【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制品检测，尤其是，涉及一种区别诊断布鲁氏菌病omv免疫的方法及试剂。
技术介绍
1、布鲁氏菌病(brucellosis)是由布鲁氏菌(brucella)引起的人畜共患传染病。布鲁氏菌可感染人和多种动物，对畜牧业健康发展和公共卫生安全均构成威胁，疫苗免疫是防控布鲁氏菌病的最主要措施之一。纵观布鲁氏菌免疫制剂研究历史我们发现，布鲁氏菌弱毒疫苗一直处于主导地位，对布鲁氏菌的防治起到很大的作用，但是同时也带来一些困扰。首先，弱毒活菌疫苗容易感染人，对人类健康存在一定威胁；其次，疫苗缺乏鉴别诊断标记，疫苗接种动物与自然患病动物无法甄别，造成患病动物在自然群体中长期存在，严重危害人类和动物的健康，阻碍动物布鲁氏菌病的根除和净化。
2、外膜囊泡(outer membrane vesicles，omvs)是细菌特有的一种生理结构，主要由革兰氏阴性菌产生，部分革兰氏阳性菌也可产生。omvs具有双层膜，由脂蛋白、外膜蛋白、脂多糖、免疫原性蛋白等其他成分组成。omvs存在的大量免疫原性蛋白可以辅助细菌的感染过程，同时这些蛋白本身作为细菌固有的病原体相关分子模式(pathogen-associatedmolecular patterns，pamp)，当接触宿主的免疫系统时，被存在于免疫细胞膜表面模式识别受体所识别，从而引起宿主固有免疫和适应性免疫等全面应答。omvs不能自我复制，因此也不需要用灭活剂处理，从而保留了其原始状态下的pamp，因此，omvs的这些优势促使其成为开发低毒高效疫苗的热门选择。
3、鉴于目
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种能够区别诊断布鲁氏菌病omv免疫的方法及试剂，以解决上述问题。
2、为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种鉴别布鲁氏菌病omv疫苗免疫与自然感染的试剂，包含特异性抗原、待测抗体对应的二抗。
4、所述特异性抗原为bcsp31蛋白、l7/l12蛋白、tf蛋白、bls蛋白、prpa蛋白、groel蛋白、groes蛋白或dnak蛋白中的一种或多种。
5、在本专利技术的一些实施例中，所述的特异性抗原为bcsp31蛋白、l7/l12蛋白、tf蛋白、bls蛋白、prpa蛋白、groel蛋白中的一种或多种；更进一步的，所述的特异性抗原为bcsp31蛋白、tf蛋白中的一种或多种。
6、所述待测抗体对应的二抗标记有用于指示反应强度的酶。
7、所述指示反应强度的酶为辣根过氧化酶、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶中的任一种。
8、在本专利技术的一些实施方式中，所述间接elisa法检测试剂还包含阳性对照和阴性对照，所述阳性对照为布鲁氏菌标准阳性血清，所述阴性对照为布鲁氏菌标准阴性血清。
9、第二方面，本专利技术还涉及一种用于区别诊断布鲁氏菌病omv疫苗免疫与自然感染的试剂盒，所述试剂盒中包含上述试剂。
10、进一步地，其中所述的特异性抗原预先包被于固相支持物上。
11、所述的固相支持物为酶标板。
12、所述的酶标板上每孔包被有50ng～100ng特异性抗原。
13、所述待测抗体对应的二抗为山羊抗牛igg、兔抗牛igg或鼠抗牛igg中的一种。
14、所述待测抗体对应的二抗浓度为1∶5000-1∶30000。
15、更进一步地，所述试剂盒还包括酶显色液及终止液、样品稀释液、封闭液中的一种或多种。
16、所述酶显色液为tmb或abts中的任一种。
17、所述酶显色终止液为tmb stop solution或abts stop solution中的任一种。
18、所述的样品稀释液为pbst。
19、所述的封闭液为5％-10％兔血清。
20、在本专利技术的一些实施方式中，所述的试剂盒组成为：预先包被于酶标板上的特异性抗原，每孔包被有100ng特异性抗原，山羊抗牛igg，酶显色液sera care life scienceskpl tmb microwell peroxidase，酶显色终止液kpl tmb blue stoptm solution，样品稀释液和洗涤液pbst、封闭液兔血清；所述山羊抗牛igg浓度为1∶0000，所述兔血清为10％。
21、第三方面，本专利技术提供一种鉴别布鲁氏菌病omv疫苗免疫与自然感染的方法，其步骤为：
22、用间接elisa法检测样品中的待测抗体值，所述的样品为布鲁氏菌omv疫苗免疫后的血清。
23、所述间接elisa法检测包含以下步骤：
24、在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术提供的鉴别方法还包含以下步骤：
25、反应完成后，用酶标检测仪测各反应孔的od650值，计算阴性对照平均值(ncx)、阳性对照平均值(pcx)和样品值(s/p)，
26、所述阴性对照平均值
27、所述阳性对照平均值
28、所述样品值
29、其中所述nc1a(650)、nc2a(650)为阴性样品od650值；pc1a(650)、pc2a(650)为阳性样品od650值；样品a(650)为样品od650值。
30、在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术提供的鉴别方法还包含以下步骤：当s/p≤1.0时，为布鲁氏菌病omv疫苗免疫；1<s/p<1.1为可疑，s/p≥1.1时，为布鲁氏菌自然感染。
31、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
32、本专利技术提供的方法所采用的特异性抗原特异性强，可有效对布鲁氏菌病omv疫苗免疫与自然感染的动物进行区分，且抗原抗体亲和力好，方法灵敏，解决了疫苗免疫动物与临床自然感染患病动物难以鉴别区分的问题，对牛布鲁氏菌病的防控、根除和净化具有实际应用价值。
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1.一种布鲁氏菌病试剂盒，其特征在于，包括布鲁氏菌病OMV特异性抗原、待测样品对应的二抗、酶显色液及终止液；所述与布鲁氏菌病OMV抗体对应的二抗标记有用于指示反应强度的酶。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性抗原包括Bcsp31蛋白、L7/L12蛋白、TF蛋白、BLS蛋白、PrpA蛋白、GroEL蛋白、GroES蛋白和DnaK蛋白，优选地，所述特异性抗原包括Bcsp31蛋白、L7/L12蛋白、TF蛋白、BLS蛋白、PrpA蛋白、GroEL蛋白；更优选地，所述特异性抗原包括Bcsp31蛋白、TF蛋白。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述指示反应强度的酶包括辣根过氧化酶、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶中的任一种。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶显色液包括TMB或ABTS中的任一种。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶显色终止液包括TMB StopSolution或ABTS Stop Solution中的任一种。
6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述特
7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述固相支持物为酶标板。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标板上每孔包被有50ng～100ng特异性抗原。
9.根据权利要求1-8任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶显色液、酶显色终止液、样品稀释液、封闭液中的一种或多种。
10.权利要求1-9任一项所述的试剂盒在布鲁氏菌病OMV疫苗免疫与自然感染鉴别检测方法中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种布鲁氏菌病试剂盒，其特征在于，包括布鲁氏菌病omv特异性抗原、待测样品对应的二抗、酶显色液及终止液；所述与布鲁氏菌病omv抗体对应的二抗标记有用于指示反应强度的酶。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性抗原包括bcsp31蛋白、l7/l12蛋白、tf蛋白、bls蛋白、prpa蛋白、groel蛋白、groes蛋白和dnak蛋白，优选地，所述特异性抗原包括bcsp31蛋白、l7/l12蛋白、tf蛋白、bls蛋白、prpa蛋白、groel蛋白；更优选地，所述特异性抗原包括bcsp31蛋白、tf蛋白。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述指示反应强度的酶包括辣根过氧化酶、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶中的任一种。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶显色...
【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，赵海龙，何传雨，吴冬玲，杨启林，刘梦志，范丽君，王雨朦，张淑琴，
申请(专利权)人：天康制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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