一种基于基因编辑技术构建的APPV225A点突变人脑类器官AD样模型及其构建方法技术

本发明专利技术涉及阿尔茨海默病人脑类器官模型技术领域，具体涉及一种基于基因编辑技术构建的APPV225A点突变人脑类器官AD样模型及其构建方法。该方法包括以下依次进行的步骤：将RNP复合物电转导入人诱导多能干细胞，获得单克隆的含有APPV225A点突变的人诱导多能干细胞；所述RNP复合物由Cas9、sgRNA1、sgRNA2、ssDNA组成；含有突变的细胞经拟胚体形成培养、诱导培养、扩增培养和成熟培养后，形成人脑类器官AD模型。该突变影响APP蛋白与tau蛋白的结合，最终导致AD的发生和发展。本技术方案解决了现有技术中缺少研究AD的人脑类器官模型的技术问题，为AD病理机制研究和药物筛选提供了条件。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及阿尔茨海默病人脑类器官模型，具体涉及一种基于hipscs的基因编辑技术构建appv225a点突变人脑类器官ad样模型及其构建方法。

技术介绍

1、阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,ad)，俗称老年痴呆症，是一种具有进行性记忆衰退、认知功能障碍、情感障碍、社会障碍及行为障碍等临床症状的神经退行性疾病。目前ad的病理机制尚未明确，公认的主要病理基础为β淀粉样蛋白(amyloid betapetetide,aβ)在神经元细胞外聚集形成淀粉样老年斑(senile plaques,sp)和tau蛋白在细胞内过度磷酸化产生神经原纤维缠化结(neuro fibrillary tangles,nfts)，导致神经元突触功能异常及中枢神经元的死亡。

2、目前对ad的研究主要集中的模式动物中，但是模式动物毕竟不是人类，即使是与人类最为接近的巨猿，其脑组织的结构和发育特征还是与人类有一定差别。某些特定于人体的生物过程，并不能在其它动物身上模拟，即使在亲缘关系很近的动物种类中开展实验，也不一定得到完全一致的结果，甚至得出完全相反的结果本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于基因编辑技术构建的APPV225A点突变人脑类器官AD样模型的构建方法，其特征在于：包括以下依次进行的步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于基因编辑技术构建的APPV225A点突变人脑类器官AD样模型的构建方法，其特征在于：在S1中，在RNP复合物中，浓度为5μg/μL的Cas9蛋白、浓度为100pmol的sgRNA1、浓度为100pmol的sgRNA2、浓度为100pmol的SSDNA的体积比为0.5：1：1：1.5；2x106个人诱导多能干细胞对应4μLRNP复合物。

3.根据权利要求1所述的一种基于基因编辑技术构建的APPV225A点突变人脑类...

【技术特征摘要】

1.一种基于基因编辑技术构建的appv225a点突变人脑类器官ad样模型的构建方法，其特征在于：包括以下依次进行的步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于基因编辑技术构建的appv225a点突变人脑类器官ad样模型的构建方法，其特征在于：在s1中，在rnp复合物中，浓度为5μg/μl的cas9蛋白、浓度为100pmol的sgrna1、浓度为100pmol的sgrna2、浓度为100pmol的ssdna的体积比为0.5：1：1：1.5；2x106个人诱导多能干细胞对应4μlrnp复合物。

3.根据权利要求1所述的一种基于基因编辑技术构建的appv225a点突变人脑类器官ad样模型的构建方法，其特征在于：在s2中，拟胚体形成培养的过程为：appv225a hipscs经eb接种培养基培养，自组织形成拟胚体；eb接种培养基为含有y-27632的eb形成培养基；eb形成培养基由stemdifftm脑类器官基础培养基1和stemdifftm脑类器官添加物a组成。

4.根据权利要求3所述的一种基于基因编辑技术构建的appv225a点突变人脑类器官ad样模型的构建方法，其特征在于：appv225a hipscs按照9000个/孔的密度接种于96孔板中，再进行eb接种培养基培养。

5.根据权利要求4所述的一种基于基因编辑技术构建的appv225a点突变人脑类器官ad样模型的构建方法，其特征在于：appv225a hipscs在接种之前的细胞融合度为50-60％。

6.根据权利要求1所述的一种基于基因编辑技术构建的appv225a点突变人脑...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凤宁，陈江，谭俊，訾丹，
申请(专利权)人：贵州医科大学，
类型：发明
国别省市：