【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及从mrna制备物中纯化和回收核苷酸信使rna(mrna)帽，其包括分离和纯化来自mrna合成的过量核苷酸mrna帽。
技术介绍
1、能够有效地产生mrna在治疗学领域引起了极大的兴趣。例如，mrna可包封在脂质纳米颗粒中并递送至受试者以治疗或预防各种疾病或疾患。在转录过程中，向转录物中的第一核苷酸添加5’端帽(5'帽)，并且这种mrna加帽过程在保护转录物不被分解方面是重要的。mrna生产成本可能相对较高，这部分是由于制备核苷酸mrna帽的成本。此外，mrna的产生通常需要使用过量的核苷酸mrna帽。仍然需要能够重新捕获和回收在mrna生产中采用的过量核苷酸帽，这将使制造mrna的整个过程更加经济，尤其是在大规模生产中。本申请解决了这些需要。
技术实现思路
1、本文提供了从mrna制备物中回收mrna核苷酸帽或其盐的方法。在一个方面，所述方法包括：
2、收集并合并包含mrna核苷酸帽或其盐和一种或多种污染物的一种或多种混合物；以及
3、从合并的混合物中去除所述污染物。
4、在一个方面，本文提供的方法包括从合并的混合物中去除污染物，其可包括从包含mrna核苷酸帽或其盐的合并的混合物中去除大分子和蛋白质，以提供第一混合物。
5、在一个方面，污染物的去除可进一步包括将第一混合物浓缩并脱盐以提供第二混合物。
6、在一个方面，污染物的去除可进一步包括从第二混合物中去除核苷三磷酸(ntp)并进行离子交换以提供第三混合物。p>
7、在一个方面，污染物的去除进一步包括将第三混合物浓缩并脱盐以提供第四混合物。
8、在一个方面，污染物的去除可进一步包括过滤第四混合物并调节第四混合物的浓度和ph。
9、在一个方面，从合并的混合物中去除污染物包括：
10、从包含mrna核苷酸帽或其盐的合并的混合物中去除大分子和蛋白质，以提供第一混合物；
11、将所述第一混合物浓缩并脱盐以提供第二混合物；
12、从所述第二混合物中去除核苷三磷酸(ntp)并进行离子交换以提供第三混合物；以及
13、将所述第三混合物浓缩并脱盐以提供第四混合物。
14、在一个方面，从合并的混合物中去除污染物可包括：
15、从包含mrna核苷酸帽或其盐的合并的混合物中去除大分子和蛋白质，以提供第一混合物；
16、将所述第一混合物浓缩并脱盐以提供第二混合物；
17、从所述第二混合物中去除核苷三磷酸(ntp)并进行离子交换以提供第三混合物；
18、将所述第三混合物浓缩并脱盐以提供第四混合物；以及
19、过滤所述第四混合物并调节所述第四混合物的浓度和ph。
20、在一个方面，通过本文所述的方法制备的mrna核苷酸帽或其盐具有大于约90％的纯度。
21、本专利技术的每个限制都可涵盖本专利技术的各种实施方案。因此，预期本专利技术的牵涉任何一个要素或要素组合的每个限制都可包括在本专利技术的每个方面中。本专利技术在其应用方面不限于在以下描述中阐述或在附图中示出的组分的构造和排列的细节。本专利技术能够具有其他实施方案并且能够以各种方式实践或进行。同样，本文所使用的措辞和术语是出于描述的目的并且不应被视为限制性的。
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1.一种从mRNA制备物中回收mRNA核苷酸帽或其盐的方法，所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中所述mRNA核苷酸帽或其盐是：
3.如权利要求1所述的方法，其中所述mRNA核苷酸帽或其盐是：
4.如权利要求1所述的方法，其中所述mRNA核苷酸帽或其盐是：
5.如权利要求3或4所述的方法，其中所述阳离子是铵。
6.如权利要求3或4所述的方法，其中所述阳离子是二甲基辛基铵、二甲基己基铵或三乙基铵。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述去除包括：
8.如权利要求7所述的方法，其中所述去除大分子和蛋白质包括过滤。
9.如权利要求8所述的方法，其中用于去除大分子和蛋白质的所述过滤是切向流过滤。
10.如权利要求8或9所述的方法，其中用于去除大分子和蛋白质的所述过滤包括盒式过滤器或螺旋卷式过滤器。
11.如权利要求8-10中任一项所述的方法，其中用于去除大分子和蛋白质的所述过滤包括基于纤维素的膜过滤器。
12.如权利要求8-10中任一项所
13.如权利要求8-12中任一项所述的方法，其中用于去除大分子和蛋白质的所述过滤包括截留分子量为约5kDa至约15kDa的过滤器。
14.如权利要求7-13中任一项所述的方法，其中将pH调节至约6.0至约6.5。
15.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述去除进一步包括：
16.如权利要求15所述的方法，其中所述脱盐包括过滤。
17.如权利要求16所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤是切向流过滤。
18.如权利要求16或17所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤包括盒式过滤器或螺旋卷式过滤器。
19.如权利要求16-18中任一项所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤包括基于纤维素的膜过滤器。
20.如权利要求16-18中任一项所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤包括聚酰胺薄膜复合过滤器。
21.如权利要求16-20中任一项所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤包括截留分子量为约50Da至约5kDa的过滤器。
22.如权利要求16-20中任一项所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤包括截留分子量为约2kDa的过滤器。
23.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述去除进一步包括：
24.如权利要求23所述的方法，其中所述去除NTP包括使所述第二混合物通过离子交换色谱系统。
25.如权利要求23或24所述的方法，其中所述离子交换色谱系统是阴离子交换系统。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述阴离子交换色谱系统包含流动相，所述流动相包括水、水溶液或缓冲水溶液。
27.如权利要求25或26所述的方法，其中所述流动相包括水和NaCl水溶液。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述NaCl水溶液具有约0.25M至约2.0M的浓度。
29.如权利要求25或26所述的方法，其中所述流动相包括水和NH4Cl水溶液。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述NH4Cl水溶液具有约0.5M至约1.5M的浓度。
31.如权利要求25-30中任一项所述的方法，其中所述阴离子交换色谱包括将N,N-二甲基辛基铵(DMOA)交换为NH4+。
32.如权利要求25-31中任一项所述的方法，其中所述阴离子交换色谱系统包括含有强碱或弱碱的固定相。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述固定相包括官能团，所述官能团包含二甲胺、三乙胺、多胺、叔胺、季胺、二甲基乙醇胺或三甲基苄基铵。
34.如权利要求24-33中任一项所述的方法，其中所述离子交换色谱系统的泵流量是约50mL/min至约10L/min。
35.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述去除进一步包括：
36.如权利要求35所述的方法，其中所述第三混合物的所述脱盐包括使所述第三混合物通过色谱系统或过滤或其组合。
37.如权利要求36所述的方法，其中用于使所述第三混合物脱盐的所述色谱系统是反相色谱。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述反相色谱包括固定相，所述固定相包括聚(苯乙烯二乙烯基苯)或C18树脂。
39.如权利要求37或38所述的...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种从mrna制备物中回收mrna核苷酸帽或其盐的方法，所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中所述mrna核苷酸帽或其盐是：
3.如权利要求1所述的方法，其中所述mrna核苷酸帽或其盐是：
4.如权利要求1所述的方法，其中所述mrna核苷酸帽或其盐是：
5.如权利要求3或4所述的方法，其中所述阳离子是铵。
6.如权利要求3或4所述的方法，其中所述阳离子是二甲基辛基铵、二甲基己基铵或三乙基铵。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述去除包括：
8.如权利要求7所述的方法，其中所述去除大分子和蛋白质包括过滤。
9.如权利要求8所述的方法，其中用于去除大分子和蛋白质的所述过滤是切向流过滤。
10.如权利要求8或9所述的方法，其中用于去除大分子和蛋白质的所述过滤包括盒式过滤器或螺旋卷式过滤器。
11.如权利要求8-10中任一项所述的方法，其中用于去除大分子和蛋白质的所述过滤包括基于纤维素的膜过滤器。
12.如权利要求8-10中任一项所述的方法，其中用于去除大分子和蛋白质的所述过滤包括聚酰胺薄膜复合过滤器。
13.如权利要求8-12中任一项所述的方法，其中用于去除大分子和蛋白质的所述过滤包括截留分子量为约5kda至约15kda的过滤器。
14.如权利要求7-13中任一项所述的方法，其中将ph调节至约6.0至约6.5。
15.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述去除进一步包括：
16.如权利要求15所述的方法，其中所述脱盐包括过滤。
17.如权利要求16所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤是切向流过滤。
18.如权利要求16或17所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤包括盒式过滤器或螺旋卷式过滤器。
19.如权利要求16-18中任一项所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤包括基于纤维素的膜过滤器。
20.如权利要求16-18中任一项所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤包括聚酰胺薄膜复合过滤器。
21.如权利要求16-20中任一项所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤包括截留分子量为约50da至约5kda的过滤器。
22.如权利要求16-20中任一项所述的方法，其中用于使所述第一混合物脱盐的所述过滤包括截留分子量为约2kda的过滤器。
23.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述去除进一步包括：
24.如权利要求23所述的方法，其中所述去除ntp包括使所述第二混合物通过离子交换色谱系统。
25.如权利要求23或24所述的方法，其中所述离子交换色谱系统是阴离子交换系统。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述阴离子交换色谱系统包含流动相，所述流动相包括水、水溶液或缓冲水溶液。
27.如权利要求25或26所述的方法，其中所述流动相包括水和nacl水溶液。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述nacl水溶液具有约0.25m至约2.0m的浓度。
29.如权利要求25或26所述的方法，其中所述流动相包括水和nh4cl水溶液。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述nh4cl水溶液具有约0.5m至约1.5m的浓度。
31.如权利要求25-30中任一项所述的方法，其中所述阴离子交换色谱包括将n,n-二甲基辛基铵(dmoa)交换为nh4+。
32.如权利要求25-31中任一项所述的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·博杜安，L·迪特，K·维克，
申请(专利权)人：摩登纳特斯有限公司，
类型：发明
国别省市：
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