一种生产聚-3-羟基丁酸酯的工程菌群及其构建方法和应用技术

一种生产聚‑3‑羟基丁酸酯的工程菌群及其构建方法和应用。所述构建方法包括：敲除受体菌的乙醇脱氢酶基因、苹果酸合酶基因和乳酸脱氢酶基因；导入phaA基因、phaB基因、phaC基因和丙酮酸脱氢酶基因；所述受体菌为含有所述乙醇脱氢酶基因、苹果酸合酶基因和乳酸脱氢酶基因的细菌或真菌。本发明专利技术以酿酒酵母和大肠杆菌为受体菌，对其进行基因改造，改造后的大肠杆菌工程菌发酵生产聚3‑羟基丁酸(PHA(B))，酿酒酵母发酵生产乙酰辅酶A，能够用于后续发酵从而进一步提高聚3‑羟基丁酸酯的产量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，涉及一种生产聚-3-羟基丁酸酯的工程菌及其构建方法和应用。

技术介绍

1、聚-3-羟基丁酸酯(polyhydroxybutyrate，pbh)是pha家族中最简单，也是研究的最多、最透彻的成员。pha(b)在细胞内呈颗粒状，分子量一般为10(随培养条件抽提方法不同而变化)，熔点为18℃，具有高结晶性、光学活性和压电性质，是立体规整的聚合物。与常用的热塑性塑料相比较pha(b)有相对较高的e模量在室温下抗冲击强度较低，在低压力下不能延伸。最近，pha(b)与中链脂肪酸的共聚物pha(b)-co-pha由于在机械性能上有很大程度的提高，成为国际上研究的热点。聚-3-羟基丁酸酯(pha(b))是一种重要的碳中性生物聚合物，可以取代石油衍生塑料，因为它具有优异的热化学性能、生物相容性和生物降解性。

2、乙酰辅酶a是能源物质代谢的重要中间代谢产物，在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。三大营养物质可通过乙酰辅酶a汇聚成一条代谢通路—三梭酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路可彻底氧化成co2和h2o并放出大量能量，供给生物体。它是合成脂肪本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种工程菌群的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述受体菌包括：酿酒酵母菌和/或大肠杆菌。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述酿酒酵母菌和大肠杆菌的质量比为(1-3):(1-3)。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述敲除受体菌的乙醇脱氢酶基因、苹果酸合酶基因和乳酸脱氢酶基因通过向所述受体菌中分别导入含有乙醇脱氢酶基因、苹果酸合酶基因和乳酸脱氢酶基因的上下游同源臂的DNA片段和敲除元件实现；所述敲除元件包括FRT+抗性基因氨苄+FRT。

...

【技术特征摘要】

1.一种工程菌群的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述受体菌包括：酿酒酵母菌和/或大肠杆菌。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述酿酒酵母菌和大肠杆菌的质量比为(1-3):(1-3)。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述敲除受体菌的乙醇脱氢酶基因、苹果酸合酶基因和乳酸脱氢酶基因通过向所述受体菌中分别导入含有乙醇脱氢酶基因、苹果酸合酶基因和乳酸脱氢酶基因的上下游同源臂的dna片段和敲除元件实现；所述敲除元件包括frt+抗性基因氨苄+frt。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述含有乙醇脱氢酶基因、苹果酸合酶基因和乳酸脱氢酶基因上下游同源臂的dna片段的核酸序列包括如seq ...

【专利技术属性】
技术研发人员：温燕丽，
申请(专利权)人：上海沐深新材料科技有限公司，
类型：发明
国别省市：