【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种基于水凝胶体外构建包裹型肠癌细胞caco-2模型的方法及其在体外评价抗氧化作用的用途。
技术介绍
1、人结肠癌细胞(caco-2)表现出与许多小肠上皮细胞相似的特性，具有微毛结构、刷状边缘以及细胞间紧密连接等，是目前应用最为广泛的模型之一。目前关于caco-2细胞模型的研究主要基于二维细胞培养技术。二维细胞贴壁培养是基于单层细胞可以再现生物细胞在体内的生理学行为。然而大量研究表明，在二维培养条件下所观察到的细胞形态存在破损，存在细胞之间接触性抑制，可能会抑制细胞分化的程度，并且二维培养出来的细胞在体外构建评价物质生物活性功能的细胞模型时，所观察的许多复杂的生物学反应如基因表达、细胞迁移和细胞凋亡等与在类器官或者组织中观察的并不一致。而传统的动物模型是完全在体内进行，会受到多种因素的制约以及体内和外界环境的相互影响而变得复杂化，难以研究中间过程。目前，研究者们通过构建caco-2细胞模型和动物模型评价了大量物质的转运机制、代谢组学和信号传导等方面，然而这些成果目前还未进入临床应用，其主要的原因是基础研究和临床应用之间还存在差异。所以，提供一种三维构建caco-2细胞模型的方法是非常有必要的。
技术实现思路
1、针对上述
技术介绍
中存在的问题，本专利技术设计的目的在于提供一种基于水凝胶构建三维caco-2肠细胞模型的方法及应用，具体通过以下技术方案加以实现：
2、一种基于水凝胶构建三维caco-2肠细胞模型的方法，包括以下步骤：
3
4、2)人结肠癌细胞caco-2传代培养，长至80-90％传代，计数；
5、3)制备caco-2浓缩细胞悬液，备用；
6、4)将天然水凝胶预热至室温后与caco-2浓缩细胞悬液按照一定比例混合，混合物涡旋均匀后置于6孔板中，待呈现稳定的胶状后，覆盖一层新鲜细胞培养基，形成完全包裹，最后放置在37℃的细胞恒温培养箱中，每隔24h更换板孔顶部介质。
7、进一步地，步骤2)中，传代培养使用的细胞培养液的配制为：向含1％青霉素、链霉素溶液的dmem细胞培养液中加入胎牛血清，配制含有30％ fbs的双抗体高糖培养基，放置4℃冰箱备用，其中，dmem细胞培养液与胎牛血清的体积比为7ml：3ml。
8、进一步地，步骤2)中，人结肠癌细胞caco-2传代培养具体操作为：将冻存的caco-2细胞复苏，置于37℃的无菌水浴锅中回温，至完全溶解后，在超净工作台上向细胞冻存管中加入1ml细胞培养液并移入无菌离心管中离心，离心后，移液管去除上清液，加入5ml新鲜的细胞培养液吹打均匀，移入细胞培养瓶中，并置于恒温细胞培养箱中培养，每隔24h换一次液，细胞生长至80％-90％，用胰蛋白酶消化并收集细胞，以完全培养基重悬细胞并轻轻吹打，调整细胞浓度至104/孔，根据实验要求浓缩并制备细胞悬液，涡旋均匀，按照不同孔板体积分别加入细胞混合悬浮液。
9、进一步地，离心的条件为，转速1000r/min，离心时间5min，恒温细胞培养箱的培养条件为：37℃、5％ co2。
10、进一步地，步骤4)中天然水凝胶与caco-2浓缩细胞悬液按照2:1的体积比混合。
11、上述任一方法构建的三维caco-2肠细胞模型。
12、三维caco-2肠细胞模型在建立氧化应激损伤模型用以评价物质抗氧化功能上的应用。
13、本专利技术通过水凝胶构建三维caco-2肠细胞模型，有效解决二维水平细胞模型和动物模型在模拟微环境时存在的缺陷，能更好的模拟机体微环境，可使细胞快速生长，为评价物质功能活性提供新的技术平台。
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1.一种基于水凝胶构建三维Caco-2肠细胞模型的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种基于水凝胶构建三维Caco-2肠细胞模型的方法，其特征在于步骤2）中，传代培养使用的细胞培养液的配制为：向含1% 青霉素、链霉素溶液的DMEM细胞培养液中加入胎牛血清，配制含有30% FBS的双抗体高糖培养基，放置4℃冰箱备用，其中，DMEM细胞培养液与胎牛血清的体积比为7 mL：3 mL。
3.如权利要求1所述的一种基于水凝胶构建三维Caco-2肠细胞模型的方法，其特征在于步骤2）中，人结肠癌细胞Caco-2传代培养具体操作为：将冻存的Caco-2细胞复苏，置于37℃的无菌水浴锅中回温，至完全溶解后，在超净工作台上向细胞冻存管中加入1 mL细胞培养液并移入无菌离心管中离心，离心后，移液管去除上清液，加入5 mL新鲜的细胞培养液吹打均匀，移入细胞培养瓶中，并置于恒温细胞培养箱中培养，每隔24 h换一次液，细胞生长至80%-90%，用胰蛋白酶消化并收集细胞，以完全培养基重悬细胞并轻轻吹打，调整细胞浓度至104/孔，根据实验要求浓缩并制备细胞悬液
4.如权利要求3所述的一种基于水凝胶构建三维Caco-2肠细胞模型的方法，其特征在于离心的条件为，转速1000 r/min，离心时间5min，恒温细胞培养箱的培养条件为：37℃、5%CO2。
5.如权利要求1所述的一种基于水凝胶构建三维Caco-2肠细胞模型的方法，其特征在于步骤4）中天然水凝胶与Caco-2浓缩细胞悬液按照2:1的体积比混合。
6.权利要求1-5任一方法构建的三维Caco-2肠细胞模型。
7.权利要求6所述的三维Caco-2肠细胞模型在建立氧化应激损伤模型用以评价物质抗氧化功能上的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种基于水凝胶构建三维caco-2肠细胞模型的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种基于水凝胶构建三维caco-2肠细胞模型的方法，其特征在于步骤2）中，传代培养使用的细胞培养液的配制为：向含1% 青霉素、链霉素溶液的dmem细胞培养液中加入胎牛血清，配制含有30% fbs的双抗体高糖培养基，放置4℃冰箱备用，其中，dmem细胞培养液与胎牛血清的体积比为7 ml：3 ml。
3.如权利要求1所述的一种基于水凝胶构建三维caco-2肠细胞模型的方法，其特征在于步骤2）中，人结肠癌细胞caco-2传代培养具体操作为：将冻存的caco-2细胞复苏，置于37℃的无菌水浴锅中回温，至完全溶解后，在超净工作台上向细胞冻存管中加入1 ml细胞培养液并移入无菌离心管中离心，离心后，移液管去除上清液，加入5 ml新鲜的细胞培养液吹打均匀，移入细胞培养瓶中，...
【专利技术属性】
技术研发人员：关荣发，刘晓凤，卢晓琴，钟浩，周志远，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：
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