【技术实现步骤摘要】
技术介绍
1、许多疾病的出现和持续存在的特征是对异常细胞(包括恶性的和病毒感染的细胞)的免疫应答不足。免疫疗法是使用和操纵患者的免疫系统来治疗各种疾病。
技术实现思路
1、免疫疗法在疾病的治疗中呈现出新的技术进步，其中免疫细胞被工程改造以表达特定的靶向和/或效应分子，其特异性识别患病的或受损的细胞并与之反应。这代表了有希望的进步，至少部分是由于针对特异性靶向患病的或受损的细胞的潜力，这与更传统的方法(例如化学治疗)相反，所述更传统的方法中所有细胞都受到影响，而期望的结果是足够的健康细胞存活以容许患者生存。一种免疫疗法是在免疫细胞中重组表达嵌合受体，以实现靶向识别和破坏目标异常细胞。
2、为了解决针对特异性靶向和破坏患病的或感染的细胞、使其失效或以其他方式致其惰性的这种需要，本文提供了编码嵌合受体的多核苷酸、氨基酸和载体，这些嵌合受体赋予细胞(例如自然杀伤细胞)增强的靶向和细胞毒性。还提供了用于产生这些细胞的方法，以及使用这些细胞靶向和破坏患病的或受损的细胞的方法。在若干实施例中，提供了编码嵌合受体的多核苷酸，该嵌合受体包含胞外受体结构域和含有跨膜区和胞内信号传导结构域的效应子结构域，其中该胞外受体结构域包含与自然杀伤组2成员d(nkg2d)的天然配体结合的肽，其中与nkg2d天然配体结合的肽是nkg2d片段。
3、在若干实施例中，提供了编码嵌合受体的多核苷酸，该嵌合受体包含以下一种或两种：(a)胞外受体结构域和(b)包含跨膜区和胞内信号传导结构域的效应子结
4、在若干实施例中，效应子结构域的跨膜区包含cd8a跨膜结构域。在一个实施例中，效应子结构域的跨膜区还包含cd8a铰链区。在若干实施例中，cd8a铰链区由包含seq idno:5的多核苷酸编码。在若干实施例中，胞内信号传导结构域还包含4-1bb。在一个实施例中，4-1bb由包含seq id no.12的多核苷酸编码，但是，如本文所披露的，取决于实施例，还可以使用与4-1bb不同但具有相似功能的序列。
5、在若干实施例中，嵌合受体包含与cd8a偶联的nkg2d片段、4-1bb和cd3ζ。在若干实施例中，这种嵌合受体由seq id no.18的核酸序列编码。在另外的实施例中，嵌合受体由seq id no.108的核酸序列编码，但是，如本文所披露的，取决于实施例，也可以使用与seqid no.108不同但具有相似功能的序列。在若干实施例中，该嵌合受体包含seq id no.19的氨基酸序列。
6、在若干实施例中，本文披露的任一嵌合受体也可与膜结合白细胞介素15(mbil15)共表达。在一些实施例中，mbil15由包含seq id no.16的多核苷酸编码。在一些实施例中，mbil15包含seq id no:17的氨基酸序列。取决于实施例，也可以使用mbil15的其他序列。在一些实施例中，mbil15在与嵌合受体相同的多核苷酸上双顺反子表达。在其他实施例中，mbil15在单独的构建体上共表达。在若干实施例中，通过将胞内信号传导结构域的表达与膜结合白细胞介素15(mbil15)的表达偶联，进一步使胞内信号传导结构域增强。
7、在若干实施例中，效应子结构域还包含ox-40结构域。在若干实施例中，ox-40结构域代替mbil15或者是除了mbil15之外另有的。在若干实施例中，嵌合受体包含与cd8a铰链偶联的nkg2d片段、cd8a跨膜结构域、ox-40结构域和cd3ζ。在一些实施例中，将多核苷酸构建体配置为双顺反子地共表达mbil15。在一些此类实施例中，多核苷酸构建体包含由例如细胞基质蛋白酶识别和切割的一个或多个切割位点(例如，t2a、p2a、e2a和/或f2a切割位点)。在一些实施例中，mbil15通过细胞基质蛋白酶切割位点与嵌合受体偶联。在一些实施例中，嵌合受体由seq id no:90的核酸序列编码，所述核酸序列通过细胞基质蛋白酶切割位点与seq id no.16编码的mbil15偶联。在一些实施例中，嵌合受体由seq id no:109的核酸序列编码，所述核酸序列通过细胞基质蛋白酶切割位点与seq id no.16编码的mbil15偶联。在若干实施例中，嵌合受体包含seq id no:91的氨基酸序列，并与包含seq id no.17的氨基酸序列的mbil15共表达。如本文所公开的，取决于实施例，也可以使用与seq id no:90、91、109、16和/或16不同但具有相似功能的序列。
8、在若干实施例中，嵌合受体包含与igg4铰链偶联的nkg2d片段、cd8a跨膜结构域、ox-40结构域和cd3ζ。在一些实施例中，将多核苷酸构建体配置为与嵌合受体双顺反子地共表达mbil15。在一些此类实施例中，多核苷酸构建体包含由细胞基质蛋白酶识别和切割的一个或多个切割位点(例如，t2a、p2a、e2a和/或f2a切割位点)。在一些实施例中，mbil15通过细胞基质蛋白酶切割位点与嵌合受体偶联。在一些实施例中，嵌合受体由seq id no:100的核酸序列编码，所述核酸序列通过细胞基质蛋白酶切割位点与seq id no.16编码的mbil15偶联。在若干实施例中，嵌合受体包含seq id no:101的氨基酸序列，并与包含seqid no.17的氨基酸序列的mbil15共表达。如本文所公开的，取决于实施例，也可以使用与seq id no:100、101和/或16不同但具有相似功能的序列。
9、在若干实施例中，提供了用于治疗癌症的方法，该方法包括向患有癌症的受试者给予组合物，该组合物包含自然杀伤(nk)细胞，该自然杀伤细胞表达由以上或或本文其他地方所述的多核苷酸编码的嵌合受体。
10、在一个实施例中，nk细胞是从患有癌症或传染病的患者中分离的自体细胞。在另外的实施例中，nk细胞是从供体分离的同种异体细胞。
11、本文还提供了如以上或本文其他地方所述的多核苷酸在制备用于增强有需要的哺乳动物中nk细胞的细胞毒性的药物中的用途。在若干实施例中，提供了如以上或本文其他地方所述的多核苷酸在制备药物中的用途，该药物用于治疗或预防有需要的哺乳动物的癌症或传染病。
12、根据若干实施例，提供了编码嵌合受体的多核苷酸，该嵌合受体包含胞外受体结构域、包含跨膜区和胞内信号传导结构域的效应子结构域。如本文更详细讨论的，胞外受体结构域用于识别和结合靶细胞上的配体。效应子结构域用于传递信号(在由胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种编码由细胞表达的嵌合受体的多核苷酸，该嵌合受体包含：
2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中该效应子结构域的跨膜区包含CD8a跨膜结构域。
3.如权利要求1所述的多核苷酸，其中该效应子结构域的跨膜区还包含CD8a铰链区。
4.如权利要求3所述的多核苷酸，其中该CD8a铰链区由包含SEQ ID NO:5的多核苷酸编码。
5.如权利要求1所述的多核苷酸，其中该mbIL15由包含SEQ ID NO.16的多核苷酸编码。
6.如权利要求5所述的多核苷酸，其中该mbIL15在与该嵌合受体相同的多核苷酸上双顺反子表达。
7.如权利要求5所述的多核苷酸，其中mbIL15包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。
8.如权利要求5所述的多核苷酸，其中该效应子结构域还包含OX-40结构域。
9.如权利要求8所述的多核苷酸，其中该嵌合受体包含与CD8a铰链偶联的NKG2D片段、CD8a跨膜结构域、该OX-40结构域、该CD3ζ。
10.如权利要求9所述的多核苷酸，其中该嵌合受体由SEQ
...【技术特征摘要】
1.一种编码由细胞表达的嵌合受体的多核苷酸，该嵌合受体包含：
2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中该效应子结构域的跨膜区包含cd8a跨膜结构域。
3.如权利要求1所述的多核苷酸，其中该效应子结构域的跨膜区还包含cd8a铰链区。
4.如权利要求3所述的多核苷酸，其中该cd8a铰链区由包含seq id no:5的多核苷酸编码。
5.如权利要求1所述的多核苷酸，其中该mbil15由包含seq id no.16的多核苷酸编码。
6.如权利要求5所述的多核苷酸，其中该mbil15在与该嵌合...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁峻豪，岛崎纪子，萧思文，D·坎帕纳，J·B·特拉格尔，A·L·L·拉泽迪克，郭超，路旋·郭·布伦，S·S·马斯拉尼，
申请(专利权)人：新加坡国立大学，
类型：发明
国别省市：
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