猪轮状病毒培养方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种猪轮状病毒培养方法及其应用

【技术实现步骤摘要】
猪轮状病毒培养方法及其应用、猪轮状病毒多价疫苗


[0001]本专利技术涉及病毒培养和疫苗
，尤其是涉及一种猪轮状病毒培养方法及其应用
、
猪轮状病毒多价疫苗
。

技术介绍

[0002]猪轮状病毒病是猪肠道传染病中的一种，是猪轮状病毒引起的一种急性肠道传染性疾病，不同年龄段的猪均易感，特别是对1周龄内仔猪的致死率可达
100
％，对于大多数成年猪都已感染而获得免疫
。
临床上以厌食
、
呕吐
、
腹泻和脱水
、
体重减轻为特征
。
除猪轮状病毒外，从小孩
、
犊牛
、
羔羊
、
马驹分离的轮状病毒也可感染仔猪，引起不同程度的症状
。
潜伏期一般为
12
～
24
小时
。
常地方性流行，有显著的季节性，冬春季多发
。
猪群一旦发作本病，今后每年都会接连发作
。
[0003]猪轮状病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种猪轮状病毒培养方法，其特征在于，包括在接毒前对宿主细胞使用含有胰蛋白酶的培养基敏化处理，所述宿主细胞为
Marc
‑
145
细胞
、ST
细胞或
Vero
细胞；所述宿主细胞接毒后，使用含有胰蛋白酶的培养基培养至收获病毒；所述敏化处理包括使所述宿主细胞在含有胰蛋白酶的培养基中传代培养
。2.
根据权利要求1所述的猪轮状病毒培养方法，其特征在于，所述敏化处理包括使所述宿主细胞在含有胰蛋白酶的培养基中传代培养4～5代，优选为5代；优选地，所述传代培养中，第一代宿主细胞的培养基中，胰蛋白酶的浓度不超过5μ
g/ml
；用于接毒代次的宿主细胞的培养基中，胰蛋白酶的浓度不低于
30
μ
g/ml
；且培养基中胰蛋白酶的浓度随着宿主细胞的代次增加升高；优选地，所述宿主细胞接毒后，使用含有
10
～
30
μ
g/ml
胰蛋白酶的培养基培养至收获病毒，优选为
20
μ
g/ml。3.
根据权利要求1所述的猪轮状病毒培养方法，其特征在于，所述猪轮状病毒包括猪
A
群轮状病毒；优选地，所述猪
A
群轮状病毒包括
G
基因型为
G9、G5、G4
和
G3
中至少一种的轮状病毒
。4.
根据权利要求1～3任一项所述的猪轮状病毒培养方法，其特征在于，所述培养方法包括接种种毒至所述宿主细胞进行驯化培养，然后将经驯化的病毒转移至反应器进行放大培养
。5.
根据权利要求4所述的猪轮状病毒培养方法，其特征在于，所述驯化培养步骤中种毒接毒剂量为
0.1
～
0.4MOI
，培养
36
～
48
小时后收获病毒；优选地，所述驯化培养的培养参数为：相对湿度
>60
％
RH
，摇床转速
100
～
120rpm。6.
根据权利要求4所述的猪轮状病毒培养方法，其特征在于，所述宿主细胞以2～4×
106个
/ml
的密度接种到反应器，培养体积为反应器的
1/2
～
2/3
；优选地，反应器参数包括转速
50
...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，潘晓梅，毛丽萍，曹剑，周涛，侯红娟，郑学功，
申请(专利权)人：天康制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：