于大肠杆菌、酵母菌、贪铜菌属、芽孢杆菌、丝状真菌；相应的，采用适用于所述表面展示微生物的种类的蛋白表面展系统。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的表面展示微生物的表面展示效率包括但不限于锚定蛋白的展示效率、单个细胞锚定蛋白的展示个数、目的蛋白的展示效率、单个细胞目的蛋白的展示个数。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张燕飞，张丽，谭玲，刘美子，陈云虹，赵国屏，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：