一种基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法及其在蛋白质检测中的应用技术

本发明专利技术公开了一种基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法及其在蛋白质检测中的应用。所述方法包括：将含有酪氨酸的肽段与酪氨酸衍生化试剂混合，进行反应，得到标记后肽段；所述酪氨酸衍生化试剂含有具备酪氨酸反应活性的基团，以及带有正电荷或易于携带正电荷的碱性基团。本发明专利技术利用特定的酪氨酸衍生化试剂标记肽段，使得酪氨酸残基衍生化上带有正电荷或具有较高质子亲合能易于带上正电荷的碱性基团，提高肽段在质谱中的离子化和碎裂效率，显著提高其质谱鉴定灵敏度和谱图解析能力，实现对含有酪氨酸的疏水性肽段的高效色谱分离和质谱鉴定，为提高质谱鉴定蛋白质的序列覆盖度提供重要的技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白检测，涉及一种基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法及其在蛋白质检测中的应用。

技术介绍

1、在后基因组学时代，蛋白质组学分析受到越来越广泛的关注。然而，蛋白质样品组成的极端复杂性、宽动态范围分布，使得其分析面临着巨大的挑战。以鸟枪法（shotgun）为代表的自下而上（bottom-up）蛋白质样品预处理策略是复杂蛋白质样品分离鉴定最常采用的策略，这一策略首先将蛋白质样品经蛋白酶酶切，产生多肽混合物，经色谱分离后通过质谱进行多肽鉴定。可见，质谱技术是蛋白质组学研究必不可少的工具。

2、然而，基于质谱技术的肽段分析策略的主要缺陷在于不同的肽段的离子化程度具有显著的差异，其主要原因在于不同的肽段具有不同的氨基酸组成，分子量大小，带电荷状态以及亲疏水性的差异，使得不同肽段的质谱检测灵敏度具有显著的差异，特别是对于复杂蛋白质样品的分析。其中，疏水性强，难电离的肽段，特别是一些药物靶点蛋白质或生物标志物的酶切肽段的鉴定受到抑制，质谱检测仍旧存在较大的困难。因此，改进肽段的亲疏水性和质谱检测灵敏度具有重要的意义。

3、为了提高肽段的质本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法，其特征在于，所述方法包括：

2.权利要求1所述的基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法在蛋白质检测中的应用。

3.一种蛋白质质谱检测方法，其特征在于，所述方法包括：

4.根据权利要求3所述的蛋白质质谱检测方法，其特征在于，所述预处理的方法包括对蛋白质样品进行变性处理、还原处理和烷基化处理。

5.根据权利要求3所述的蛋白质质谱检测方法，其特征在于，所述蛋白酶包括酪氨酸特异性的蛋白酶或胰蛋白酶；

6.根据权利要求3所述的蛋白质质谱检测方法，其特征在于，所述质谱检测的方法包括液相色谱质谱联用；

【技术特征摘要】

1.一种基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法，其特征在于，所述方法包括：

2.权利要求1所述的基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法在蛋白质检测中的应用。

3.一种蛋白质质谱检测方法，其特征在于，所述方法包括：

4.根据权利要求3所述的蛋白质质谱检测方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽丽，汪兵，吴玲娟，沈剑桥，马斌，
申请(专利权)人：上海快序生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：