【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析化学领域，特别涉及一种利用高效液相色谱法测定依碳酸氯替泼诺原料药杂质物质的方法。
技术介绍
1、依碳酸氯替泼诺是一种新型的糖皮质激素类药物，具有抗眼角膜炎、各种眼内炎症和抗过敏作用，在体内可迅速代谢为无活性产物，高脂溶性，可以增强对细胞的渗透性，因其毒性小、抗炎作用强，被广泛应用于眼部炎症治疗。
2、依碳酸氯替泼诺化学名为17 α-(乙氧基羰基氧基)-11 β-羟基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17-羧酸氯甲基酯，结构式如下：
3、
4、在依碳酸氯替泼诺原料药的生产与贮存过程中，易引入起始物料杂质、工艺杂质中间体杂质、降解杂质等，中国药典、美国药典、欧洲药典等主流药典中均未收载依碳酸氯替泼诺原料药的杂质及其检测方法，国内外文献中也未对该原料药的杂质进行全面的分析，为更好地保证产品质量，严格地控制产品中的杂质含量，申请人从原料药中引入的杂质，生产过程中产生的副产物，产品降解产生的杂质三个方面对原料药杂质谱进行评估，确定依碳酸氯替泼诺原料的杂质谱如下：
5、
6、
7、
8、
9、现有的技术并未提供同一种检测方法，可同时准确定量检测依碳酸氯替泼诺原料药杂质a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、m、n、o，以便于更佳地质量控制依碳酸氯替泼诺原料药，这是本领域技术人员尚未解决的技术难题。因此开发一种能解决上述技术问题的依碳酸氯替泼诺原料及其杂
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于使用一种高效液相色谱法控制依碳酸氯替泼诺中的已知杂质，该方法通过精确筛选色谱柱，精确调节流动相添加酸的种类，并准确调整流动相中有机相的种类与比例以及梯度洗脱条件，实现杂质a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、m、n、o的有效分离，准确测得校正因子，并使用加校正因子的主成分外标法进行准确定量分析上述杂质，能够同时、快速、有效监测原料药中的杂质物质，从而提高对于依碳酸氯替泼诺原料药的质量控制。
2、本专利技术所述的杂质物质检测方法中杂质包含杂质a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、m、n、o，特别地，包含杂质c、d、e、f、h、i、m、n。
3、本专利技术所述的色谱柱为精确筛选得到，为苯基己基硅烷键合硅胶为填充剂的核壳柱，与现有技术使用的全多孔色谱柱相比，表现出优异的色谱分离度、更高的峰容量和更大的灵敏度，使所有杂质可以在50分钟内全部洗脱出，且均能实现有效分离，大大加快了分析速度。
4、本专利技术所述的流动相中有机相的种类与比例为乙腈-甲醇（体积比为85:15），根据不同化合物结构间的微小差异与在不同有机相中保留的差异，确定使用乙腈与甲醇的混合溶液作为流动相b，并确定乙腈与甲醇的体积比例为85:15。
5、本专利技术是通过如下技术方案实现的：一种利用高效液相色谱法测定依碳酸氯替泼诺原料药物质的方法，包括以下步骤：
6、步骤一：配置系统适用性溶液
7、取依碳酸氯替泼诺对照品与杂质d对照品，加体积比为75∶25的乙腈-水溶解并定量稀释制成每1ml中含依碳酸氯替泼诺0.3mg与杂质d 0.5μg的混合溶液；
8、步骤二：配置供试品溶液
9、取依碳酸氯替泼诺原料药精密称定，加体积比为75∶25的乙腈-水溶解并定量稀释制成每1ml中含0.3mg依碳酸氯替泼诺原料药的溶液；
10、步骤三：配置对照品溶液
11、取依碳酸氯替泼诺对照品，精密称定，加体积比为75∶25的乙腈-水溶解并定量稀释制成每1ml中含0.3μg依碳酸氯替泼诺对照品的溶液；
12、步骤四：配置灵敏度溶液
13、精密量取对照品溶液，用体积比为75∶25的乙腈-水定量稀释制成每1ml中含0.15μg依碳酸氯替泼诺对照品的溶液；
14、步骤五：色谱条件与系统适用性试验
15、用苯基己基硅烷键合硅胶为填充剂的核壳柱；以0.09％~0.11％磷酸溶液为流动相a，以乙腈-甲醇（体积比85:15）为流动相b；按下表进行线性梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为25~35℃；检测波长为244nm；进样体积为10μl；进样器温度为5℃±2℃；精密量取系统适用性溶液与灵敏度溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
16、；
17、步骤六：测定法
18、精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；检测器为紫外检测器；将杂质a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、m、n、o的计算方式定为加校正因子的主成分自身对照法，绘制主成分浓度和杂质浓度对其峰面积的回归直线，以主成分回归直线斜率与杂质回归直线斜率的比得到校正因子，载入本品种杂质物质检测方法中，用于校正杂质的实测峰面积，采用相对保留时间定位各杂质，其数值一并载入本方法杂质物质检测方法中，使以上杂质的定量准确度达到90%~108%范围内；
19、各成分相对保留时间和校正因子如下表所示：
20、；
21、计算公式：
22、；
23、；
24、式中：a样为供试品溶液中相应杂质的峰面积；
25、a对为对照品溶液中主峰的峰面积；
26、c对为对照品溶液中依碳酸氯替泼诺的浓度（mg/ml)；
27、c样为供试品溶液的浓度（mg/ml)；
28、 f为各杂质校正因子。
29、优选的，步骤五中，色谱柱为phenomenex kinetex®phenyl-hexyl（4.6mm×150mm，2.6μm）或效能相当的色谱柱。
30、优选的，步骤五中，磷酸溶液的浓度为0.10%。
31、优选的，步骤五中，柱温为30℃。
32、优选的，步骤五中，系统适用性溶液色谱图中，依碳酸氯替泼诺峰与杂质d峰间的分离度不小于2.0；灵敏度溶液色谱图中，主成分色谱峰高的信噪比不小于10。
33、本专利技术所述的流动相添加酸的种类为0.09％~0.11％磷酸溶液，磷酸与其他酸（如冰醋酸）相比，紫外本底更低，背景噪音更小，灵敏度更高，见图7。
34、上述方法参照高效液相色谱法（中国药典2020年版四部通则0512）测定。避光操作。
35、与现有技术相比，本专利技术的有益之处为：
36、本专利技术通过精确筛选色谱柱，精确调节流动相添加酸的种类，并准确调整流动相中有机相的种类与比例以及梯度洗脱条件，实现杂质a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、m、n、o的有效分离，使用加校正因子的主成分外标法准确定量上述杂质，并准确测得校正因子，能够同时、快速、有效监测依碳酸氯替泼诺的杂质物质，从而提高对于依碳酸氯替泼诺原料药的质本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种利用高效液相色谱法测定依碳酸氯替泼诺原料药杂质物质的方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种利用高效液相色谱法测定依碳酸氯替泼诺原料药杂质物质的方法，其特征在于：步骤五中，系统适用性溶液色谱图中，依碳酸氯替泼诺峰与杂质D峰间的分离度不小于2.0；灵敏度溶液色谱图中，主成分色谱峰高的信噪比不小于10。
3.根据权利要求1所述的一种利用高效液相色谱法测定依碳酸氯替泼诺原料药杂质物质的方法，其特征在于：步骤五中，色谱柱为Phenomenex Kinetex® Phenyl-Hexyl（4.6mm×150mm，2.6μm），磷酸溶液的浓度为0.1%，柱温为30℃。
【技术特征摘要】
1.一种利用高效液相色谱法测定依碳酸氯替泼诺原料药杂质物质的方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种利用高效液相色谱法测定依碳酸氯替泼诺原料药杂质物质的方法，其特征在于：步骤五中，系统适用性溶液色谱图中，依碳酸氯替泼诺峰与杂质d峰间的分离度不小于2.0；灵敏度溶液色谱图中，...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨峰伟，马骋瑶，韩小瑞，郭晨，申传秀，
申请(专利权)人：济南辰欣医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。