【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物,具体地,涉及一种检测抗bcma car表达水平的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、随着肿瘤免疫治疗的发展，结合了抗体和免疫细胞优势的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)-t细胞免疫治疗受到极大关注。嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)-t细胞是指经基因修饰后，能以mhc非限制性方式识别特定目的抗原，并且持续活化扩增的t细胞。car主要由细胞膜外抗原结合区和细胞内信号转导区通过铰链区及跨膜区构成。膜外抗原结合区具有特异性识别并结合靶细胞表面抗原的功能，其构成源于单克隆抗体的单链可变区结构域(single chain variable fragment，scfv)，由重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)组成。细胞内信号转导区主要由共刺激信号和t细胞受体(tcr)的cd3zeta链组成。表达car的t(car-t)细胞通过scfv与靶细胞抗原结合后，胞内信号转导区将信号传入t细胞，从而激活t细胞，分泌穿孔素、颗粒酶及细胞因子等，发挥杀伤作用。
2、b细胞成熟抗原(b cell maturation antigen，bcma)是肿瘤坏死因子受体(tnfr)超家族的成员，可结合b细胞激活因子(baff)和增殖诱导配体(april)。据报道，在正常细胞中，bcma主要由浆细胞和一部分成熟b细胞表达，而在大部分b细胞以及其它器官上都不表达，所以是car-t免疫疗法抗mm比较理想的靶点。目前，百时美施贵宝(bms)和bluebird
3、构建car-t细胞需要将car基因通过病毒或非病毒系统转染并整合到t细胞基因组上。当该基因正常表达，在细胞膜上形成跨膜的car结构时，car-t细胞才具有识别和杀伤靶细胞的活性。因此，准确检测表达car的阳性t细胞是car-t药物质量控制的关键步骤，也是临床病人治疗剂量控制、过程监控及辅助诊断的重要环节。常见的检测方法有两种类型：检测car基因阳性t细胞和检测car蛋白阳性t细胞。
4、定量聚合酶联反应(quantitative real time pcr,qpcr)是检测car基因阳性t细胞的主要方法。通过qpcr可以检测细胞基因组上整合的car基因，以及car基因的拷贝数。但该方法不能准确反映表达car的阳性t细胞，因为有一部分整合了car基因的t细胞没有正常表达car(jennifer n.brudno,et al.,journal of clinical oncology,2016)，这些t细胞带来的假阳性降低了qpcr方法应用的准确性。更为严重的是，qpcr方法无法分辨car阳性t细胞和car阳性b细胞，从而难以发现car阳性b细胞引发的治疗和复发风险(marco ruella,et al.,nature medicine,2018)。此外，qpcr方法无法满足对t细胞多种表面标志物(cd3、cd4、cd8等等)同时检测的需求，这进一步限制了qpcr方法的应用。
5、检测car蛋白阳性t细胞的现有检测试剂包括抗鼠igg(fab’)2(jacksonimmunoresearch公司)、protein l(zhili zheng,et al.,journal of translationalmedicine,2012)。而抗鼠igg(fab’)2和protein l检测bcma car的灵敏度较低，并且无法区分鼠源不同scfv构建的不同car(例如cd19 car、cd22 car等)。以上试剂因为各自难以克服的原因，导致其应用范围较小。
6、因此，本领域迫切需要开发检测灵敏度高、准确性高的抗bcma-car阳性细胞检测试剂以及检测方法，以满足抗bcma car-t药物质量控制、临床样本检测的需求。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种特异性结合bcma car的单克隆抗体，及其在检测bcmacar阳性细胞中的应用。
2、本专利技术的第一方面，提供了一种特异性靶向bcma car的抗体或其抗原结合片段，所述抗体的重链可变区包含以下三个互补决定区cdr：
3、如seq id no:4所示的h-cdr1，
4、如seq id no:5所示的h-cdr2，和
5、如seq id no:6所示的h-cdr3；以及
6、所述抗体的轻链可变区包含以下三个互补决定区cdr：
7、如seq id no:7所示的l-cdr1，
8、氨基酸序列为sas的l-cdr2，和
9、如seq id no:8所示的l-cdr3。
10、在另一优选例中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:2所示。
11、在另一优选例中，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:3所示。
12、在另一优选例中，所述抗体包含：氨基酸序列如seq id no:2所示的重链可变区，和氨基酸序列如seq id no:3所示的轻链可变区。
13、在另一优选例中，所述抗体的重链恒定区和轻链恒定区为兔源的。
14、在另一优选例中，所述抗体包括：单克隆抗体、单链抗体(scfv)、fab或(fab')2片段、双链抗体。
15、在另一优选例中，所述抗体为兔源的单克隆抗体。
16、在另一优选例中，所述抗体特异性结合bcma car中的scfv。
17、在另一优选例中，所述bcma car中的scfv为c11d5.3，其氨基酸序列如seq id no:1所示。
18、在另一优选例中，所述抗体与bcma car中的scfv的平衡解离常数kd≤1nm,更佳地，kd≤100pm，最佳地，kd≤50pm。
19、本专利技术的第二方面，提供了一种重组蛋白，所述重组蛋白包含：
20、(i)如本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合片段；和
21、(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。
22、在另一优选例中，所述的标签序列包括分泌肽标签。
23、在另一优选例中，所述的标签序列包括6*his标签和/或fc标签。
24、在另一优选例中，所述的重组蛋白是特异性抗bcma scfv的抗体。
25、本专利技术的第三方，提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸编码选自下组的多肽：如本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合片段；或如本专利技术第二方面所本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种特异性靶向BCMACAR的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区包含以下三个互补决定区CDR：
2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:2所示。
3.在如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
4.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体为兔源的单克隆抗体。
5.如权利要求1-4任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合BCMA CAR中的scFv，所述BCMACAR中的scFv为C11D5.3，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
6.一种用于检测BCMACAR阳性细胞的检测试剂，所述检测试剂包括：
7.如权利要求6所述的抗体，其特征在于，所述检测试剂还包括第二检测试剂，所述第二检测试剂特异性结合于第一抗体或偶联于第一抗体的标记物。
8.一种用于检测BCMACAR阳性细胞的试剂盒，所述试剂盒包含：
9.一种如权利要求1所述的抗体的用途，
10.一种检测BCMACAR阳性细胞的方法，包括步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种特异性靶向bcmacar的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区包含以下三个互补决定区cdr：
2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如seqid no:2所示。
3.在如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:3所示。
4.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体为兔源的单克隆抗体。
5.如权利要求1-4任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合bcma car中的scfv，所述bcmac...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡阳，王宏飞，答亮，张亚茹，唐蓝香，周莹，
申请(专利权)人：苏州星湾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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