【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养，特别是涉及一种nk细胞培养基及体外扩增nk细胞的方法。
技术介绍
1、nk细胞，即自然杀伤细胞，是一类固有淋巴样细胞，无需抗原预先致敏，就能自发地杀伤靶细胞，故名自然杀伤细胞。
2、nk细胞来源于骨髓干细胞，存在骨髓或胸腺中两条分化、成熟途径，广泛分布于血液、外周淋巴组织、肝、脾等脏器中。
3、nk细胞不表达特异性/泛特异性抗原识别受体，可表达一系列与其活化和抑制相关的调节性受体，并通过上述调节性受体对机体“自身”与“非己”成分的识别，选择性杀伤病毒感染或肿瘤等靶细胞，在抗病毒感染、肿瘤免疫、活化巨噬细胞中均起重要作用；
4、目前制约nk细胞的临床应用的主要障碍之一就是难以得到足够数量的nk细胞，如何在体外实现nk细胞大规模扩增是目前nk细胞治疗的关键问题，外周血中nk细胞仅占很小的部分，而肿瘤病人的外周血中往往nk细胞的数量和活性有明显的下降，不同人nk细胞的性质有很大差异，寻找高效的个性化的nk细胞大规模扩增方法对nk细胞的临床应用有重大意义。
5、现有技术中为了能够获取更多数量的nk细胞，所以研究人员通过体外培养的方式来进行大规模的繁殖，但是，由于体外环境与人体内的环境不完全相同，所以导致nk细胞的免疫活性并不是很高，为此，我们提供一种nk细胞培养基及体外扩增nk细胞的方法。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种nk细胞培养基及体外扩增nk细胞的方法，以解决上述
技术介绍
中提出为了能
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种nk细胞培养基，所述nk细胞培养基包括无血清基础培养基60-90％、人血清白蛋白10-12g/l、白细胞介素30-120μg/l、抗cd3单克隆抗体2.2-2.8μg/ml、白细胞调节素10-100μg/l、青霉素-链霉素40-60μg/ml、虫草多糖0.6-0.8g/l。
3、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述基础培养基为dmem培养基。
4、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述虫草多糖的用量为0.8-1g/ml。
5、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述nk细胞培养基还包括自体灭活血浆。
6、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述自体灭活血浆的用量为30-40mmo l/l。
7、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述nk细胞培养基还包括尼克酰胺2.5-7.5mmol/l。
8、本专利技术还提供如下技术方案：一种体外扩增nk细胞的方法，所述方法包括以下步骤：
9、s1、对患者进行初步采血工作，并利用离心机将采集的血液进行分离工作，提取nk细胞和血浆；
10、s2、将基础培养基加水定容稀释后，加入自体灭活血浆进行诱导培养，并放入培养箱中培养5-7天，进行初步培养；
11、s3、培养至第5-7天，离心去上清，将所得沉淀细胞转入细胞培养袋中，加入虫草多糖和自体灭活血浆进行扩增培养7-9天；
12、s4、培养至第7-9天，离心去上清，将所得沉淀细胞转入细胞培养袋中，加入虫草多糖和自体灭活血浆继续扩增培养9-11天；
13、s5、继续扩增至11-15天得到nk细胞。
14、作为本专利技术的一种优选技术方案，在s2-s5中，所述培养箱的温度为37℃，且其二氧化碳的浓度为5％。
15、作为本专利技术的一种优选技术方案，在s1中，对血液离心操作时，离心实现10-30min，离心速率为700-1000g。
16、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述培养箱中还含有75％的氮气、20％的氧气。
17、与现有技术相比，本专利技术能达到的有益效果是：
18、与现有技术相比，本专利技术具有以下显著优点和有益效果：本专利技术提供的一种nk细胞培养基及体外扩增nk细胞的方法，nk细胞培养基包括无血清基础培养基60-90％、人血清白蛋白10-12g/l、白细胞介素30-120μg/l、抗cd3单克隆抗体2.2-2.8μg/ml、白细胞调节素10-100μg/l、青霉素-链霉素40-60μg/ml、虫草多糖0.6-0.8g/l，虫草多糖是一类高分子复合物,关于其化学结构的研究主要包括多糖组分、单糖成分、物质的量比和虫草多糖的相对分子质量，能够促进淋巴细胞增殖、增进树突状细胞及单核巨噬细胞的活性、调节机体免疫因子的水平，同时能促进t淋巴细胞的增殖，促进白细胞介素等多种因子的表达和释放，从而促进免疫细胞对肿瘤的杀伤作用；
19、使得该nk细胞培养基安全，采用其培养的nk细胞快速稳定增殖，且对肿瘤细胞具有很好的杀伤活力；
20、在nk细胞培养基中增加的2.5-7.5mmo l/l尼克酰胺，尼克酰胺用于合成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadp)，nad+与nadp+是多种酶促氧化还原反应的辅酶，配合单糖成分促进尼克酰胺的分解释放，有助于nk细胞的生长。
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1.一种NK细胞培养基，其特征在于：所述NK细胞培养基包括无血清基础培养基60-90％、人血清白蛋白10-12g/L、白细胞介素30-120μg/L、抗CD3单克隆抗体2.2-2.8μg/mL、白细胞调节素10-100μg/L、青霉素-链霉素40-60μg/mL、虫草多糖0.6-0.8g/L。
2.根据权利要求1所述的一种NK细胞培养基，其特征在于：所述基础培养基为DMEM培养基。
3.根据权利要求1所述的一种NK细胞培养基及体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：所述虫草多糖的用量为0.8-1g/mL。
4.根据权利要求1所述的一种NK细胞培养基，其特征在于：所述NK细胞培养基还包括自体灭活血浆。
5.根据权利要求4所述的一种NK细胞培养基，其特征在于：所述自体灭活血浆的用量为30-40mmo l/L。
6.根据权利要求1所述的一种NK细胞培养基，其特征在于：所述NK细胞培养基还包括尼克酰胺2.5-7.5mmol/L。
7.一种体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
8.根据权利
9.根据权利要求7所述的一种体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：在S1中，对血液离心操作时，离心实现10-30min，离心速率为700-1000g。
10.根据权利要求8所述的一种体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：所述培养箱中还含有75％的氮气、20％的氧气。
...【技术特征摘要】
1.一种nk细胞培养基，其特征在于：所述nk细胞培养基包括无血清基础培养基60-90％、人血清白蛋白10-12g/l、白细胞介素30-120μg/l、抗cd3单克隆抗体2.2-2.8μg/ml、白细胞调节素10-100μg/l、青霉素-链霉素40-60μg/ml、虫草多糖0.6-0.8g/l。
2.根据权利要求1所述的一种nk细胞培养基，其特征在于：所述基础培养基为dmem培养基。
3.根据权利要求1所述的一种nk细胞培养基及体外扩增nk细胞的方法，其特征在于：所述虫草多糖的用量为0.8-1g/ml。
4.根据权利要求1所述的一种nk细胞培养基，其特征在于：所述nk细胞培养基还包括自体灭活血浆。
5.根据权利要求4所述的一种nk细胞培养基，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐忆琳，邓丹霞，
申请(专利权)人：中莱美康再生医学科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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