一种检测环状RNA的方法及试剂盒技术

技术编号:40134896 阅读:27 留言:0更新日期:2024-01-23 22:42
本发明专利技术提供了一种检测环状RNA的方法及试剂盒。该试剂盒包括液滴生成芯片、液滴检测芯片和CRISPR/Cas13a‑RPA检测试剂;液滴生成芯片包括基板,在基板上设置的油相入口、第一液相入口、第二液相入口、液滴生成区和液滴收集出口;油相入口的两侧分别设置油相微通道,第一液相入口、第二液相入口分别连接的第一液相微通道和第二液相微通道与两条油相微通道在液滴生成区汇集使得液相和油相混合形成油包水的液滴;液滴生成区和液滴收集出口通过液滴微通道相通;液滴检测芯片接收液滴,液滴在检测芯片内部发生RPA扩增反应与CRISPR‑Cas13a反应。本发明专利技术使RPA扩增过程与CRISPR‑Cas13a特异性切割过程同时在一个液滴中进行反应,灵敏度高、稳定性好,能精确定量circRNA,适用于临床实验室广泛开展。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子诊断和微流控,具体涉及一种检测环状rna的方法及试剂盒。


技术介绍

1、环状rna(circrnas)是一种新发现的内源性非编码rna,其特征是由下游3'端和上游5'端共价键形成闭合连续环。与mrna相比,无5'-3'极性或聚腺苷酸化尾的闭环结构使circrnas非常稳定,不易被rna外切酶或核糖核酸酶r降解。环状rna参与调控转录和转录后的基因表达,并在多种正常和疾病(包括癌症)相关的不同组织和发育时期表现出特异性表达的特征。circrna的内在稳定性高且对核糖核酸酶具有抗性,在癌症诊断、治疗和预防中作为可靠的诊断和预后生物标志物而备受关注。最近的研究表明,环状rna表现出高表达、组织特异性、结构稳定性和高保守性。基于这些特征,circrna具有作为重要生物标志物,用于诊断和预测疾病的潜力。由于环形rna与其对应的线形rna在一级序列上完全重复,如何有效区分环形rna及其对应的线形rna分子,是环形rna功能研究及应用研究的瓶颈,如何精准检测circrna是临床应用的关键。也是该领域有待突破的前沿热点和难点。

2、传统检测环本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测环状RNA的试剂盒,其特征在于,包括液滴生成芯片、液滴检测芯片和CRISPR/Cas13a-RPA检测试剂;

2.根据权利要求1的试剂盒,其特征在于,所述油相微通道、第一液相微通道、第二液相微通道和液滴微通道均为横截面为矩形、底面光滑、逶迤型的微通道。

3.根据权利要求2的试剂盒,其特征在于,所述油相微通道、第一液相微通道、第二液相微通道的高度小于液滴的直径;所述液滴微通道的高度等于或大于液滴的直径。

4.根据权利要求1的试剂盒,其特征在于,所述油相入口设置在第一液相入口和第二液相入口的上面,与油相入口连接的两条油相微通道将液相入口和液相微...

【技术特征摘要】

1.一种检测环状rna的试剂盒,其特征在于,包括液滴生成芯片、液滴检测芯片和crispr/cas13a-rpa检测试剂;

2.根据权利要求1的试剂盒,其特征在于,所述油相微通道、第一液相微通道、第二液相微通道和液滴微通道均为横截面为矩形、底面光滑、逶迤型的微通道。

3.根据权利要求2的试剂盒,其特征在于,所述油相微通道、第一液相微通道、第二液相微通道的高度小于液滴的直径;所述液滴微通道的高度等于或大于液滴的直径。

4.根据权利要求1的试剂盒,其特征在于,所述油相入口设置在第一液相入口和第二液相入口的上面,与油相入口连接的两条油相微通道将液相入口和液相微通道包裹在内部。

5.根据权利要求4的试剂盒,其特征在于,所述第一液相微通道和第二液相微通道对称设置。

6.根据权利要求1的试剂盒,其特征在于,所述液滴检测芯片包括一基板和设置在所述基板上的若干个独立的检测单元;检测单元包括依次相通的液滴入口,液滴检测区,与液滴检测区通过一微通道连通的油相缓冲区和出气孔,液滴入口通过微通道与液滴检测区连通,出气孔设置在油相缓冲区的侧边。

7.根据权利要求6的试剂盒,其特征在于,所述检测单元的深度等于或大于液滴的直径且小于液滴的2倍直径。

8.根据权利要求6的试剂盒,其特征在于,所述液滴检测区的体积为5-6微升。

9.根据权利要求6的试剂盒,其特征在于,所述检测单元的数量为偶数个,在基板上优选呈中心对称。

10.根据权利要求1的试剂盒,其特征在于,所述液滴生成芯片采用紫外光刻制作su-8阳模,模塑法制作聚二甲基硅...

【专利技术属性】
技术研发人员:汪骅李敏徐靖嵩
申请(专利权)人:上海交通大学医学院附属仁济医院
类型:发明
国别省市:

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