【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，特别涉及抗人sall4兔单克隆抗体及其制备方法和应用、多核苷酸分子、表达载体和宿主细胞。
技术介绍
1、sall基因家族成员能编码在发育过程中高表达的假定锌指转录因子。sall4与oct-4和nanog等其他全能性调节分子在发育早期就开始表达。最近的研究表明，sall4是一种主调节分子，可在控制干细胞全能性和干细胞命运的转录调节反馈环中调节其自身表达和oct-4表达。免疫组织化学研究表明，sall4是原发性生殖细胞瘤和卵黄囊瘤的一个敏感且特异的诊断标记物。研究表明，sall4在急性髓性白血病(aml)细胞中呈结构性表达，并且可能是疾病细胞中wnt/β-catenin信号转导通路的一个效应子。此外，sall4突变还与duane桡骨线综合征(okihiro综合征)和顶端肾-眼综合征等人体畸形综合征有关。
2、sall4基因负责调节胚胎干细胞的自我更新，是许多肿瘤中的关键基因。sall4是一种癌胚蛋白，研究表明，sall4是精原细胞瘤和卵巢原始生殖细胞肿瘤敏感和特异性标记物，也是一种侵袭性表型肝细胞癌的祖细胞亚类标志物。
技术实现思路
1、本专利技术提供了抗人sall4兔单克隆抗体及其制备方法和应用、多核苷酸分子、表达载体和宿主细胞。该单克隆抗体具有高特异性，可以特异性识别含人sall4蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。
2、为达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种抗人sall4兔单
4、所述重链可变区包含3个重链互补决定区，其氨基酸序列如seq id no.8-10所示；
5、所述轻链可变区包含3个轻链互补决定区，其氨基酸序列如seq id no.3-5所示。
6、在以上技术方案中，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示。
7、在以上技术方案中，所述重链的氨基酸序列如seq id no.6所示，所述轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示。
8、本专利技术还提供了一种多核苷酸分子，所述多核苷酸分子编码上述单克隆抗体。
9、本专利技术还提供了一种表达载体，所述表达载体包含上述多核苷酸分子。
10、本专利技术还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞转化有上述表达载体。
11、本专利技术还提供了一种抗人sall4兔单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：采用人sall4蛋白c末端的第954位至第1053位氨基酸片段作为免疫原，免疫兔，从脾细胞中分离出单个抗原特异性b淋巴细胞培养，通过特定引物提取所述单克隆抗体对应的重链可变区、轻链可变区的基因扩增产物，构建到表达载体上，转染宿主细胞，获得含有所述单克隆抗体的上清，纯化，即得所述单克隆抗体，其中所述人sall4蛋白c末端的第954位至第1053位氨基酸片段的序列如seq id no.11所示。
12、本专利技术还提供了上述单克隆抗体在制备人sall4蛋白检测试剂和/或检测试剂盒中的应用，检测方法包括酶免疫分析法、酶联免疫吸附法、酶联免疫斑点法、免疫组织化学法、免疫荧光法、免疫印迹法和流式细胞分析法中的至少一种。
13、在以上技术方案中，所述检测方法优选为免疫组织化学法。
14、本专利技术的有益效果在于：本专利技术选取人sall4蛋白c末端的第954位至第1053位氨基酸片段为抗原，大肠杆菌rosetta表达的基因片段，蛋白表达在上清，最后得到纯度较高的人sall4重组蛋白。利用人sall4重组蛋白作为免疫原对新西兰大白兔进行免疫，基于单个b淋巴细胞筛选和培养的单克隆抗体开发技术，获得抗sall4蛋白的兔单克隆抗体及重链、轻链序列。本专利技术制备得到的抗人sall4兔单克隆抗体具有高特异性，可以特异性识别含人sall4蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。
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1.一种抗人SALL4兔单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体包括重链和轻链，所述重链包含重链可变区，所述轻链包括轻链可变区；
2.根据权利要求1所述单克隆抗体，其特征在于：所述重链可变区的氨基酸序列如SEQID NO.7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述单克隆抗体，其特征在于：所述重链的氨基酸序列如SEQ IDNO.6所示，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种多核苷酸分子，其特征在于：所述多核苷酸分子编码权利要求1-3任一项所述单克隆抗体。
5.一种表达载体，其特征在于；所述表达载体包含权利要求4所述多核苷酸分子。
6.一种宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞转化有权利要求5所述表达载体。
7.权利要求1所述单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：采用人SALL4蛋白C末端的第954位至第1053位氨基酸片段作为免疫原，免疫兔，从脾细胞中分离出单个抗原特异性B淋巴细胞培养，通过特定引物提取所述单克隆抗体对应的重链可变区、轻链可
8.权利要求1-3任一项所述单克隆抗体在制备人SALL4蛋白检测试剂和/或检测试剂盒中的应用，其特征在于：检测方法包括酶免疫分析法、酶联免疫吸附法、酶联免疫斑点法、免疫组织化学法、免疫荧光法、免疫印迹法和流式细胞分析法中的至少一种。
9.权利要求8所述应用，其特征在于：所述检测方法为免疫组织化学法。
...【技术特征摘要】
1.一种抗人sall4兔单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体包括重链和轻链，所述重链包含重链可变区，所述轻链包括轻链可变区；
2.根据权利要求1所述单克隆抗体，其特征在于：所述重链可变区的氨基酸序列如seqid no.7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示。
3.根据权利要求1所述单克隆抗体，其特征在于：所述重链的氨基酸序列如seq idno.6所示，所述轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示。
4.一种多核苷酸分子，其特征在于：所述多核苷酸分子编码权利要求1-3任一项所述单克隆抗体。
5.一种表达载体，其特征在于；所述表达载体包含权利要求4所述多核苷酸分子。
6.一种宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞转化有权利要求5所述表达载体。
7.权利要求1所述单...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹江萌，吴海，刘瑾林，盛飞，景攀，刘政泽，
申请(专利权)人：武汉爱博泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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