【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物育种，具体涉及一种秀珍菇菌株的培育方法。
技术介绍
1、秀珍菇因其鲜美的口感和丰富的营养颇受美食界、餐饮业的青睐，且秀珍菇生长速度快，具有较高的腐生能力，可以在各种植物废渣上生存较易培育，因此可以大规模的栽培。
2、许多学者通过开发新的适合秀珍菇生长的农林副产品下脚料来培育秀珍菇，产生了一定的成效，但仍然难以满足市场需求，而且因为各种理化性质的差异，秀珍菇的产量，污染率，出菇率有较大的差异，不能使其性状稳定，且高产。因此，选育一种性状稳定且高产的秀珍菇菌株对于秀珍菇大规模的栽培具有重大意义。
3、但是，传统的育种主要有自然育种，诱变育种，杂交育种等。在传统的诱变筛选情况下，诱变成功率较低，难以诱变出需要的菌株，且需要耗费大量的人力，物力。
4、因此，提供一种能快速，准确的诱变出性状稳定且高产的秀珍菇菌株培育方法是目前的技术难点，同时对于秀珍菇扩大市场前景具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种秀珍菇菌株的培育方法，以解决现有技术中的培育方法不能快速，准确的诱变出性状稳定且高产的秀珍菇菌株的技术问题。
2、为解决上述技术问题，本专利技术具体提供下述技术方案：
3、一种秀珍菇菌株的培育方法，包括以下步骤：
4、步骤100、制备秀珍菇原生质体，将金秀菌种接种后恒温培养获得秀珍菇菌丝体，收集秀珍菇菌丝体并用mm缓冲液冲洗，后加入酶解液研磨处理，之后按照湿菌丝体的1/30重量加入酶
5、步骤200、原生质体诱变，将秀珍菇原生质体用甘露醇稳渗剂进行稀释后，采用等离子诱变仪进行梯度诱变；
6、步骤300、原生质体的再生，将各梯度诱变的梯度诱变涂布在固体再生培养基上于恒温培养箱中培养；
7、步骤400、筛选菌种，筛选生长性状优良的菌落，获取优良性状秀珍菇菌种。
8、进一步地，所述步骤100中，秀珍菇菌丝体的获取方法包括：
9、将金秀菌种切块接种到pda固体培养基中，放入25℃恒温培养箱中培养至菌丝接近长满平板；
10、将上述pda固体培养基切块后转入tg液体培养基中，每个固体培养基切块分别接种至两个装有tg液体培养基的锥形瓶内；
11、将接种后的锥形瓶放入25℃恒温条件下培养，即得秀珍菇菌丝体。
12、进一步地，接种后的锥形瓶在25℃恒温条件下培养方法为：
13、将接种后的锥形瓶放入25℃恒温培养箱中静置培养7天，以获得秀珍菇的菌丝体。
14、进一步地，接种后的锥形瓶在25℃恒温条件下培养方法为：
15、将接种后的锥形瓶放入25℃恒温培养箱中静置培养24小时；
16、之后转入25℃的振荡培养箱中培养48小时，以获得秀珍菇的菌丝体。
17、进一步地，所述步骤100中，所述酶解液为溶壁酶溶液。
18、进一步地，所述步骤100中，所述酶解液为蜗牛酶和纤维素酶混合酶液。
19、进一步地，所述步骤100中，富集和重悬秀珍菇原生质体的方法包括：
20、用含有多层滤纸的漏斗收集过滤酶解液，并于2-6℃，6000-7000rpm的离心机中离心10min，弃去上清收集原生质体；
21、用mm缓冲液和mmc缓冲液各冲洗2-4次，每次清洗后用离心机6000-7000rpm离心去除上清液；
22、用离心管富集原生质体，用100μlmm缓冲液重悬原生质体。
23、进一步地，所述步骤200中，离子诱变仪进行梯度诱变的方法包括：
24、将收集到的原生质体用甘露醇稳渗剂进行稀释至1×105个/ml；
25、吸取10μl原生质体稀释液均匀涂布在诱变所用无菌的6个金属片上；
26、将涂布好的金属片分别对应在0s，10s，20s，40s，60s，80s的梯度下诱变；
27、将诱变后的金属片用500μl，0.6mol/l的甘露醇稳渗剂进行冲洗收集原生质体，使原生质体均匀分布在稳渗剂中。
28、进一步地，所述步骤400中，筛选菌种的方法包括：
29、在固体再生培养基上选择生长正常的菌落，切取单菌落在pda固体培养基上进行培养，通过观察平板上菌落的颜色和形状，以及菌丝的状态确定秀珍菇菌种的菌落；
30、待菌落长满平板，且菌丝状态良好，在相同直径的圈上进行打孔，保证每个孔的直径相同，且同一块平板上的孔在同一个圆环上；
31、转入新的pda培养基中央培养；
32、间隔时间测量菌落生长的直径大小，比较不同诱变强度诱变后菌落生长快慢，选择生长最快的菌落进行试管接种；
33、在25℃培养箱中长满后，在4℃冰箱中管藏备用。
34、进一步地，所述步骤100中，振荡方法为：使含有菌丝和酶解液的锥形瓶做圆周运动同时不断改变其与水平面的夹角，使得菌丝体的细胞壁充分溶解；
35、所述锥形瓶底部与水平面之间夹角范围是0-20度；
36、所述锥形瓶做圆周运动速度为100-140rpm；
37、所述震荡时间为2-3小时。
38、本专利技术与现有技术相比较具有如下有益效果：
39、本专利技术通过对酶解液处理得到的秀珍菇原生质体采用等离子诱变仪进行梯度诱变，再对诱变后的原生质体再生培养，最终筛选获取优良性状秀珍菇菌种，通过等离子诱变仪梯度诱变，与生物组织或者细胞之间发生复杂而可控的生化过程，能够使微生物细胞壁/膜的结构及通透性改变，并引起多样化的基因损伤，最终导致微生物快速产生多种突变，且遗传性较稳定，因此，能快速，准确的诱变出性状稳定且高产的秀珍菇菌株。
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1.一种秀珍菇菌株的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种等离子诱变选育优良性状秀珍菇的方法，其特征在于，
3.根据权利要求2所述的一种等离子诱变选育优良性状秀珍菇的方法，其特征在于，
4.根据权利要求2所述的一种等离子诱变选育优良性状秀珍菇的方法，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的一种等离子诱变选育优良性状秀珍菇的方法，其特征在于，
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9.根据权利要求2所述的一种等离子诱变选育优良性状秀珍菇的方法，其特征在于，
10.根据权利要求1所述的一种等离子诱变选育优良性状秀珍菇的方法，其特征在于，
【技术特征摘要】
1.一种秀珍菇菌株的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种等离子诱变选育优良性状秀珍菇的方法，其特征在于，
3.根据权利要求2所述的一种等离子诱变选育优良性状秀珍菇的方法，其特征在于，
4.根据权利要求2所述的一种等离子诱变选育优良性状秀珍菇的方法，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的一种等离子诱变选育优良性状秀珍菇的方法，其特征在于，
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【专利技术属性】
技术研发人员：汪锡文，卢恒谦，张晓斌，黄立斌，陶敏敏，
申请(专利权)人：芜湖云菇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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