本发明专利技术公开了一种具有修复功效的美白肽及其制备方法和应用，所述具有修复功效的美白肽为十肽‑12、连接肽和人源化胶原蛋白肽段的融合蛋白，其中人源化胶原蛋白肽段与十肽‑12之间通过连接肽连接。实验表明，本发明专利技术的融合蛋白可以应用在促进皮肤创伤组织修复的化妆品、医美产品、药品中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程、生物制品，具体涉及一种利用胶原蛋白、连接肽和美白肽序列构建的具有组织修复功效的融合蛋白及其表达方法。
技术介绍
1、近年来，化妆品的美白功效成分开发成为研究热点。美白肽(例如，十肽-12、九肽-1)主要是通过抑制酪氨酸酶的活性，进而通过抑制黑色素的合成发挥美白的作用。由于能够有效的减少黑色素的产生，因此美白肽有望开发成为一种新的原料，并应用于美白类化妆品中。
2、胶原蛋白(collagen)是人体中分布最广、含量最多的蛋白质，广泛存在于骨、皮肤、肌肉以及其它结缔组织中，约占蛋白质总量的25％-30％，具体可分为i型胶原蛋白、ⅲ型胶原蛋白等不同种类。胶原蛋白是皮肤中网状纤维的主要组成部分，在创伤修复中，胶原蛋白比例高则皮肤组织细腻柔滑，即胶原蛋白能促进伤口恢复、不易留疤。另外，胶原蛋白作为细胞生长的依附和支撑物，具有良好的细胞黏附性、促进细胞增殖、分化和移行，从而促进组织再生修复，以及修复皮肤屏障。胶原蛋白在生物医学材料、食品、仿生力学、化妆品等领域获得广泛的应用。
3、目前市售的美白肽和胶原蛋白产品自身在促进细胞增殖、移行等与组织再生修复相关的功效上并不强。尽管中国专利cn114869796a提出了一种含有亮肤多肽、用于促进机体产生胶原蛋白的多肽等多种多肽组分的“美白亮肤修复组合物”，但该组合物主要通过复配功能活性物质提升相应多肽组分的功效。
4、目前尚未见“通过胶原蛋白与美白肽融合表达提升修复功能的策略”报道。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种具有修复功效的美白肽及其制备方法和应用，通过美白肽和胶原蛋白有机组合(涉及融合肽段序列设计)并表达形成融合蛋白，从而获得明显提高的修复功效。
2、为达到上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
3、第一方面，提供了一种融合美白肽的重组蛋白，该重组蛋白包括美白肽和具有组织修复功效的重组胶原蛋白。
4、优选地，所述重组蛋白具体包括十肽-12(氨基酸序列如seq.id.no.1所示)、连接肽和具有组织修复功效的重组胶原蛋白的融合蛋白，或者，所述重组蛋白具体包括十肽-12(氨基酸序列如seq.id.no.1所示)和具有组织修复功效的重组胶原蛋白的融合蛋白。
5、优选地，所述融合蛋白中，连接肽连接于美白肽(例如上述十肽-12)和具有组织修复功效的重组胶原蛋白之间。
6、优选地，所述融合蛋白中，具有组织修复功效的重组胶原蛋白为人源化i型胶原蛋白肽段、人源化ⅲ型胶原蛋白肽段中的一种或其中不同种胶原蛋白肽段的组合。
7、优选地，所述人源化ⅰ型胶原蛋白肽段的氨基酸序列如seq.id.no.2所示，人源化ⅲ型胶原蛋白肽段的氨基酸序列如seq.id.no.8所示。
8、优选地，所述融合蛋白中，连接肽的氨基酸序列如seq.id.no.3所示。
9、优选地，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq.id.no.4所示(具体称为i型胶原蛋白+十肽-12融合蛋白)，该融合蛋白含有十肽-12、连接肽和人源化i型胶原蛋白肽段。
10、优选地，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq.id.no.9所示(具体称为ⅲ型胶原蛋白+十肽-12融合蛋白)，该融合蛋白含有十肽-12、连接肽和人源化ⅲ型胶原蛋白肽段。
11、第二方面，提供了一种融合美白肽的重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：
12、1)目的基因的获得
13、根据上述融合蛋白的氨基酸序列人工设计对应的核苷酸序列，得到目的基因；
14、2)重组质粒的构建
15、根据选择的表达载体(例如毕赤酵母通用载体ppic9k，简称9k)将含有目的基因的人工合成序列(例如seq.id.no.5或seq.id.no.10所示的核苷酸序列)片段经限制性内切酶双酶切后与相应的表达载体骨架连接，得到重组质粒(例如ppic9k-lms-hc i或ppic9k-lms-hcⅲ)；
16、3)重组质粒的转化
17、将重组质粒线性化后，利用电转化仪将线性化的重组质粒转化至真核宿主细胞(例如毕赤酵母gs115菌株)，然后筛选高拷贝的重组转化子；
18、4)重组转化子的鉴定
19、对重组转化子(例如gs115/9k-lms-hc i重组转化子或gs115/9k-lms-hcⅲ重组转化子)采用菌落pcr进行鉴定；
20、5)重组转化子的发酵
21、将经过鉴定的重组转化子进行培养和目的蛋白的表达(例如在摇瓶培养中加入甲醇进行诱导表达)。
22、优选地，所述步骤2还包括以下步骤：将连接产物转化至原核宿主细胞(例如大肠杆菌)，经培养、鉴定获得序列正确的重组质粒。
23、第三方面，提供了一种核酸分子，该核酸分子具有如第一方面所述的融合美白肽的重组蛋白的氨基酸序列所对应的核苷酸序列(例如seq.id.no.5、seq.id.no.10中用于编码氨基酸序列的对应核苷酸序列)或该核苷酸序列的互补序列。
24、第四方面，提供了一种载体(例如表达载体等)，该载体包括如第三方面所述的核酸分子。
25、第五方面，提供了一种重组菌，该重组菌是通过将如第四方面所述的载体转化宿主细胞而得到的。
26、优选地，所述宿主细胞来源于毕赤酵母。
27、第六方面，提供了如第一方面所述的融合美白肽的重组蛋白、第三方面所述的核酸分子、第四方面所述的载体在制备化妆品或医美产品中的应用。
28、优选地，所述化妆品或医美产品具有促进皮肤创伤组织修复的作用。
29、第七方面，提供了如第一方面所述的融合美白肽的重组蛋白、第三方面所述的核酸分子、第四方面所述的载体在制备用于皮肤创伤组织修复的药品中的应用。
30、本专利技术的有益效果体现在：
31、本专利技术的重组蛋白通过融合美白肽与重组胶原蛋白产生协同作用，具有促进组织创伤修复的功效，是一种可用于医药、美容护肤领域的生物活性材料。
32、进一步的，本专利技术选取了人源化胶原蛋白序列(采用亲水性、结构稳定的gly-x-y胶原肽段设计)与美白肽(例如十肽-12)多肽序列进行融合蛋白构建，不仅可以显著提高皮肤组织的修复能力，而且应用更为安全。
33、进一步的，本专利技术构建的i型胶原蛋白+十肽-12融合蛋白在促进细胞增殖、迁移方面的效果明显优于ⅲ型胶原蛋白+十肽-12融合蛋白。
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【技术保护点】
1.一种融合美白肽的重组蛋白，其特征在于：该重组蛋白包括美白肽和重组胶原蛋白。
2.根据权利要求1所述一种融合美白肽的重组蛋白，其特征在于：所述重组蛋白具体包括十肽-12、连接肽和重组胶原蛋白的融合蛋白，或者，所述重组蛋白具体包括十肽-12和重组胶原蛋白的融合蛋白。
3.根据权利要求1所述一种融合美白肽的重组蛋白，其特征在于：所述重组胶原蛋白为亲水性、结构稳定且采用由Gly-X-Y构成的胶原肽段结构的人源化胶原蛋白。
4.根据权利要求1所述一种融合美白肽的重组蛋白，其特征在于：所述重组胶原蛋白为人源化I型胶原蛋白肽段、人源化Ⅲ型胶原蛋白肽段中的一种或不同种胶原蛋白肽段的组合。
5.一种融合美白肽的重组蛋白的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
6.一种核酸分子，其特征在于：该核酸分子具有如权利要求1-4中任意一项所述的融合美白肽的重组蛋白的氨基酸序列所对应的核苷酸序列或该核苷酸序列的互补序列。
7.一种载体，其特征在于：该载体包括如权利要求6所述的核酸分子。
8.一种重组菌，其特征在于：该重组菌是通过将如权利要求7所述的载体转化宿主细胞而得到的。
9.如权利要求1-4中任意一项所述的融合美白肽的重组蛋白在制备化妆品、医美产品或用于创伤组织修复的药品中的应用。
10.如权利要求6所述的核酸分子或如权利要求7所述的载体在制备化妆品、医美产品或用于创伤组织修复的药品中的应用。
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【技术特征摘要】
1.一种融合美白肽的重组蛋白，其特征在于：该重组蛋白包括美白肽和重组胶原蛋白。
2.根据权利要求1所述一种融合美白肽的重组蛋白，其特征在于：所述重组蛋白具体包括十肽-12、连接肽和重组胶原蛋白的融合蛋白，或者，所述重组蛋白具体包括十肽-12和重组胶原蛋白的融合蛋白。
3.根据权利要求1所述一种融合美白肽的重组蛋白，其特征在于：所述重组胶原蛋白为亲水性、结构稳定且采用由gly-x-y构成的胶原肽段结构的人源化胶原蛋白。
4.根据权利要求1所述一种融合美白肽的重组蛋白，其特征在于：所述重组胶原蛋白为人源化i型胶原蛋白肽段、人源化ⅲ型胶原蛋白肽段中的一种或不同种胶原蛋白肽段的组合。
5.一种融合美白...
【专利技术属性】
技术研发人员：乔莎，魏文培，侯增淼，李敏，党嘉萌，郝东，赵硕文，周浩，
申请(专利权)人：西安德诺海思医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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