【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物制药，具体为一种高纯度米尔贝肟提取方法。
技术介绍
1、米尔贝肟(milbemycin oxime)是一种新型的半合成的大环内酯类驱虫药物，是米尔贝霉素a3和a4的肟化衍生物，对控制和预防大部分常见寄生虫疾病都有很好的效果。通常用来预防恶丝虫病，控制线虫、钩虫引发的犬、猫疾病及犬的鞭虫病。
2、目前已经报道的米尔贝肟的制备方法均采用了硅胶层析或制备色谱等工艺。公开号为cn101037442a的中国专利公开了一种利用冰城链霉菌制备α-型米尔贝霉素的方法。该方法采用甲醇提取，乙酸乙酯萃取，硅胶层析及c18制备色谱纯化得到α-型米尔贝霉素。公开号cn104327094a的中国专利公开了一种米尔贝肟的分离纯化方法。该方法以提取的米尔贝霉素浸膏进行合成得到米尔贝肟粗品，然后采用硅胶柱层析进行初步纯化，再采用反相高效液相色谱进行精纯，最后经结晶、转晶、干燥得到米尔贝肟成品。公开号为cn105440049b的中国专利公开了一种制备高纯度米尔贝肟的方法。该方法将米尔贝霉素a3和米尔贝霉素a4从发酵液中提取并初步纯化，通过树脂层析调整米尔贝霉素a3肟和米尔贝霉素a4肟的含量比例为1:4，同时能够再次将产品的含量提高到98％以上。上述米尔贝肟的杂质处理主要依靠层析柱、制备柱和粗结晶降低单杂质占比≤0.5％，出现溶剂消耗大以及溶剂回收困难，生产成本高，工序复杂收率低而且较难放大，难以实现工业化生产。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种高纯度米尔贝肟提取方法，通过
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
4、s1：将含有米尔贝霉素a3和米尔贝霉素a4组份的发酵液进行固液分离，分离出的菌渣用第一溶媒进行提取，得到提取液，并对提取液进行浓缩，在65～75℃下减压浓缩至第一溶媒体积的25～30％，得到浓缩液；
5、s2：用步骤s1中同体积的第二溶媒进行萃取，得到含有米尔贝霉素a3和米尔贝霉素a4组份的萃取液，将萃取液在50～60℃下减压浓缩结晶，得到米尔贝霉素结晶体；
6、s3：将步骤s2所得米尔贝霉素结晶体投至反应釜中，用第三溶媒溶解，并建立氧化反应体系，得到含有米尔贝霉素a3酮和米尔贝霉素a4酮的溶液，去除溶剂，并缩成晶体状；
7、s4：将步骤s3所得到含有米尔贝霉素a3酮和米尔贝霉素a4酮的结晶体，用第一溶媒溶解建立肟化反应体系，加入水终止反应，再用第二溶媒进行萃取，得到含有米尔贝霉素a3肟和米尔贝霉素a4肟的萃取溶液；
8、s5：将步骤s4得到含有米尔贝霉素a3肟和米尔贝霉素a4肟的萃取液，去除溶剂并缩干，再用第一溶媒溶解，加水降温进行结晶，结晶液进行固液分离，结晶体干燥得到米尔贝肟成品。
9、优选的，所述第一溶媒为甲醇、乙醇中的一种；所述第二溶媒为正庚烷、正己烷中的一种，第三溶媒为丙酮、丁酮中的一种。
10、优选的，所述步骤s1中第一溶媒提取菌渣的用量为菌渣重量的8～10倍，提取温度为20～30℃，采用搅拌提取，搅拌时长为5～7小时。
11、优选的，所述步骤s2中萃取液浓缩至米尔贝霉素a3和米尔贝霉素a4组份的浓度为10～15g/l。
12、优选的，所述步骤s3氧化反应使用的氧化剂是二氧化锰，在28～32℃下搅拌反应3～5小时，过滤得到澄清的含有米尔贝霉素a3酮和米尔贝霉素a4酮的丙酮/丁酮溶液，然后将该澄清溶液在32～36℃浓缩去除溶剂，并缩成晶体状。
13、优选的，所述步骤s4肟化反应方法为：将步骤s3所得结晶体用甲醇/乙醇完全溶解后，将盐酸羟胺缓慢加入该溶液中，搅拌混合并保持溶液温度为25～32℃，反应1～3小时，加水终止反应，再用第二溶媒进行萃取，得到含有米尔贝霉素a3肟和米尔贝霉素a4肟的萃取溶液。
14、优选的，所述步骤s5的具体步骤如下：
15、将步骤s4该萃取溶液去除溶剂后加入第一溶媒进行溶解，得到米尔贝霉素a3肟和米尔贝霉素a4肟总浓度为20g/l～50g/l的溶液；
16、再缓慢加入体积为第一溶媒体积3～4倍的水，降低溶液温度到10～20℃，缓慢搅拌结晶；
17、结晶液进行固液分离，结晶体真空干燥得到米尔贝肟结成品。
18、优选的，所述步骤s1中提取1～3次，采用一次以上的提取方法，是在提取后将提取液过滤，再次使用相同的步骤提取，将每次提取的提取液混合，浓缩至首次使用第一溶媒体积的25～30％。
19、优选的，所述步骤s2中萃取1～2次，每次第二溶媒的用量均为上步骤中浓缩液同体积，再减压浓缩后得到米尔贝霉素结晶体。
20、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
21、1、本专利技术提出的一种高纯度米尔贝肟提取方法，先从米尔贝霉素发酵液中将含量比例为1:4的米尔贝霉素a3和米尔贝霉素a4提取，用米尔贝霉素提取液浓缩后，通过萃取结晶后经氧化反应转化为米尔贝酮，经萃取使米尔贝霉素a3和米尔贝霉素a4含量由20％提高至75％以上，米尔贝酮经肟化反应生成米尔贝肟后，直接经萃取、浓缩、纯化、干燥即可得到米尔贝肟成品；
22、2、本专利技术以萃取结晶提纯降杂的方法替代了用层析柱、制备柱及混溶媒结晶，降低单杂质占比≤0.5％的方法，成本明显下降，工序简化，明显优于前述报道的制备方法，该方法去除层析柱和树脂柱工序，提纯工艺大幅度简化，溶剂使用量降低75％，有效的控制溶剂使用的安全风险；
23、3、本专利技术收率大幅度提高，工艺高效、低能耗，米尔贝肟成品收率高达85％以上，大生产对设备要求较低，通用性好，产品收率高，适用于工业化大生产。
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1.一种高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述第一溶媒为甲醇、乙醇中的一种；所述第二溶媒为正庚烷、正己烷中的一种，第三溶媒为丙酮、丁酮中的一种。
3.根据权利要求2所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述步骤S1中第一溶媒提取菌渣的用量为菌渣重量的8～10倍，提取温度为20～30℃，采用搅拌提取，搅拌时长为5～7小时。
4.根据权利要求3所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述步骤S2中萃取液浓缩至米尔贝霉素A3和米尔贝霉素A4组份的浓度为10～15g/L。
5.根据权利要求4所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述步骤S3氧化反应使用的氧化剂是二氧化锰，在28～32℃下搅拌反应3～5小时，过滤得到澄清的含有米尔贝霉素A3酮和米尔贝霉素A4酮的丙酮/丁酮溶液，然后将该澄清溶液在32～36℃浓缩去除溶剂，并缩成晶体状。
6.根据权利要求5所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述步骤S4肟化反应方法为：将步骤S3所得结晶体用
7.根据权利要求6所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述步骤S5的具体步骤如下：
8.根据权利要求1所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述步骤S1中提取1～3次，采用一次以上的提取方法，是在提取后将提取液过滤，再次使用相同的步骤提取，将每次提取的提取液混合，浓缩至首次使用第一溶媒体积的25～30％。
9.根据权利要求1所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述步骤S2中萃取1～2次，每次第二溶媒的用量均为上步骤中浓缩液同体积，再减压浓缩后得到米尔贝霉素结晶体。
...【技术特征摘要】
1.一种高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述第一溶媒为甲醇、乙醇中的一种；所述第二溶媒为正庚烷、正己烷中的一种，第三溶媒为丙酮、丁酮中的一种。
3.根据权利要求2所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述步骤s1中第一溶媒提取菌渣的用量为菌渣重量的8～10倍，提取温度为20～30℃，采用搅拌提取，搅拌时长为5～7小时。
4.根据权利要求3所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述步骤s2中萃取液浓缩至米尔贝霉素a3和米尔贝霉素a4组份的浓度为10～15g/l。
5.根据权利要求4所述的高纯度米尔贝肟提取方法，其特征在于：所述步骤s3氧化反应使用的氧化剂是二氧化锰，在28～32℃下搅拌反应3～5小时，过滤得到澄清的含有米尔贝霉素a3酮和米尔贝霉素a4酮的丙酮/丁酮溶液，然后将该澄清溶液在32～36℃浓缩去除溶剂，...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁振兵，王志敏，单辉，杨安乐，刘星，樊勇，
申请(专利权)人：齐鲁制药内蒙古有限公司，
类型：发明
国别省市：
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