【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及sn-2位脂肪酸的检测，具体涉及一种在油脂中检测长链多不饱和脂肪酸中sn-2位脂肪酸的方法。
技术介绍
1、脂质是人类膳食的主要组成部分，在人体三大能量营养素中占有重要的地位。随着人们生活水平的不断提高，人类对膳食中脂质的营养提出了新的要求。吃好油、吃营养健康油，已成为我国消费者关注自身健康、保证正常营养摄取的新需求。
2、研究表面，油脂中tags(甘油三酯)的含量高达95％以上。tags中脂肪酸的组成、碳链长短、双键数目及位置是影响油脂物理化学及影响价值的重要因素，尤其是甘油骨架上脂肪酸的位置分布对甘油酯在人体内的吸收代谢及其营养价值具有重要因素。甘油酯中脂肪酸的位置可以分为两大类，即α(sn-1,3)位和β(sn-2)位。在人体的肠胃道内，胰脂肪酶是消化脂质的最主要酶，具有较高的α位专一性。酰基在α位上，脂肪酸以游离的形式被吸收，而酰基在β位时，则是以单甘酯的形式被吸收，且β位单甘酯更易被人体吸收利用。
3、目前用于分析油脂sn-2位脂肪酸的方法中绝大部分都是适用于碳链长度大于12和短于20的动植物油脂(如国标gb/t 24894-2010和国际标准iso6800)，这些方法中明确提到了不适用于高浓度的长链多不饱和脂肪酸(碳链长度大于或等于20，双键个数大于或等于4个，如鱼油、海生动物油、dha藻油、ara油等油脂)。
4、相对于一般植物油和结构脂等脂肪酸组成比较简单的物质，发酵产生的含有高浓度长链多不饱和脂肪酸的油脂中脂肪酸组分复杂，含有各种碳链长度和不同饱和程度的脂肪酸，
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的适用于高浓度的长链多不饱和脂肪酸的sn-2位脂肪酸检测的方法有待开发的技术问题，提供一种在油脂中检测长链多不饱和脂肪酸中sn-2位脂肪酸的方法，该方法能够用于检测高浓度的长链多不饱和脂肪酸中sn-2位脂肪酸，且具有较好的检测精度。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供一种在油脂中检测长链多不饱和脂肪酸中sn-2位脂肪酸的方法，所述方法包括：确定油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量，将油脂经特异性水解甘油三酯的sn-1,3位的脂肪酶水解、分离纯化，然后收集单甘酯，将收集到的单甘酯甲酯化后经gc检测分析得到sn-2位脂肪酸的含量；在水解过程中，根据油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量确定反应体系中胰脂肪酶的含量。
3、优选地，所述特异性水解甘油三酯的sn-1,3位的脂肪酶是猪胰脂肪酶。
4、优选地，所述根据油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量调整反应体系中胰脂肪酶的含量的方法为：
5、当所述油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量小于20(质量)％时，将所述油脂在所述胰脂肪酶含量为0.1-0.4(质量)％的反应体系中水解；
6、当所述油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量为大于或等于20(质量)％且小于30(质量)％时，将所述油脂在所述胰脂肪酶含量为0.2-0.5(质量)％的反应体系中水解；
7、当所述油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量为大于或等于30(质量)％且小于45(质量)％时，将所述油脂在所述胰脂肪酶含量为0.2-1(质量)％的反应体系中一步水解；或者将所述油脂在所述胰脂肪酶含量为0.1-0.4(质量)％的反应体系中水解i、分离纯化i后收集含有甘油三酯和甘油二酯的混合物以及单甘酯，将收集到混合物在所述胰脂肪酶含量为0.1-0.5(质量)％的反应体系中水解ii、分离纯化ii后收集单甘酯并与前一步骤收集的单甘酯混合；
8、当所述油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量大于或等于45(质量)％时，将所述油脂在所述胰脂肪酶含量为0.15-2(质量)％的反应体系中一步水解；或者将所述油脂在所述胰脂肪酶含量为0.1-0.6(质量)％的反应体系中水解i、分离纯化i后收集含有甘油三酯和甘油二酯的混合物以及单甘酯，将收集到混合物在所述胰脂肪酶含量为0.1-1(质量)％的反应体系中水解ii、分离纯化ii后收集单甘酯并与前一步骤收集的单甘酯混合。
9、进一步优选地，所述方法还包括根据油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量调整水解的时间。
10、更优选地，所述根据油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量调整水解的时间的方法为：
11、当所述油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量小于20(质量)％时，所述水解的时间为3-10min；
12、当所述油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量为大于或等于20(质量)％且小于30(质量)％时，所述水解的时间为4-15min；
13、当所述油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量为大于或等于30(质量)％且小于45(质量)％时，所述一步水解的时间为5-18min；或者，所述水解i的时间为3-8min，所述水解ii的时间为3-10min；
14、当所述油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量大于或等于45(质量)％时，所述一步水解的时间为3-20min；或者，所述水解i的时间为3-8min，所述水解ii的时间为3-15min。
15、优选地，所述方法还包括根据所述饱和脂肪酸的含量调整胰脂肪酶的含量和酶解时间。
16、进一步优选地，所述根据所述饱和脂肪酸的含量调整胰脂酶的含量和酶解时间的方法包括：
17、当所述油脂中饱和脂肪酸的含量小于15(质量)％时，将所述油脂在所述胰脂肪酶含量为0.2-0.5(质量)％的反应体系中水解，水解时间为2-12min；
18、当所述油脂中饱和脂肪酸的含量大于或等于15(质量)％且小于30(质量)％时，将所述油脂在所述胰脂肪酶含量为0.2-0.5(质量)％的反应体系中水解，水解时间为3-13min；
19、当所述油脂中饱和脂肪酸的含量大于或等于30(质量)％，将所述油脂在所述胰脂肪酶含量为0.3-0.8(质量)％的反应体系中水解，水解时间为4-15min。
20、优选地，所述反应体系为缓冲体系，所述缓冲体系的ph为7.5-9。
21、优选地，所述反应体系还含有氯化钙、胆盐和抗坏血酸盐。
22、进一步优选地，相对于1g的所述油脂，所述氯化钙的添加量为0.2-0.8g，所述胆盐的添加量为0.01-0.04g，所述抗坏血酸盐的添加量为0.02-0.07g。
23、优选地，所述方法还包括：在所述水解前，将所述反应体系中的甘油三酯处理成胶束状的甘油三酯。
24、优选地，所述方法还包括：在所述水解前，对所述反应体系进行超声乳化。
25、进一步优选地，所述超声的条件包括：功率为50-600w，时间为1-9min。
26、优选地，所述方法还包括根据所述饱和脂肪酸的含量调整超声时间。
27、进一步优选地，所述根据所述饱和脂肪酸的含量调整超声时间的方法包括：
28、当所述油脂中饱和本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种在油脂中检测长链多不饱和脂肪酸中sn-2位脂肪酸的方法，其特征在于，所述方法包括：确定油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量，将油脂经特异性水解甘油三酯的sn-1,3位的脂肪酶水解、分离纯化，然后收集单甘酯，将收集到的单甘酯甲酯化后经GC检测分析得到sn-2位脂肪酸的含量；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性水解甘油三酯的sn-1,3位的脂肪酶是猪胰脂肪酶。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述根据油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量调整反应体系中胰脂肪酶的含量的方法为：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括根据油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量调整水解的时间；
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括根据所述饱和脂肪酸的含量调整胰脂肪酶的含量和酶解时间；
6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述反应体系为缓冲体系，所述缓冲体系的pH为7.5-9。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述反应体系还含有氯化钙
8.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：在所述水解前，将所述反应体系中的甘油三酯处理成胶束状的甘油三酯。
9.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：在所述水解前，对所述反应体系进行超声乳化；
10.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述分离纯化的步骤包括：采用乙醚对水解后得到的混合物进行萃取，离心后收集乙醚层，将所述乙醚层洗涤、干燥，然后经薄层色谱分离、洗脱得到单甘酯。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述洗脱采用的洗脱液为氯仿-甲醇混合溶液，
...【技术特征摘要】
1.一种在油脂中检测长链多不饱和脂肪酸中sn-2位脂肪酸的方法，其特征在于，所述方法包括：确定油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量，将油脂经特异性水解甘油三酯的sn-1,3位的脂肪酶水解、分离纯化，然后收集单甘酯，将收集到的单甘酯甲酯化后经gc检测分析得到sn-2位脂肪酸的含量；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性水解甘油三酯的sn-1,3位的脂肪酶是猪胰脂肪酶。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述根据油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量调整反应体系中胰脂肪酶的含量的方法为：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括根据油脂中长链多不饱和脂肪酸的含量调整水解的时间；
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括根据所述饱和脂肪酸的含量调整胰脂肪酶的含量和酶解时间；
6.根据...
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