【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种胃癌标志物、引物、试剂盒和应用。
技术介绍
1、
2、胃癌早期通常没有症状，其早期筛查和准确诊断是改善患者预后的一个重要因素。但现有的胃癌筛查和诊断手段都存在众多限制与不足。如传统的胃癌相关肿瘤标志物，由于其敏感性和特异性较低，因此不适合胃癌筛查和辅助诊断，只能用于术后监测复发；食管镜筛查和诊断胃癌准确率高，但其准备过程复杂、检查过程令人痛苦，而且其价格较高，因此不适合胃癌筛查和辅助诊断。因此临床上急需简便无创、高效能的胃癌筛查和诊断方法。
3、理想的生物学标志物应满足以下特点：1.可通过非侵入性的方法获得并且可用简便的方法将其分离；2.对不同疾病的高度特异性；3.高度诊断敏感性；4.疾病相关机制的生物学合理性；4.表达具有稳定性，以允许临床常规应用。当前越来越多的证据表明血液microrna具有这些特征，有望成为筛查和诊断疾病的生物学标志物。
4、微小rna(mirna)是一类长度约为19-25个核苷酸的由内源基因编码的非编码rna单链分子，广泛存在于真核生物细胞中。mirna基因约占整个基因组的1％，其通过降低靶mrna的稳定性或抑制翻译效率来调节基因的表达，从而参与包括细胞增殖、分化、凋亡、发育及逆境应答等多种生物学过程。血液中的mirna经常与蛋白质等形成复合物，因此具有良好的抗rnase降解作用，冷冻、解冻或在室温下长期保存均不影响血液中mirna的表达水平。此外，不同性别、不同年龄的人群，其血液中mirna的表达水平十分相似。
5、
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种胃癌标志物，以应用于胃癌的筛查或诊断，以及用于检测胃癌的试剂盒，其技术方案如下：
2、第一方面，本专利技术提供了一种胃癌标志物，包括：hsa-mir-3157-3p、hsa-mir-3977、hsa-mir-5571-5p、hsa-mir-7515、hsa-mir-10399-5p中的至少一种；
3、其中，所述hsa-mir-3157-3p的碱基序列如seq id no.1所示；
4、所述hsa-mir-3977的碱基序列如seq id no.2所示；
5、所述hsa-mir-5571-5p的碱基序列如seq id no.3所示；
6、所述hsa-mir-7515的碱基序列如seq id no.4所示；
7、所述hsa-mir-10399-5p的碱基序列如seq id no.5所示。
8、以上列举的胃癌标志物均为血清mirna标志物，经实验检测，该些标志物在胃癌患者血清组织中的表达量均与正常人相对应组织的表达量具有统计学差异，hsa-mir-3157-3p、hsa-mir-3977、hsa-mir-5571-5p、hsa-mir-7515、hsa-mir-10399-5p等标志物可单独用于检测和诊断胃癌，也可以两种标志物以上联合检测和诊断胃癌，同时，该些胃癌标志物能及时反映胃癌患者的疾病状态，尤其适用于胃癌的早期诊断、预后判断以及术后复发检测等，避免既往繁杂检测，节约时间人力成本，便于临床医生采取个性化的治疗方案。而且，检测血清样本中microrna标志物的方法非常成熟，检测过程简便、易于重复，由普通技术员即可完成，可大大降低医院或检测机构的检测投入，同时，检测样本易于获得，临床可操作性强且创伤性小，而且血清microrna稳定性好，检测便利。
9、第二方面，本专利技术提供了一种检测上述胃癌标志物的引物，所述引物包括反转录引物和/或上游引物；
10、其中，所述hsa-mir-3157-3p的上游引物的碱基序列如seq id no.6所示；
11、所述hsa-mir-3977的上游引物的碱基序列如seq id no.7所示；
12、所述hsa-mir-5571-5p的上游引物的碱基序列如seq id no.8所示；
13、所述hsa-mir-7515的上游引物的碱基序列如seq id no.9所示；
14、所述hsa-mir-10399-5p的上游引物的碱基序列如seq id no.10所示；
15、所述hsa-mir-3157-3p的反转录引物的碱基序列如seq id no.11所示；
16、所述hsa-mir-3977的反转录引物的碱基序列如seq id no.12所示；
17、所述hsa-mir-5571-5p的反转录引物的碱基序列如seq id no.13所示；
18、所述hsa-mir-7515的反转录引物的碱基序列如seq id no.14所示；
19、所述hsa-mir-10399-5p的反转录引物的碱基序列如seq id no.15所示。
20、第三方面，本专利技术还提供了一种试剂盒，包括：上述引物。
21、作为一种实施方式，所述试剂盒还包括；通用反向引物，各胃癌标志物的通用反向引物的碱基序列如seq id no.18所示。
22、作为一种实施方式，所述试剂盒还包括：探针，所述探针的碱基序列如seq idno.19所示。
23、作为一种实施方式，所述试剂盒还包括：rna提取试剂；
24、所述rna提取试剂包括trizoltmls、beyozol、purezol、aurumtm中的至少一种。
25、本专利技术提供的试剂盒，包括：用于检测上述胃癌标志物的引物，通过利用逆转录反应技术和pcr反应技术，能够实现检测血清中的胃癌标志物，实现筛查或诊断胃癌的目的，方法成熟，检测过程简便、易于重复，有利于实现胃癌的早期诊断、预后判断以及术后复发检测等。
26、以上试剂盒在进行检测胃癌时，其检测方法包括：
27、1)采集血清样本；
28、2)提取样本中总的rna；
29、3)以提取的rna为模板合成cdna；
30、4)通过引物和探针进行rt-qpcr反应，获得待测血清标本中目标引物和外参引物的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数，即ct值；
31、5)根据2-δδcq计算方法，通过外参引物计算出该血清样本中目标引物的δct值。
32、第四方面，本专利技术还提供了前述胃癌标志物或上述引物或上述试剂盒在制备抗胃癌药物中的应用。
33、将本专利技术以上提供的胃癌标志物、试剂盒应用于制备抗胃癌药物，有助于节约时间，节省人力成本，缩短抗胃癌药物的研发和生产周期。
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1.一种胃癌标志物，其特征在于，包括：hsa-miR-3157-3p、hsa-miR-3977、hsa-miR-5571-5p、hsa-miR-7515、hsa-miR-10399-5p中的至少一种；
2.一种检测权利要求1所述胃癌标志物的引物，其特征在于，所述引物包括反转录引物和/或上游引物；
3.一种试剂盒，其特征在于，包括：权利要求2所述的引物。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括；通用反向引物，各胃癌标志物的通用反向引物的碱基序列如SEQ ID NO.18所示。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：探针，所述探针的碱基序列如SEQ ID NO.19所示。
6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：RNA提取试剂；
7.权利要求1所述的胃癌标志物或权利要求2所述的引物或权利要求3至6任一项所述的试剂盒在制备抗胃癌药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种胃癌标志物，其特征在于，包括：hsa-mir-3157-3p、hsa-mir-3977、hsa-mir-5571-5p、hsa-mir-7515、hsa-mir-10399-5p中的至少一种；
2.一种检测权利要求1所述胃癌标志物的引物，其特征在于，所述引物包括反转录引物和/或上游引物；
3.一种试剂盒，其特征在于，包括：权利要求2所述的引物。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：来永庆，李伟，
申请(专利权)人：深圳市科芮达健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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