本发明专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种结直肠癌标志物、引物、试剂盒和应用。本发明专利技术公开的结直肠癌标志物为血清miRNA标志物。该标志物包括：hsa‑miR‑2276‑3p、hsa‑miR‑3915、hsa‑miR‑4728‑5p、hsa‑miR‑5190、hsa‑miR‑5699‑3p中的一种或多种，每种microRNA对应的编码核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.5所示。本发明专利技术提供的血液microRNA作为结直肠癌筛查或诊断标志物用途在检测中具有非侵入性无创和高效的效果，在制备结直肠癌筛查、诊断试剂盒中具有广泛的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种结直肠癌标志物、引物、试剂盒和应用。
技术介绍
1、结直肠癌是当前全球第3位最常见的癌症，也是第2位癌症致死的病因。仅在2018年全球就新增超过100万例结直肠癌患者，新增约80万例结直肠癌死亡病例。因此，结直肠癌严重威胁人类健康。
2、结直肠癌早期通常没有症状，其早期筛查和准确诊断是改善患者预后的一个重要因素。但现有的结直肠癌筛查和诊断手段都存在众多限制与不足。如传统的结直肠癌相关肿瘤标志物，由于其敏感性和特异性较低，不适合结直肠癌筛查和辅助诊断，只能用于术后监测复发；肠镜筛查和诊断结直肠癌准确率高，但其准备过程复杂、检查过程令人痛苦，因此不适合结直肠癌筛查和辅助诊断。因此临床上急需简便无创、高效能的结直肠癌筛查和诊断方法。
3、结直肠癌患者生存期的长短与临床分期密切相关，发现越早，治愈的机率就越大。如能早期治疗,5年生存率可达70-95％；中期治疗，五年存活率约为50-60％，但是晚期治疗5年生存率仅5-10％。因此早期发现和早期治疗至关重要。绝大多数癌症患者在患病早期，要么感觉不到任何症状，要么症状轻微，易被忽视；等病情进展到症状明显而不得不就医时，往往已经错过了最佳治疗时机，需采取综合治疗，治疗费用明显增加，治疗副反应增加，而且治疗效果差，5年生存率显著下降。
4、筛查和早期诊断是改善结直肠癌患者预后的主要方法之一。大多数结直肠癌的发生发展是一个多阶段、多步骤、多因素、多基因参与的复杂过程，是外在环境因素和机体内在的遗传因素相互作用的结果。
5、理想的生物学标志物应满足以下特点：1.可通过非侵入性的方法获得并且可用简便的方法将其分离；2.对不同疾病的高度特异性；3.高度诊断敏感性；4.疾病相关机制的生物学合理性；4.表达具有稳定性，以允许临床常规应用。当前越来越多的证据表明血液microrna具有这些特征，有望成为筛查和诊断疾病的生物学标志物。
6、微小rna(mirna)是一类长度约为19-25个核苷酸的由内源基因编码的非编码rna单链分子，广泛存在于真核生物细胞中。mirna基因约占整个基因组的1％，其通过降低靶mrna的稳定性或抑制翻译效率来调节基因的表达，从而参与包括细胞增殖、分化、凋亡、发育及逆境应答等多种生物学过程。血液中的mirna经常与蛋白质等形成复合物，因此具有良好的抗rnase降解作用，冷冻、解冻或在室温下长期保存均不影响血液中mirna的表达水平。此外，不同性别、不同年龄的人群，其血液中mirna的表达水平十分相似。
7、随着越来越多的mirna作为人类疾病的生物标志物及治疗靶点被发现，从中寻找一种能精确诊断结直肠癌的标志物，对优化临床结直肠癌诊断策略具有非常重大的意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种结直肠癌标志物，以应用于结直肠癌的筛查或诊断，以及提供用于诊断结直肠癌的试剂盒和应用，其技术方案如下：
2、第一方面，本专利技术提供了一种结直肠癌标志物，包括：hsa-mir-2276-3p、hsa-mir-3915、hsa-mir-4728-5p、hsa-mir-5190、hsa-mir-5699-3p中的至少一种。
3、作为一种实施方式，所述hsa-mir-2276-3p的碱基序列如seq id no.1所示，所述hsa-mir-3915的碱基序列如seq id no.2所示，所述hsa-mir-4728-5p的碱基序列如seq idno.3所示，所述hsa-mir-5190的碱基序列如seq id no.4所示，所述hsa-mir-5699-3p的碱基序列如seq id no.5所示。
4、以上列举的结直肠癌标志物为血清mirna标志物，经实验检测，该些标志物在结直肠癌患者血清组织中的表达量均与正常人相对应组织的表达量具有统计学差异，hsa-mir-2276-3p、hsa-mir-3915、hsa-mir-4728-5p、hsa-mir-5190、hsa-mir-5699-3p等标志物可单独用于检测和诊断结直肠癌，也可以两种标志物以上联合检测和诊断结直肠癌，同时，该些结直肠癌标志物能及时反映结直肠癌患者的疾病状态，尤其适用于结直肠癌的早期诊断、预后判断以及术后复发检测等，避免既往繁杂检测，节约时间人力成本，便于临床医生采取个性化的治疗方案。而且，检测血清样本中microrna标志物的方法非常成熟，检测过程简便、易于重复，由普通技术员即可完成，可大大降低医院或检测机构的检测投入，同时，检测样本易于获得，临床可操作性强且创伤性小，而且血清microrna稳定性好，检测便利。
5、第二方面，本专利技术还提供了一种检测上述结直肠癌标志物的引物，所述引物包括：上游引物和/或逆转录引物；
6、其中，所述hsa-mir-2276-3p的上游引物的碱基序列如seq id no.6所示；
7、所述hsa-mir-3915的上游引物的碱基序列如seq id no.7所示；
8、所述hsa-mir-4728-5p的上游引物的碱基序列如seq id no.8所示；
9、所述hsa-mir-5190的上游引物的碱基序列如seq id no.9所示；
10、所述hsa-mir-5699-3p的上游引物的碱基序列如seq id no.10所示；
11、所述hsa-mir-2276-3p的逆转录引物的碱基序列如seq id no.11所示；
12、所述hsa-mir-3915的逆转录引物的碱基序列如seq id no.12所示；
13、所述hsa-mir-4728-5p的逆转录引物的碱基序列如seq id no.13所示；
14、所述hsa-mir-5190的逆转录引物的碱基序列如seq id no.14所示；
15、所述hsa-mir-5699-3p的逆转录引物的碱基序列如seq id no.15所示。
16、第三方面，本专利技术还提供了一种试剂盒，包括：上述引物。
17、作为一种实施方式，所述试剂盒还包括；通用反向引物，各结直肠癌标志物的通用反向引物的碱基序列如seq id no.18所示。
18、作为一种实施方式，所述试剂盒还包括：探针，所述探针的碱基序列如seq idno.19所示。
19、作为一种实施方式，所述试剂盒还包括：rna提取试剂；
20、所述rna提取试剂包括trizoltmls、beyozol、purezol、aurumtm中的至少一种。
21、本专利技术提供的以上试剂盒，通过利用逆转录反应技术和pcr反应技术，能够实现检测血清中的结直肠癌标志物，实现结直肠癌的筛查或诊断，方法成熟，检测过程简便、易于重复，有利于实现结直肠癌的早期诊断、预后判断以及术后复发检测等。
22、在使用以上试剂盒检测结直肠癌时，其检测方法包括：
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【技术保护点】
1.一种结直肠癌标志物，其特征在于，包括：hsa-miR-2276-3p、hsa-miR-3915、hsa-miR-4728-5p、hsa-miR-5190、hsa-miR-5699-3p中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的结直肠癌标志物，其特征在于，所述hsa-miR-2276-3p的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，所述hsa-miR-3915的碱基序列如SEQ ID NO.2所示，所述hsa-miR-4728-5p的碱基序列如SEQ ID NO.3所示，所述hsa-miR-5190的碱基序列如SEQ IDNO.4所示，所述hsa-miR-5699-3p的碱基序列如SEQ ID NO.5所示。
3.一种检测权利要求1或2所述的结直肠癌标志物的引物，其特征在于所述引物包括：上游引物和/或逆转录引物；
4.一种试剂盒，其特征在于，包括：权利要求3所述的引物。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括；通用反向引物，各结直肠癌标志物的通用反向引物的碱基序列如SEQ ID NO.18所示。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：探针，所述探针的碱基序列如SEQ ID NO.19所示。
7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：RNA提取试剂；
8.权利要求1或2所述的结直肠癌标志物或权利要求3所述的引物或权利要求4至7任一项所述的试剂盒在制备抗结直肠癌药物中的应用。
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【技术特征摘要】
1.一种结直肠癌标志物，其特征在于，包括：hsa-mir-2276-3p、hsa-mir-3915、hsa-mir-4728-5p、hsa-mir-5190、hsa-mir-5699-3p中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的结直肠癌标志物，其特征在于，所述hsa-mir-2276-3p的碱基序列如seq id no.1所示，所述hsa-mir-3915的碱基序列如seq id no.2所示，所述hsa-mir-4728-5p的碱基序列如seq id no.3所示，所述hsa-mir-5190的碱基序列如seq idno.4所示，所述hsa-mir-5699-3p的碱基序列如seq id no.5所示。
3.一种检测权利要求1或2所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：来永庆，李伟，
申请(专利权)人：深圳市科芮达健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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