沉默食管癌细胞ＨＩＦ－１α基因２９ＳｈＲＮＡ表达载体的构建制造技术

本发明专利技术公开了一种沉默食管癌细胞ＨＩＦ－１α基因２９ｓｈＲＮＡ表达载体的构建，依据ＮＣＢＩ数据库获得的ＨＩＦ－１α基因ＩＤ，利用ＷＨＩＴＥＨＯＵＳＥ，ＳｉＤｉｒｅｃｔ和ＲａｔｉｏｎａｌｓｉＲＮＡ?Ｄｅｓｉｇｎ软件预测设计ｓｉＲＮＡ干扰序列，并利用ＢＬＡＳＴ分析干扰序列与人类全基因组的同源性；将ｓｉＲＮＡ序列转换成编码ｓｈＲＮＡ的ＤＮＡ序列后克隆入ｐＥＮＴＲＴＭ／Ｈ１／ＴＯ载体，成功构建ＨＩＦ－１α基因ｓｈＲＮＡ表达载体，并能有效抑制食管癌细胞ＨＩＦ－１α的表达，为以ＨＩＦ－１α为靶标的食管癌新药开发和基因治疗提供了新材料。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种沉默食管癌细胞ＨＩＦ－１α基因２９ＳｈＲＮＡ表达载体的构建，其特征在于：包括下述步骤：　　（１）根据ＮＣＢＩ获取ＮＭ＿００１５３０．３，设计正义链５’ＣＴＡＣＴＣＡＧＧＡＣＡＣＡＧＡＴＴＴＡＧＡＣＴＴＧＧＡＧ’的２９寡核苷酸干扰序列；（２）以ｐＥＮＴＲ／Ｈ１／ＴＯ为载体，依据质粒的插入位点和接头结构设计编码ｓｈＲＮＡ的单链ＤＮＡ　ｏｌｉｇｏｓ，在正义链序列５’加入连接序列ＣＡＣＣＡ，中部加入ｌｏｏｐ环（ＧＡＧＡ）结构，反义链５’端加ＡＡＡＡ连接序列，３’端加Ｔ；设计最终连接的编码ｓｈＲＮＡ的ＤＮＡ序列为正向：ＣＡＣＣＡ　ＣＴＡＣＴ　ＣＡＧＧＡ　ＣＡＣＡＧ　ＡＴＴＴＡ　ＧＡＣＴＴ　ＧＧＡＧＧ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：汲振余，康巧珍，郭欢，孙蕾，赵立群，杨观瑞，阎红霞，张亚冰，张聚真，杨小静，裘一兵，
申请(专利权)人：河南省医药科学研究院，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]