iPS诱导定向分化成类肾器官的方法及应用技术

本发明专利技术涉及iPS诱导定向分化成类肾器官的方法及应用。本发明专利技术针对GSK‑3α和GSK‑3β双靶点，设计了保守的二者共有的免疫多肽片段，以该多肽片段来制备获得了相应的单克隆抗体，所述抗体能够较好的抑制GSK‑3α/β的活性，克服了现有技术的CHIR99021化学药还对CDC2、ERK2等蛋白激酶也有抑制作用导致的对细胞产生额外的其他副作用，导致诱导的类肾器官功能会收到的影响。本发明专利技术的单抗可以用于制备诱导IPS诱导定向分化成类肾器官的方法，应用价值较高。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物领域，具体的涉及一种ips诱导定向分化成类肾器官的方法及应用。

技术介绍

1、多能干细胞（pluripotent stem cell，psc）包括胚胎干细胞（esc）和诱导多能干细胞（ipsc），由于psc具有分化为体内所有类型细胞的潜能，psc体外培养技术已被广泛应用于生物医学及生物科学领域中。近十年，随着体外3d培养技术的发展，类器官的构建已被认为是体内发育程序的体外培养系统。类器官可由psc或祖细胞分化而成，拥有与体内器官相似的细胞类型和组织结构，并能还原该器官在体内的部分功能。类器官构建是一种不可替代的在体外模拟人体组织的方法，对疾病模型、器官再生、细胞发育和药效测试等研究都有重要意义。近年来，psc体外诱导分化产生功能性的肾单位方法越来越成熟。其中肾脏类器官的出现是肾脏再生领域中一个突破性的进展。

2、肾脏类器官的形成分为3个主要阶段。干细胞首先分化成psm，进一步分化成im，im再分化成mm和ub。第一阶段：干细胞分化成psm。psm是中胚层和内胚层的祖细胞群，可以由小鼠esc经过激活素a（activina）与bmp4本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种特异性抑制GSK-3α和GSK-3β的单克隆抗体，所述单克隆抗体其轻链可变区序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区序列如SEQ ID NO：2所示。

2.如权利要求1所述的单克隆抗体在制备用于促进ips细胞分化为类肾器官的培养基中的用途；其中所述的ips细胞是从人皮肤成纤维细胞重编程后制备获得的；所述的重编程是采用Epi5TM Episomal iPSC 重编程试剂盒实现。

3.一种将ips细胞分化为类肾器官的方法，所述方法包括将基质胶铺在细胞培养皿的表面当作细胞外基质，在37℃细胞培养箱中培养iPS至80％～90％汇合度时进行传代，2～3d后汇合度...

【技术特征摘要】

1.一种特异性抑制gsk-3α和gsk-3β的单克隆抗体，所述单克隆抗体其轻链可变区序列如seq id no：1所示，重链可变区序列如seq id no：2所示。

2.如权利要求1所述的单克隆抗体在制备用于促进ips细胞分化为类肾器官的培养基中的用途；其中所述的ips细胞是从人皮肤成纤维细胞重编程后制备获得的；所述的重编程是采用epi5tm episomal ipsc 重编程试剂盒实现。

3.一种将ips细胞分化为类肾器官的方法，所述方法包括将基质胶铺在细胞培养皿的表面当作细胞外基质，在37℃细胞培养箱中培养ips至80％～90％汇合度时进行传代，2～3d后汇合度增长至40％～50％，即可进入分化阶段，分化阶段一第0天细胞达到40％～50％汇合度，利用含1-50μmol gsk-3α/β-2a9单克隆抗体的apel培养基培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，请求不公布姓名，
申请(专利权)人：再少年北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：