一种猪麻疹病毒检测试剂盒制造技术

技术编号：40173770 阅读：7 留言：0更新日期：2024-01-26 23:42

本发明专利技术公开一种用于猪麻疹病毒的检测试剂盒，及这种检测试剂盒制备方法及使用方法。本发明专利技术的猪麻疹病毒的荧光定量PCR检测试剂盒内至少包括有序列为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2的2条引物，和序列为SEQ ID No.3的1条探针。本发明专利技术的检测试剂盒检测灵敏度可达到1.12×101copies/μl，而且具有良好的敏感性和特异性，变异系数小于1％，具有重复性和稳定性良好的优点，并能同时进行大批量的样本检测，可以实现对猪麻疹病毒的快速检测。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种兽医用检测试剂盒，及这种检测试剂盒制备方法及使用方法，确切讲本专利技术是一种用于猪麻疹病毒的检测试剂盒，及这种检测试剂盒制备方法及使用方法。

技术介绍

1、猪麻疹病毒(porcine morbillivirus，pomv)为副黏病毒科麻疹病毒属成员，基因组全长15665bp，具有麻疹病毒属病毒的典型基因组结构，依次编码核衣壳(n)蛋白、磷蛋白(p)、基质(m)蛋白、融合(f)蛋白、血凝素(h)蛋白和大聚合酶(l)蛋白等6个结构蛋白。pomv的临床症状以死胎、木乃伊胎和母猪的胎盘炎等生殖系统病变为主要特征。具体表现为在不同的妊娠阶段胎猪发生死亡，导致胎儿不同程度脱水乃至木乃伊化。该病毒首次发现于2020年，目前仅报道在北美部分国家发生，尚不清楚在其他国家是否存在。

2、近年来，我国大规模从欧美引入种猪，该病原流入我国的可能性不断增加。而各研究机构尚未建立针对该病毒的检测技术。因此，建立快速准确、特异性强、灵敏度高的猪麻疹病毒检测方法将助力口岸检疫，也为该病原的流行病学研究提供物质基础。

技术实现思路

1、本专利技术的提供一种可解决现有技术缺乏针对猪麻疹病毒的检测技术的不足，用于检测猪麻疹病毒的荧光定量pcr试剂盒及检测方法。

2、本专利技术的猪麻疹病毒的荧光定量pcr检测试剂盒内至少包括有序列为seq idno.1、seq id no.2的2条引物，和序列为seq id no.3的1条探针。

3、优选地，本专利技术的猪麻疹病毒的荧

4、本优选地，本专利技术的猪麻疹病毒的荧光定量pcr检测试剂盒，其特征在于试剂盒内还有：a.六碱基随机引物；b.包含dntp、rna酶抑制剂、反转录酶和depc水组成的反转录预混体系；c.包含pcr缓冲液、dntp、taq酶、双蒸水的pcr扩增预混体系；d.不同浓度的阳性cdna对照；e.阴性cdna对照。

5、本专利技术的任一猪麻疹病毒的荧光定量pcr检测试剂盒使用方法方法是：先从待检猪的待检样品中提取rna，用试剂盒内引物和反转录预混体系反转录为cdna，以反转录获得的cdna为模板，用荧光定量pcr扩增预混体系(c)及试剂盒内的引物探针进行扩增，根据扩增产物的标准曲线及ct值，参照阳性(d)和阴性(e)对照确定待检猪样品是否含有猪麻疹病毒。

6、本专利技术的用于扩增猪麻疹病毒的引物为seq id no.1、seq id no.2。

7、本专利技术的试剂盒是一种针对猪麻疹病毒的荧光定量pcr检测试剂盒。本专利技术引物和探针建立的荧光定量pcr检测方法对于猪麻疹的检测灵敏度可达到1.12×101copies/μl，表明该方法具有良好的敏感性，而且与猪传染性胃肠炎病毒(tgev)、猪流行型腹泻病毒(pedv)、猪轮状病毒(prov)、猪德尔塔冠状病毒(pdcov)、猪繁殖与呼吸道综合征病毒(prrsv)及猪萨佩洛(psv)均无交叉反应，具有良好的敏感性和特异性。变异系数小于1％，重复性和稳定性良好，并能同时进行大批量的样本检测，可以实现对猪麻疹病毒的快速检测。

8、本专利技术的试剂盒可对检测样本进行快速检测，具有准确、特异性强、灵敏度高的特点，可用于广泛用于海关、口岸和畜产品检疫时猪麻疹病毒的快速检测，以及相应的流行病学研究。

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【技术保护点】

1.一种猪麻疹病毒的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于试剂盒内包括有序列为SEQID No.1、SEQ ID No.2的2条引物，及序列为SEQ ID No.3的1条探针。

2.根据权利要求1所述的猪麻疹病毒的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述荧光探针的荧光报告基团是FAM，淬灭基团为BHQ1。

3.根据权利要求1所述的猪麻疹病毒的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于试剂盒内还有：A.六碱基随机引物；B.包含dNTP、RNA酶抑制剂、反转录酶和DEPC水组成的反转录预混体系；C.包含PCR缓冲液、dNTP、Taq酶、双蒸水的PCR扩增预混体系；D.不同浓度的阳性cDNA对照；E.阴性cDNA对照。

4.权利要求1-3所述的任一猪麻疹病毒的荧光定量PCR检测试剂盒使用方法，其特征在于先从待检猪的待检样品中提取RNA，用试剂盒内引物和反转录预混体系反转录为cDNA，以反转录获得的cDNA为模板，用荧光定量PCR扩增预混体系(C)及试剂盒内的引物探针进行扩增，根据扩增产物的标准曲线及Ct值，参照阳性(D)和阴性(E)对照确定待检猪样品是否含有猪麻疹病毒。

5.用于扩增猪麻疹病毒的引物，其特征在于，所述的引物为SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2。

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【技术特征摘要】

1.一种猪麻疹病毒的荧光定量pcr检测试剂盒，其特征在于试剂盒内包括有序列为seqid no.1、seq id no.2的2条引物，及序列为seq id no.3的1条探针。

2.根据权利要求1所述的猪麻疹病毒的荧光定量pcr检测试剂盒，其特征在于：所述荧光探针的荧光报告基团是fam，淬灭基团为bhq1。

3.根据权利要求1所述的猪麻疹病毒的荧光定量pcr检测试剂盒，其特征在于试剂盒内还有：a.六碱基随机引物；b.包含dntp、rna酶抑制剂、反转录酶和depc水组成的反转录预混体系；c.包含pcr缓冲液、dntp、taq酶、双蒸水...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈佳宁，刘光亮，张耕馨，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：

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