MERS簇穿山甲冠状病毒MjHKU4r CoV-1复制子质粒、细胞系和应用制造技术

本发明专利技术涉及冠状病毒技术领域，尤其是一种MERS簇穿山甲冠状病毒MjHKU4r CoV‑1复制子质粒、细胞系和应用。复制子质粒为包括MjHKU4r CoV‑1基因组5’和3’UTR序列以及复制酶相关基因ORF1ab、核衣壳蛋白(N)基因，以及新霉素磷酸转移酶(Neo)基因和Nanoluc荧光素酶报告基因，并且包含有CMV真核启动子、HDV核酶和BGH终止信号的pBeloBAC11载体。该复制子质粒及细胞系的操作不涉及且不会产生MERS簇穿山甲冠状病毒MjHKU4r CoV‑1活病毒粒子，比传统进行相关活病毒粒子的实验操作更安全、方便且成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及冠状病毒，具体领域为mers簇穿山甲冠状病毒mjhku4r cov-1复制子质粒、细胞系的构建和用于药物筛选的方法。

技术介绍

1、中东呼吸综合征(middle east respiratory syndrome，mers)自2012年在中东地区爆发以来，涉及的国家和地区27个，其中以沙特阿拉伯报道的病例最多，死亡率高达35％。而引起中东呼吸综合征的动物性病原——中东呼吸综合征冠状病毒(middle eastrespiratory syndrome coronavirus，mers-cov)，其直接来源宿主为单峰骆驼。mers-cov在系统发育上与bat coronavirus hku4和bat coronavirus hku5以及蝙蝠mers相关冠状病毒(mers-related coronavirus，mersr-cov)相近，表明这些冠状病毒具有共同的进化起源，并将其统称为蝙蝠mers簇冠状病毒。

2、专利技术人研究团队基于前期基分离获得的病毒，对mjhku4r cov-1开展的跨种传播风险相关研究，通过实验已经证实其能利用本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种MERS簇穿山甲冠状病毒MjHKU4r CoV-1复制子质粒，其特征在于：包括MERS簇穿山甲冠状病毒MjHKU4r CoV-1基因组的5’端和3’端UTR序列、复制酶基因ORF1a、ORF1b基因和核衣壳蛋白N基因，以及新霉素磷酸转移酶Neo基因和Nanoluc荧光素酶报告基因，上述基因被插入在CMV真核启动子、HDV核酶和BGH终止信号的pBeloBAC11载体上；其中，MERS簇穿山甲冠状病毒MjHKU4r CoV-1复制子质粒序列如SEQ ID NO：1所示。

2.权利要求1所述的MERS簇穿山甲冠状病毒MjHKU4r CoV-1复制子质粒的构建方法，其特征在...

【技术特征摘要】

1.一种mers簇穿山甲冠状病毒mjhku4r cov-1复制子质粒，其特征在于：包括mers簇穿山甲冠状病毒mjhku4r cov-1基因组的5’端和3’端utr序列、复制酶基因orf1a、orf1b基因和核衣壳蛋白n基因，以及新霉素磷酸转移酶neo基因和nanoluc荧光素酶报告基因，上述基因被插入在cmv真核启动子、hdv核酶和bgh终止信号的pbelobac11载体上；其中，mers簇穿山甲冠状病毒mjhku4r cov-1复制子质粒序列如seq id no：1所示。

2.权利要求1所述的mers簇穿山甲冠状病毒mjhku4r cov-1复制子质粒的构建方法，其特征在于：将mers簇穿山甲冠状病毒mjhku4r cov-1病毒基因组5’端utr区域和orf1a/orf1b基因的序列分割成6个连续的片段a-f；

3.一种mers簇穿山甲冠状病毒mjhku4r cov-1复制子细胞系的构建方法，其特征在于：通过利用脂质体转染试剂，将mers簇穿山甲冠状病毒mjhku4r cov-1复制子质粒转染至bhk21细胞，然后在0.5mg/ml新霉素g418的条件选择环...

【专利技术属性】
技术研发人员：石正丽，吴春光，陈静，朱燕，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：