【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，尤其是涉及一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法。
技术介绍
1、生物表面活性剂(biosurfactant)是由亲水部分和疏水基团组成的一种两亲型化合物，具有良好的表、界面活性，不仅能够显著降低溶液表、界面张力、乳化性能稳定、生物相容性良好，还具有抗菌、抗病毒、杀虫、溶血栓等多种生物功能。因此，生物表面活性剂在石油开采、日化用品、食品添加剂、生物医药、环境修复和生物农药等领域有广泛应用。生物表面活性剂产生菌主要包括细菌、真菌和酵母菌。然而，目前关于产生物表面活性剂微生物的研究还非常有限，产生物表面活性剂的微生物资源储备不足，从而限制了生物表面活性剂产生微生物实际的工业生产及应用。
2、目前，生物表面活性剂产生微生物的筛选方法包括：排油圈筛选法、溶血平板筛选法、液滴塌陷筛选法和表面张力筛选法等，但这些方法特异性差且难以实现大批量菌株的快速筛选。因此，亟需建立一种特异性强、高通量的筛选方法进而实现大量生物表面活性剂产生微生物的高效筛选。
技术实现思路
1、为了解决目前生物表面活性剂产生微生物筛选方法低效的问题，本专利技术的目的是提供一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法。本专利技术采用高效灵敏的特异性方法筛选脂肽类生物表面活性剂产生菌，可从复杂的微生物样本中快速高效的获得脂肽类生物表面活性剂产生菌，克服了现有方法所存在的操作繁琐和盲目性问题。
2、高通量筛选方法的关键在于高通量筛选试剂的选择。溴百里酚蓝与氯化十六烷基吡啶试
3、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
4、本专利技术提供一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，包括以下步骤：
5、(s1)将分离后的微生物置于添加筛选培养基的96深孔板中，培养后离心得到上清液样品；
6、(s2)将步骤(s1)得到的上清液样品与高通量筛选试剂混匀后加入96酶标板中，反应后检测其吸光度；
7、(s3)当步骤(s2)得到的吸光度大于0.3时，判定该微生物为脂肽类生物表面活性剂产生菌。
8、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s1)中，培养过程中，温度为37℃，转速为200～220rpm，时间为24～48h。
9、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s2)中，上清液样品与高通量筛选试剂的体积比为1：3～5。
10、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s2)中，上清液样品与高通量筛选试剂的体积比为1：4。
11、在本专利技术的一个实施方式中，高通量筛选试剂由氯化十六烷基吡啶、溴百里酚蓝和磷酸缓冲溶液组成。
12、在本专利技术的一个实施方式中，高通量筛选试剂中，氯化十六烷基吡啶的浓度为1～5mmol/l。
13、在本专利技术的一个实施方式中，高通量筛选试剂中，溴百里酚蓝的浓度为0.1～0.5mmol/l。
14、在本专利技术的一个实施方式中，高通量筛选试剂中，磷酸缓冲液的ph为8。
15、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s2)中，反应过程中，温度为25℃，时间为5～10min。
16、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s2)中，吸光度检测过程中，检测波长为450nm。
17、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
18、(1)本专利技术的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法能够快速(5～10min)、大量的筛选获得脂肽类生物表面活性剂产生菌，96酶标板可实现96个样品的同时筛选测试，显著提高筛选速率。
19、(2)本专利技术的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法操作简单，特异性强；本申请通过高通量筛选试剂实现了脂肽类生物表面活性剂产生菌特异性筛选，操作简单，结果明确。
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1.一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，步骤(S1)中，培养过程中，转速为200～220rpm。
3.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，步骤(S1)中，培养过程中，温度为37℃，时间为24～48h。
4.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，步骤(S2)中，上清液样品与高通量筛选试剂的体积比为1：3～5。
5.根据权利要求4所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，上清液样品与高通量筛选试剂的体积比为1：4。
6.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，高通量筛选试剂中，氯化十六烷基吡啶的浓度为1～5mmol/L。
7.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，高通量筛选试剂中，溴百里酚蓝的浓度为0.
8.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，高通量筛选试剂中，磷酸缓冲液的pH为8。
9.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，步骤(S2)中，反应过程中，温度为25℃，时间为5～10min。
10.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，步骤(S2)中，吸光度检测过程中，检测波长为450nm。
...【技术特征摘要】
1.一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，步骤(s1)中，培养过程中，转速为200～220rpm。
3.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，步骤(s1)中，培养过程中，温度为37℃，时间为24～48h。
4.根据权利要求1所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，步骤(s2)中，上清液样品与高通量筛选试剂的体积比为1：3～5。
5.根据权利要求4所述的一种脂肽类生物表面活性剂产生菌的高通量筛选方法，其特征在于，上清液样品与高通量筛选试剂的体积比为1：4。
6.根据权利要求1所述的一种...
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